سڌو RT-qPCR کٽ II
کٽ جي وضاحت:
◮Direct RT-qPCR Kit، Foreasy Reverse Transcriptase ۽ Foreasy HS Taq DNA Polymerase استعمال ڪندي Foregene پاران تيار ڪيل، منفرد رد عمل جي بفر سان، ھن کٽ کي مضبوط مزاحمت ۽ مطابقت سان ٺاھيو آھي، ۽ اھو سڌو سنئون رد عمل کي آزمائي سگھي ٿو Foregene Lysis سسٽم کي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪري.هي ڪٽ COVID-19 نيوڪليڪ ايسڊ ڊيٽڪشن ڪٽ ۽ ٻين پيٽروجنڪ بيڪٽيريا نيوڪليڪ ايسڊ ڊيٽڪشن ڪٽ ڊولپمينٽ لاءِ لاڳو ٿي سگهي ٿي.
وصف
Direct RT-qPCR کٽ مهيا ڪري ٿي الڳ طور تي پيڪيج ٿيل RT-qPCR بفر، اعليٰ ڪارائتو HS Taq DNA Polymerase۽ Foreasy Reverse Transscriptase (MMLV)،انهي کي آسان بنائڻ لاءِ پٺتي پيل ڪِٽس ۽ سسٽم جي ترتيب جي ترتيب، سادي تصديق جي اندر.
Direct RT-qPCR Kit، Foreasy Reverse Transcriptase ۽ Foreasy HS Taq DNA Polymerase استعمال ڪندي Foregene پاران تيار ڪيل، منفرد رد عمل جي بفر سان، ھن کٽ کي مضبوط مزاحمت ۽ مطابقت سان ٺاھيو آھي، ۽ اھو سڌو سنئون رد عمل کي آزمائي سگھي ٿو Foregene Lysis سسٽم کي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪري.هي ڪٽ COVID-19 نيوڪليڪ ايسڊ ڊيٽڪشن ڪٽ ۽ ٻين پيٽروجنڪ بيڪٽيريا نيوڪليڪ ايسڊ ڊيٽڪشن ڪٽ ڊولپمينٽ لاءِ لاڳو ٿي سگهي ٿي.
هي کٽ سڌي طرح IVD پراڊڪٽ جو حصو ٿي سگهي ٿو، آساني سان ۽ تيز استعمال ڪندي.اهو صرف آسان تصديق جي ضرورت آهي، بغير ٻيهر ترقي ڪرڻ جي.
وضاحتون
500T، 50,000T
کٽ جا اجزاء
| کٽ جو مواد (20 μL ردعمل سسٽم) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ٽي | 50,000 ٽي | |
| فاريسي آرeverse transscriptase (200 يو/μL) | 50 μL×1 | 1 ايم ايل×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 يو/μL) | 100 μL×1 | 1 ايم ايل×10 |
| 2 × سڌو RT-qPCRبفر | 1 ايم ايل × 5 | 500 ايم ايل × 1 |
| هدايت | 1 | 1 |
آپريٽنگ مرحلا
ج: ٽيمپليٽ ۽ reagent جي تياري
1. تيار ڪيل آر اين اي ٽيمپليٽ تيار ڪريو (آر اين اي ٽيمپليٽ کي ڪڍڻ ۽ صاف ڪرڻ لاءِ Foregene Total RNA Isolation Kit سيريز کٽ استعمال ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي) يا سيمپل ڪيڪنگ پراڊڪٽ (اهو سفارش ڪئي وئي آهي ته Foregene Lysis سسٽم استعمال ڪيو وڃي)، مخصوص پرائمر (10 μM) ۽ ٻيا لاڳاپيل استعمال ٿيندڙ سامان، اوزار.
2. 2× Direct RT-qPCR بفر، RNase-Free ddH2O ۽ 20× ROX ريفرنس ڊائي (جيڪڏهن ضرورت هجي) برف سان دٻي ۾ رکو، انهن کي قدرتي طور تي پگھلايو، ۽ نرمي سان ملايو.
ب: RT-qPCR سسٽم تيار ڪريو
رد عمل واري نظام جي رد عمل جي بفر جو اڌ مقدار حاصل ڪريو (مثال طور، جيڪڏهن سسٽم جو حجم 20 μL آهي، ان کي حاصل ڪرڻ جي ضرورت آهي 10 μL 2× Direct RT-qPCR بفر). لاءِenzyme جي برابر مقدار، اسان اهو مشورو ڏيون ٿاM-MLV: 10-30 U/20 μL رد عمل سسٽم,طاقڊي اين اي پوليمريز:1-2 U/20 μL ردعمل سسٽمهي اسان جي صلاح آهي، توهان کي جانچڻ گهرجي ۽ ان کي ترتيب ڏيو)، شامل ڪريو آر اين اي ٽيمپليٽ، مخصوص پرائمر ۽ پروبس، ۽ شامل ڪريو RNase-Free ddH2O کان 20 μL.RT-qPCR ردعمل سسٽم جي مخصوص تياري هيٺ ڏنل جدول 1 ڏانهن اشارو ڪري سگهجي ٿو.
ٽيبل 1: RT-qPCR سسٽم تيار ڪريو
| جزو | حجم | آخري ڪنسنٽريشن |
| 2 × سڌو RT-qPCR بفر | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transscriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 يو | |
| فارورڊ پرائمر (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ريورس پرائمر (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| تحقيق (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| سانچو(RNA يا Lysate) | ايڪس μL | |
| 20 × ROX حوالو رنگ | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| ڪل مقدار | 20 μL |
نوٽ: فارورڊ پرائمر ۽ ريورس پرائمر ٽارگيٽ جين جا مخصوص پرائمر آھن.qPCR جو نظام عملي تجرباتي ۽ PCR ماڊلز جي مطابق ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.اسان سفارش ڪريون ٿا 400nM اڪثر پرائمر جي آخري ڪنسنٽريشن لاءِ.مھرباني ڪري تيار ڪيل ڪنسنٽريشن ۽ تجويز ڪيل آخري ڪنسنٽريشن جي مطابق مخصوص پرائمر ۽ پروب جي مقدار کي ترتيب ڏيو.
1*: مختلف مقداري PCR آلات جي مطابق ROX ريفرنس ڊائي جي مناسب حتمي ڪنسنٽريشن چونڊيو.عام مقدار جي PCR آلات جي بهترين ROX ريفرنس ڊائي ڪنسنٽريشن هيٺ ڏنل جدول ۾ ڏيکاريل آهي:
| مقداري PCR اوزار | ROX ريفرنس ڊائي جي آخري ڪنسنٽريشن |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/قدم هڪ،وغيره | 1× (مثال طور، 20 μL ردعمل سسٽم ۾ 1μl 20×ROX ريفرنس ڊائي شامل ڪريو) |
| ABI 7500، 7500 فاسٽ، Stratagene Mx3000P، Mx3005P ۽ Mx4000، وغيره. | 0.5× (مثال طور، 20 μL ردعمل سسٽم ۾ 0.5μl 20×ROX ريفرنس ڊائي شامل ڪريو) |
| Roche PCR اوزار، Bio-Rad PCR اوزار، Eppendorf quantitative PCR اوزار، وغيره. | بغير ROX ريفرنس ڊائي |
اسٽوريج ۽ شيلف زندگي
کٽ کي ذخيرو ڪرڻ گهرجي -20 ± 5 ℃.اهو فوري طور تي محفوظ ڪيو وڃي -20 ℃ thermostatic فرج ۾.صحيح مدت 2 سال آھي جيڪڏھن اھو مناسب حالت ۾ محفوظ ڪيو وڃي.
