Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Purification Kits سيل مان
کٽ جي وضاحت:
11 منٽن ۾ مختلف ڪلچر ٿيل سيلز مان تمام گهڻي صاف ۽ اعليٰ معيار جي ڪل آر اين اي حاصل ڪري سگهجي ٿي.
RNase-مفت
ڪمري جي حرارت تي ڪم ڪيو ويو (15-25 ℃)
ڊي اين اي-صفائي ڪالمن سان
اعلي آر اين اي پيداوار
فاسٽ: 11 منٽن ۾ ڪڍڻ ختم ڪريو
حفاظت: ڪو به نامياتي ڪيميائي
وصف
هي ڪٽ اسپن ڪالم ۽ فارمولا استعمال ڪري ٿو جيڪو Foregene پاران تيار ڪيو ويو آهي، جيڪو 96، 24، 12، ۽ 6-ويل پليٽس ۾ ڪلچر ٿيل سيلز مان اعليٰ پاڪيزگي ۽ اعليٰ معيار جي ڪل RNA کي موثر طريقي سان ڪڍي سگهي ٿو.
کٽ هڪ موثر ڊي اين اي-ڪليننگ ڪالمن مهيا ڪري ٿي، جيڪا آساني سان سپرنيٽنٽ ۽ سيل ليسٽ کي الڳ ڪري سگهي ٿي، جينومڪ ڊي اين اي کي پابند ۽ ختم ڪري سگهي ٿي.آپريشن سادو ۽ وقت جي بچت آهي.
Tهي آر اين اي صرف ڪالم هڪ منفرد فارمولي سان آر اين اي کي موثر طريقي سان پابند ڪري سگهي ٿو.نموني جو هڪ وڏو تعداد هڪ ئي وقت تي عمل ڪري سگهجي ٿو.
کٽ جا اجزاء
| کٽ جي جوڙجڪ | ري-03111 | ري-03114 |
| 50 ٽي | 200 ٽي | |
| بفر cRL1* | 25 ملي | 100 ملي |
| بفر cRL2 | 15 ملي | 60 ملي |
| بفر RW1* | 25 ملي | 100 ملي |
| بفر RW2 | 24 ملي | 96 ملي |
| RNase-مفت ddH2O | 10 ملي | 40 ملي |
| آر اين اي صرف ڪالمن | 50 | 200 |
| ڊي اين اي-صفائي ڪالمن | 50 | 200 |
| هدايت | 1 | 1 |
*مهرباني ڪري دستانا پائڻ ۽ آپريشن دوران حفاظتي اپاءَ ورتا، جيئن بفر cRL1 ۽ بفر RW1 ۾ خارش پيدا ڪندڙ ٿلهو لوڻ شامل آهن.
خاصيتون ۽ فائدا
■ سڄو عمل ڪمري جي گرمي پد (15-25 ℃) تي هلايو ويندو آهي، بغير برف غسل ۽ گهٽ درجه حرارت سينٽرفيوگريشن.
■ سڄي کٽ RNase-Free آهي، RNA جي خراب ٿيڻ بابت پريشان ٿيڻ جي ڪا ضرورت ناهي.
■ DNA-ڪليننگ ڪالمن خاص طور تي ڊي اين اي کي پابند ڪري ٿو، ته جيئن کٽ اضافي DNase شامل ڪرڻ کان سواءِ جينومڪ ڊي اين اي آلودگي کي ختم ڪري سگهي.
■ اعليٰ آر اين اي پيداوار: آر اين اي صرف ڪالمن ۽ منفرد فارمولا موثر طريقي سان آر اين اي کي صاف ڪري سگھن ٿا.
■ تيز رفتار: هلائڻ ۾ آسان ۽ 11 منٽن ۾ مڪمل ٿي سگهي ٿو.
■ حفاظت: ڪا به نامياتي ريجنٽ گهربل ناهي.
■ اعليٰ معيار: صاف ٿيل آر اين اي اعليٰ پاڪيزگي جو آهي، پروٽين ۽ ٻين ناپاڪيءَ کان پاڪ آهي، ۽ ايندڙ مختلف تجربن کي پورو ڪري سگهي ٿو.
ڪٽ ايپليڪيشن
اهو 96، 24، 12، ۽ 6-سٺي پليٽن ۾ ڪل آر اين اي جي ڪلچرل سيلز مان ڪڍڻ ۽ صاف ڪرڻ لاء مناسب آهي.
