بنيادي ماليڪيولر حياتيات جي اصطلاحن جي وضاحت
1. cDNA ۽ cccDNA: cDNA هڪ ٻٽي-اسٽرينڊ ڊي اين اي آهي جيڪو mRNA کان ريورس ٽرانسڪرپٽ ذريعي ٺهيل آهي.cccDNA ڪروموزوم کان آزاد هڪ پلاسمڊ ڊبل اسٽرينڊ بند گول ڊي اين اي آهي.
2. معياري فولڊنگ يونٽ: پروٽين جي ثانوي ڍانچي يونٽ α-helix ۽ β-شيٽ مختلف ڳنڍڻ واري پوليپيپٽائڊس ذريعي خاص جاميٽري ترتيبن سان ساختي بلاڪ ٺاهي سگھن ٿا.هن قسم جي طئي ٿيل فولڊنگ کي عام طور تي سپر ثانوي ساخت سڏيو ويندو آهي.لڳ ڀڳ سڀني عمدي ڍانچي کي انهن فولڊنگ جي قسمن ۽ حتي انهن جي گڏيل قسمن جي ذريعي بيان ڪري سگهجي ٿو، تنهنڪري انهن کي معياري فولڊنگ يونٽ به سڏيو وڃي ٿو.
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein)، CAMP ۽ CRP جي ميلاپ کان پوءِ ٺھيل ڪمپليڪس کي activating protein CAP (cAMP چالو پروٽين) چئبو آھي.
4. Palindromic sequence: Reverse complementary sequence of a segment of a DNA fragment، اڪثر ڪري پابندي واري اينزائم سائيٽ.
5. مائڪ آر اين اي: ڪمپليمينٽري مداخلت ڪندڙ آر اين اي يا اينٽي سينس آر اين اي، جيڪو mRNA جي تسلسل جو پورو پورو آهي ۽ mRNA جي ترجمي کي روڪي سگھي ٿو.
6. Ribozyme: آر اين اي ڪيٽيليٽڪ سرگرمي سان، جيڪا آر اين اي جي ڌار ٿيڻ واري عمل ۾ خودڪشي ڪندڙ ڪردار ادا ڪري ٿي.
7. Motif: ڪجھ مقامي علائقا آهن جن ۾ پروٽين جي ماليڪيولن جي فضائي ڍانچي ۾ هڪجهڙائي واري ٽن طرفي شڪل ۽ ٽوپولوجي آهي.
8. سگنل پيپٽائڊ: ھڪڙو پيپٽائڊ 15-36 امينو اسيد سان گڏ رھندو آھي N-terminus تي پروٽين جي ٺاھڻ دوران، جيڪو پروٽين جي transmembrane کي ھدايت ڪري ٿو.
9. Attenuator: ھڪ آپريٽر علائقي جي وچ ۾ ھڪ نيوڪليوٽائيڊ تسلسل ۽ ھڪڙي ساختي جين جيڪا ٽرانسپشن کي ختم ڪري ٿي.
10. جادوءَ جي جاءِ: جڏهن بيڪٽيريا وڌندا آهن ۽ امينو اسيد جي مڪمل کوٽ کي منهن ڏيندا آهن، ته بيڪٽيريا سڀني جين جي اظهار کي روڪڻ لاءِ هنگامي ردعمل پيدا ڪندو.سگنل جيڪي هن ايمرجنسي ردعمل پيدا ڪري رهيا آهن گوانوسين ٽيٽرافاسفٽ (ppGpp) ۽ گوانوسين پينٽافاسفٽ (pppGpp) آهن.PpGpp ۽ pppGpp جو ڪردار صرف هڪ يا چند آپريٽرن جو نه آهي، پر انهن جي هڪ وڏي تعداد کي متاثر ڪري ٿو، تنهنڪري انهن کي سپر ريگيوليٽر يا جادو اسپاٽ سڏيو ويندو آهي.
11. اپ اسٽريم پروموٽر عنصر: ڊي اين اي جي ترتيب ڏانهن اشارو ڪري ٿو جيڪو پروموٽر جي سرگرمي ۾ ريگيوليٽري ڪردار ادا ڪري ٿو، جهڙوڪ -10 علائقي ۾ TATA، -35 علائقي ۾ TGACA، وڌائڻ وارا، ۽ attenuators.
12. ڊي اين اي پروب: ڊي اين اي جو هڪ ليبل ٿيل حصو هڪ ڄاڻايل تسلسل سان، جيڪو وڏي پيماني تي اڻڄاتل تسلسل ۽ اسڪرين ٽارگيٽ جين کي ڳولڻ لاء استعمال ڪيو ويندو آهي.
