مسئلن جي تجزيي جي ھدايت

هيٺ ڏنل تجزيي جي مسئلن جو توهان کي منهن ڏئي سگھي ٿوٻوٽن جو ڪلRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

اسپن ڪالم بند ٿيل آهي

اسپن ڪالمن جي بلاڪ ٿيڻ سبب آر اين اي جي حاصلات گھٽجي ويندي يا آر اين اي حاصل ڪرڻ لاءِ ان کي صاف ڪرڻ جي قابل نه هوندو، ۽ حاصل ڪيل آر اين اي جو معيار گهٽ ٿيندو.

عام سببن جو تجزيو:

1. نموني مڪمل طور تي ڀڃي نه آهي.

نامڪمل نموني جي ٽڪراءَ DNA-ڪليننگ ڪالمن کي بلاڪ ڪري سگهي ٿي، جيڪو پڻ RNA جي پيداوار ۽ معيار کي متاثر ڪري سگهي ٿو.اسان سفارش ڪريون ٿا ته جڏهن نمونن جي ٽڪراءَ کي انجام ڏيو، جلدي طور تي ڪافي مقدار ۾ مائع نائٽروجن کي پيس ڪريو جيئن ٽشوز کي ٽوڙڻ لاءِ جيئن سيل جي ڀتين ۽ نمونن جي سيل جھلي کي جيترو ٿي سگهي.پوليفينول پوليسڪرائڊس جي ٻوٽن جي نمونن لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توھان پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ پلس استعمال ڪريو.

2. ڊي اين اي-ڪليننگ ڪالمن کي الڳ ٿيل سپرنيٽنٽ کي اسپيريٽ ڪريو، ممڪن سيل ڊيبرس پيلٽ کي اسپيريٽ ڪريو.

Aspirated cell debris pellet RNA-only Column کي روڪي سگھي ٿو آر اين اي جذب ڪرڻ جي طريقيڪار دوران (ڏسو عمل جو مرحلو 5، پوليسڪچرائڊ پوليفينول جي عمل جو مرحلو 6).اسان سفارش ڪريون ٿا ته احتياط وٺڻ گهرجي جڏهن هن سپرنيٽنٽ کي اسپيريٽ ڪيو وڃي ته جيئن سيل جي ملبي کان بچڻ لاءِ.

3. نموني جي شروعاتي رقم تمام وڏي آهي.

وڌيڪ نموني استعمال جي نتيجي ۾ بفر PRL1 يا Buffer PSL1 ذريعي سيلز جي نامڪمل نموني جي ٽڪراءَ يا نامڪمل lysis جو نتيجو ٿيندو، جنهن جي نتيجي ۾ صفائي جي عملن لاءِ بند ٿيل صاف ڪرڻ وارو ڪالم هوندو.پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ ۾ ابتدائي وڌ ۾ وڌ 50 ملي گرام في هڪ هلندڙ نموني جي صفائي آهي.پوليفينول پولي سيڪرائڊس جي ٻوٽن جي نمونن لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توھان ڪوشش ڪريو Plant Total RNA Isolation Kit Plus.

4. سينٽرفيوج جو گرمي پد تمام گهٽ آهي.

مڪمل آر اين اي آئسوليشن ۽ صاف ڪرڻ کان سواءِ مائع نائيٽروجن نموني جي ٽشو جي خلل، سڀ مرحلا ڪمري جي گرمي پد (20-25 ° C) تي ڪيا ويندا آهن.ڪجھ گھٽ درجه حرارت سينٽرفيوجز ۾ 20 °C کان گھٽ درجه حرارت ھوندو آھي، جيڪو DNA-ڪليننگ ڪالمن ۽/يا RNA-صرف ڪالمن ۾ رڪاوٽ جو سبب بڻجي سگھي ٿو.جيڪڏهن ائين ٿئي ٿو، سينٽرفيوج جي گرمي پد کي 20-25 °C تي مقرر ڪريو ۽ ليسس مرکب کي اڳ ۾ گرم ڪريو ۽/يا ايٿانول علحدگي واري سپرنٽنٽ کي 37 °C تي شامل ڪريو.

ڪوبه آر اين اي ڪڍيو ويو يا آر اين اي جي پيداوار گهٽ ناهي

عام طور تي ڪيترائي عنصر آھن جيڪي وصولي جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪن ٿا، جھڙوڪ: نمونو آر اين اي مواد، آپريشن جو طريقو، ايليوشن حجم، وغيره.