ڪم جي وهڪري
خاڪو
سيل ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ جو ايگرز جيل بيٽري ڊاگرام مٿي ڏنل مختلف نمبرن جي سيلز جو علاج ڪيو، 20μl حجم ايليوشن، 2μl صاف ڪيل ڪل RNA 1٪ وٺو.
اسٽوريج ۽ شيلف زندگي
کٽ کي 12 مهينن لاءِ ڪمري جي گرمي پد (15–25 ℃) يا 2–8 ℃ وڌيڪ وقت (24 مهينن) لاءِ محفوظ ڪري سگهجي ٿو.
بفر cRL1 2-hydroxy-1-ethanethiol (اختياري) شامل ڪرڻ کان پوء 1 مهيني لاء 4 ℃ تي ذخيرو ٿي سگھي ٿو.
آر اين اي نه ڪڍيو ويو آهي يا آر اين اي جي پيداوار گهٽ آهي
عام طور تي ڪيترائي عنصر آھن جيڪي وصولي جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪن ٿا، جھڙوڪ: ٽشو نموني آر اين اي مواد، آپريشن جو طريقو، ايليوشن حجم، وغيره.
1. آئس باٿ يا ڪريوجينڪ (4 °C) سينٽرفيوگريشن آپريشن دوران ڪيو ويو.
سفارش: سڄي عمل دوران ڪمري جي گرمي پد (15-25 ° C) تي ڪم ڪريو، برفاني غسل نه ڪريو ۽ گهٽ درجه حرارت تي سينٽرفيوج.
2. غلط نموني جي بچاءُ يا گھڻي نموني رکڻ جو وقت.
سفارش: نمونن کي -80 °C تي ذخيرو ڪريو يا مائع نائٽروجن ۾ منجمد ڪريو ۽ بار بار منجمد ٿيل استعمال کان پاسو ڪريو؛آر اين اي ڪڍڻ لاءِ تازو ٽشو يا ڪلچر ٿيل سيلز استعمال ڪرڻ جي ڪوشش ڪريو.
3. ناکافي نموني ليسس.
سفارش: جڏهن ٽشو کي هڪجهڙائي ڪرڻ گهرجي، پڪ ڪريو ته ٽشو ڪافي طور تي هڪجهڙائي سان ٺهيل آهي ۽ آر اين اي جي ڇڏڻ جي وضاحت ڪرڻ لاء ٽشو سيلز ڪافي ورهايل آهن.
4. ايليوئنٽ صحيح طرح شامل نه ڪيو ويو آهي.
سفارش: تصديق ڪريو ته RNase-Free ddH2O شامل ڪيو ويو آھي dropwise کي صاف ڪرڻ واري ڪالمن جھلي جي وچ ۾.
5. مطلق ايٿانول جو صحيح مقدار بفر RL2 يا بفر RW2 ۾ شامل نه ڪيو ويو.
سفارش: هدايتن تي عمل ڪريو، Buffer RL2 ۽ Buffer RW2 ۾ مطلق ايٿانول جو صحيح مقدار شامل ڪريو ۽ کٽ استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱيءَ طرح ملايو.
6. ٽشو نموني dosage مناسب نه آهي.
سفارش: استعمال ڪريو 10-20 ملي گرام ٽشو يا (1-5) × 106سيلز في 500 μl بفر RL1، جيئن گھڻي ٽشو استعمال ڪرڻ جي نتيجي ۾ آر اين اي جي گھٽتائي ٿي سگھي ٿي.
7. نامناسب ايليوشن حجم يا نامڪمل اخراج.
سفارش: صاف ڪرڻ واري ڪالمن جو ايليوشن حجم 50-200 μl آهي.جيڪڏهن ايليوشن جو اثر اطمينان بخش نه آهي، ته اڳي گرم ٿيل RNase-Free ddH شامل ڪرڻ کان پوءِ ڪمري جي گرمي پد جي مقرري جو وقت وڌائڻ جي سفارش ڪئي ويندي آهي.2اي، مثال طور 5-10 منٽ لاء.
8. صاف ڪرڻ واري ڪالمن ۾ بفر RW2 ڌوئڻ کان پوءِ ايٿانول رهجي وئي آهي.
سفارش: جيڪڏهن Buffer RW2 ڌوئڻ کان پوءِ ايٿانول جي رهجي وئي آهي، خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن 1 منٽ لاءِ، خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن آپريشن جو وقت 2 منٽ تائين وڌائي سگھجي ٿو، يا صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽ لاءِ رکي سگهجي ٿو ته جيئن مناسب طور تي ايٿانول کي هٽائي سگهجي.