هيٺ ڏنل عام سببن جو تجزيو:

1. آپريشن دوران برف جو غسل يا گھٽ درجه حرارت (4 ° C) سينٽرفيوگريشن ڪيو ويو.

تجويز: سڄي عمل ۾ ڪمري جي گرمي پد (15-25 ° C) تي ڪم ڪريو، برف غسل ۽ گهٽ درجه حرارت سينٽرفيوگريشن نه ڪريو.

       2.آر اين اي کي خراب ڪيو ويو آهي ڇاڪاڻ ته نموني جي غلط تحفظ يا نموني جي ڊگهي مدت جي بچاء جي ڪري.

سفارش: تازو گڏ ڪيل نمونن کي جلدي مائع نائٽروجن ۾ منجمد ڪيو وڃي، ۽ پوءِ -80 ° C تي گهڻي وقت تائين ذخيرو ڪيو وڃي، نمونن کي بار بار منجمد ڪرڻ ۽ پگھلائڻ کان پاسو ڪيو وڃي؛يا فوري طور تي نمونن کي آر اين اي اسٽيبلائيزر RNAlater حل (جانورن جا نمونا) ۾ وجھو.

       3.ناکافي نموني ورهائڻ ۽ ليسس صاف ڪرڻ واري ڪالمن جي بلاڪ کي ڏسجي ٿو.

صلاح: ٽشو کي پيس ڪرڻ وقت، مھرباني ڪري پڪ ڪريو ته ٽشو ڪافي زمين تي آھي، ۽ ان کي جلدي اڳي تيار ڪيل بفر PSL1 ڏانھن منتقل ڪريو (تصديق ڪريو ته β-ME جو صحيح تناسب شامل ڪيو ويو آھي، عمل جو مرحلو 1 ڏسو).

4. ايليوئنٽ غلط شامل ڪيو ويو.

صلاح: پڪ ڪريو ته RNase-Free ddH₂اي صاف ڪرڻ واري ڪالمن جي جھلي جي وچ ۾ dripped آهي.

5. مطلق ايٿانول جو صحيح مقدار بفر PSL2 يا بفر PRW2 ۾ شامل نه ڪيو ويو.

صلاح: مھرباني ڪري ھدايتن تي عمل ڪريو، Buffer PSL2 ۽ Buffer PRW2 ۾ مطلق ايٿانول جو صحيح مقدار شامل ڪريو ۽ کٽ استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملايو.

6. ٽشو نموني جي مقدار نامناسب آهي.

صلاح: استعمال ڪريو 50 ملي گرام ٽشو في 500 μl بفر PSL1 جي.تمام گھڻو ٽشو استعمال ڪرڻ سان نڪتل RNA جو مقدار گھٽجي ويندو ۽ نتيجي ۾ نڪرندڙ RNA جي پاڪائي به گھٽجي ويندي.اسان سختي سان صلاح ڏيو ٿا ته ابتدائي نموني جي دوز 50 ملي گرام في آر اين اي ڪڍڻ واري آپريشن کان وڌيڪ نه هجڻ گهرجي.

7. نامناسب ايليوشن حجم يا نامڪمل ايليوشن.

صلاح: صاف ڪرڻ واري ڪالمن جو ايلوئنٽ حجم 50-200 μl آهي.جيڪڏهن ايليوشن جو اثر اطمينان بخش نه آهي، ته اڳي گرم ٿيل RNase-Free ddH شامل ڪرڻ کان پوءِ ڪمري جي حرارت تي وقت وڌائڻ جي سفارش ڪئي ويندي آهي.₂اي، جهڙوڪ 5-10 منٽ.

8. صاف ڪرڻ واري ڪالمن ۾ بفر PRW2 سان ڌوئڻ کان پوءِ ايٿانول باقي رهي ٿو.

   تجويز: جيڪڏهن خالي ٽيوب 1 منٽ لاءِ سينٽرفيوگر ٿي وڃي ۽ بفر PRW2 ۾ ڌوئڻ کان پوءِ به ايٿانول باقي آهي، ته توهان خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن جو وقت 2 منٽ تائين وڌائي سگهو ٿا، يا صاف ڪرڻ واري ڪالم کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽ لاءِ رکي سگهو ٿا ته جيئن باقي بچيل ايٿانول کي مڪمل طور تي هٽايو وڃي.

9. کٽ غلط استعمال ڪيو ويو.