صاف ٿيل آر اين اي خراب ٿي وئي آهي
صاف ٿيل آر اين اي جي معيار جو تعلق عنصرن سان آهي جهڙوڪ نموني جي حفاظت، آر اين جي آلودگي، ۽ هٿرادو، وغيره.
1. ٽشو جا نمونا وقت ۾ نه رکيا ويا آهن.
سفارش: جيڪڏهن ٽشو جا نمونا يا سيلز گڏ ڪرڻ کان پوءِ بروقت استعمال نه ڪيا ويا آهن، فوري طور تي -80 ° C يا مائع نائٽروجن تي cryopreserve ڪريو.آر اين اي ڪڍڻ لاءِ، جڏهن به ممڪن هجي، نئون ورتو ٽشو يا سيل جو نمونو استعمال ڪريو.
2. ٽشو جي نمونن کي بار بار منجمد ڪرڻ.
سفارش: ٽشو جي نمونن کي ذخيرو ڪرڻ وقت، اهو بهتر آهي ته انهن کي محفوظ ڪرڻ لاء ننڍن ٽڪرن ۾ ڪٽي، ۽ نموني جي بار بار منجمد ٿيڻ ۽ آر اين اي جي خراب ٿيڻ کان بچڻ لاء انهن کي استعمال ڪرڻ وقت انهن مان هڪ ٽڪر ڪڍي ڇڏيو.
3. آپريشن دوران RNase متعارف ڪرايو يا نه پائڻ وارو ڊسپوزيبل دستانو، ماسڪ وغيره.
تجويز: آر اين اي ڪڍڻ جا تجربا بهترين طور تي الڳ الڳ آر اين اي مينيپوليشن ڪمرن ۾ ڪيا ويندا آهن ۽ ميز کي تجربي کان اڳ صاف ڪيو ويندو آهي.
تجربو دوران ڊسپوزيبل دستانو ۽ ماسڪ پائڻ لاءِ آر اين اي جي تباهي کي گھٽائڻ لاءِ جيڪو RNase جي تعارف جي ڪري ٿي.
4. Reagents استعمال دوران RNase سان آلوده آهن.
تجويز: لاڳاپيل تجربن لاءِ نئين اينيمل ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ سان مٽايو.
5. آر اين اي جي ڦيرڦار ۾ استعمال ٿيندڙ سينٽريفيوج ٽيوب، ٽپ وغيره RNase سان آلوده آهن.
سفارش: پڪ ڪريو ته آر اين اي ڪڍڻ ۾ استعمال ٿيندڙ سينٽريفيوج ٽيوب، ٽپس، پائپيٽ وغيره سڀ RNase-مفت آهن.
صاف ٿيل حاصل ڪيل آر اين اي هيٺئين پاسي جي تجربن کي متاثر ڪري ٿو
آر اين اي پيوريفڪيشن ڪالمن ذريعي پاڪ ڪيو ويو آهي، جيڪڏهن لوڻ آئنز، پروٽين جو مواد تمام وڏو آهي ته هيٺئين پاسي واري تجربي کي متاثر ڪندو، جهڙوڪ: ريورس ٽرانسڪرپشن، ناردرن بلٽ وغيره.
1. خارج ٿيل آر اين اي ۾ لوڻ آئن جا باقي بچيل آهن.
سفارش: تصديق ڪريو ته ايٿانول جو صحيح مقدار بفر RW2 ۾ شامل ڪيو ويو آهي ۽ آپريشن لاءِ اشارو ڪيل سينٽرفيوگل اسپيڊ تي 2 صاف ڪرڻ واري ڪالمن واش کي انجام ڏيو؛جيڪڏهن ڪو لوڻ آئن جي باقي رهي ٿي، صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي بفر RW2 تي 5 منٽ لاءِ ڪمري جي حرارت تي ڇڏي ڏيو ۽ لوڻ جي آلودگي کي وڌ کان وڌ ختم ڪرڻ لاءِ سينٽرفيوگريشن انجام ڏيو.
2. خارج ٿيل آر اين اي ۾ ايٿانول جي باقيات.
سفارش: تصديق ڪريو ته بفر RW2 ڌوئڻ کان پوءِ، خالي ٽيوب سينٽريفيوگريشن آپريشن کي انجام ڏيو سينٽرفيوگريشن اسپيڊ تي جيڪو آپريشن لاءِ اشارو ڪيو ويو آهي، خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن آپريشن جو وقت 2 منٽ تائين وڌايو جيڪڏهن اڃا به ايٿانول باقي رهي ٿي، يا ان کي ڪمري جي حرارت تي 5 ميٽر تائين ڇڏي ڏيو.