   صلاح: ٻوٽن جي نموني لاءِ پولي فينولڪ پولي سيڪرائڊس، عام ڪِٽ استعمال ڪندي جيئن ته پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ مثالي آر اين اي نموني حاصل ڪرڻ جي قابل نه هوندا.اسان توهان کي پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ پلس استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏيو ٿا، جيڪو خاص طور تي پولي فينولڪ پوليسڪچرائيڊ پلانٽ جي نمونن لاءِ ٺهيل آهي.پوليفينول ۽ پولي سيڪريڊ پلانٽ جي نمونن مان آر اين اي ڪڍڻ لاءِ خاص طور تي تيار ڪيل کٽ.

OD260/OD280 قدر گھٽ آھي

ddH سان آر اين اي ايليوشن₂O ۽ اسپيڪٽرفوٽوميٽر پڙهڻ لاءِ استعمال ٿيل نتيجا گھٽ OD260/OD280 قدرن ۾.اسان استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏيو ٿا 10 mM Tris-HCl، pH 7.5 (بلڪه RNase-Free ddH جي بدران₂O to elute RNA) نسبتا صحيح OD260/OD280 قدر حاصل ڪرڻ لاءِ، ڏسو ”RNA ڪنسنٽريشن اينڊ پيوريفڪيشن اسيس“ صفحي 19 تي.

صاف ٿيل آر اين اي خراب ٿي وئي آهي

صاف ٿيل آر اين اي جي معيار جو تعلق عنصرن سان آهي جهڙوڪ نموني تحفظ، RNase آلودگي، ۽ هٿرادو.

عام سببن جو تجزيو:

1. ٽشو جا نمونا گڏ ڪرڻ کان پوء وقت ۾ محفوظ نه ڪيا ويا.

    تجويز: جيڪڏهن ٽشو جا نمونا گڏ ڪرڻ کان پوءِ وقت تي استعمال نه ڪيا ويا آهن، مهرباني ڪري انهن کي فوري طور تي مائع نائٽروجن ۾ گهٽ درجه حرارت تي ذخيرو ڪريو يا مائع نائٽروجن ۾ جلدي منجمد ٿيڻ کان پوءِ ڊگھي مدت جي اسٽوريج لاءِ -80 ° C تي منتقل ڪريو، يا فوري طور تي نمونن کي RNA اسٽيبلائزر RNAlater محلول (جانورن جا نمونا) ۾ وجھو.آر اين اي ڪڍڻ لاء، تازو گڏ ڪيل ٽشو نموني استعمال ڪرڻ جي ڪوشش ڪريو.

2. ٽشو جي نمونن کي بار بار منجمد ڪرڻ ۽ thawing.

   صلاح: ٽشو جي نمونن کي ذخيرو ڪرڻ وقت، اهو بهتر آهي ته انهن کي محفوظ ڪرڻ لاء ننڍن ٽڪرن ۾ ڪٽي، ۽ انهن کي استعمال ڪرڻ وقت انهن مان هڪ حصو ڪڍيو وڃي ته جيئن نمونن کي بار بار منجمد ڪرڻ ۽ گلڻ سبب RNA جي خراب ٿيڻ کان بچڻ لاء.

3.RNase آپريشن روم ۾ متعارف ڪرايو ويو آهي يا نه پائڻ وارو ڊسپوزيبل دستانو، ماسڪ وغيره.

   تجويز: آر اين اي ڪڍڻ جا تجربا الڳ الڳ آر اين اي آپريشنز ۾ بهترين طور تي ڪيا وڃن ٿا، ۽ تجربي کان اڳ ليبارٽري ٽيبل کي صاف ڪيو وڃي، ۽ تجربي دوران ڊسپوزيبل دستانو ۽ ماسڪ پائڻ گهرجن ته جيئن آر اين اي جي تباهيءَ کان بچي سگهجي، جيڪا تمام گهڻي حد تائين RNase جي متعارف ٿيڻ جي ڪري ٿي.

4.The reagent استعمال دوران RNase پاران آلوده آهي.

   تجويز: لاڳاپيل تجربن لاءِ ٻوٽن جي ٽوٽل آر اين اي ايڪسٽريشن ڪٽس جي نئين سيريز سان مٽايو.

5. آر اين اي جي ڦيرڦار لاءِ استعمال ٿيندڙ سينٽريفيوج ٽيوب ۽ پائپٽ جون ٽوپيون RNase سان آلوده آهن.

صلاح: پڪ ڪريو ته آر اين اي ڪڍڻ ۾ استعمال ٿيندڙ سينٽرفيوج ٽيوب، پائيپٽ ٽائيپ، پائپيٽ وغيره سڀ RNase-Free آهن.

هدايتون:

پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ ھدايت وارو دستور