13. SD تسلسل: اھو رائبوسوم ۽ mRNA جو پابند سلسلو آھي، جيڪو ترجمي کي منظم ڪري ٿو.
14. مونوڪلونل اينٽي باڊي: هڪ اينٽي باڊي جيڪا صرف هڪ اينٽي جينڪ ڊيٽرمننٽ جي خلاف ڪم ڪري ٿي.
15. Cosmid: اھو ھڪڙو مصنوعي طور تي ٺاھيل exogenous DNA ویکٹر آھي جيڪو COS علائقن کي فاج جي ٻنھي سرن تي رکي ٿو ۽ پلاسميڊ سان ڳنڍيل آھي.
16. نيرو-اڇو اسپاٽ اسڪريننگ: LacZ جين (انڪوڊنگ β-galactosidase)، اينزيم ڪروموجنڪ سبسٽرٽ X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) کي ختم ڪري نيرو پيدا ڪري سگهي ٿو، اهڙيءَ طرح داغ کي نيرو بڻائي ٿو.جڏهن خارجي ڊي اين اي داخل ڪيو ويندو آهي، LacZ جين کي ظاهر نٿو ڪري سگهجي، ۽ دٻاء سفيد آهي، انهي ڪري ته ٻيهر ٺهڪندڙ بيڪٽيريا کي اسڪرين ڪرڻ لاء.اهو سڏيو ويندو آهي نيري-اڇو اسڪريننگ.
17. Cis-اداڪار عنصر: ڊي اين اي ۾ بنيادن جو هڪ مخصوص سلسلو جيڪو جين جي اظهار کي منظم ڪري ٿو.
18. ڪلينو اينزائم: ڊي اين اي پوليمريز I جو وڏو ٽڪرو، سواء ان جي ته 5' 3' exonuclease سرگرمي ڊي اين اي پوليمريز I هولوئنزيم مان خارج ٿي ويندي آهي.
19. Anchored PCR: دلچسپي جي ڊي اين اي کي وڌائڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي هڪ سڃاتل تسلسل سان.هڪ پولي-ڊي جي دم کي اڻڄاتل تسلسل جي هڪ پڇاڙيء ۾ شامل ڪيو ويو، ۽ پوء پولي-ڊي سي ۽ ڄاڻايل ترتيب پي سي آر ايمپليفڪيشن لاء پرائمر طور استعمال ڪيو ويو.
20. فيوزن پروٽين: يوڪريوٽڪ پروٽين جو جين خارجي جين سان جڙيل هوندو آهي، ۽ اصل جين پروٽين ۽ خارجي پروٽين جي ترجمي سان ٺهيل پروٽين هڪ ئي وقت ظاهر ڪيو ويندو آهي.
ٻيا ماليڪيولر حياتيات جا اصطلاح
1. ڊي اين اي جو فزيڪل نقشو اهو ترتيب آهي جنهن ۾ ڊي اين اي ماليڪيول جا ٽڪرا (پابندي endonuclease-digested) ترتيب ڏنل آهن.
2. RNase جي cleavage ٻن قسمن ۾ ورهايل آهي (autocatalysis) ۽ (heterocatalysis).
3. prokaryotes ۾ ٽي شروعاتي عنصر آھن (IF-1)، (IF-2) ۽ (IF-3).
4. Transmembrane پروٽين کي ھدايت جي ضرورت آھي (سگنل پيپٽائڊس)، ۽ پروٽين چپرونز جو ڪردار آھي (پيپٽائيڊ زنجير کي پروٽين جي اصلي ٺاھڻ ۾ وھڻ ۾ مدد ڪري ٿو).
5. پروموٽرز ۾ عنصرن کي عام طور تي ٻن قسمن ۾ ورهائي سگھجي ٿو: (بنيادي پروموٽر عناصر) ۽ (اپ اسٽريم پروموٽر عناصر).
6. ماليڪيولر بائلاجي جي تحقيقي مواد ۾ بنيادي طور تي ٽي حصا شامل آهن: (ساخت جي ماليڪيولر بائيولاجي)، (جين ايڪسپريشن ۽ ريگيوليشن)، ۽ (ڊي اين اي ريڪمبنيشن ٽيڪنالاجي).
7. ٻه اهم تجربا ظاهر ڪن ٿا ته ڊي اين اي جينياتي مواد آهي (چوهڙن جي نمونيوڪوڪس انفيڪشن) ۽ (ايشيريچيا ڪولي جو T2 فيج انفيڪشن).امڪاني).
8. hnRNA ۽ mRNA جي وچ ۾ ٻه مکيه فرق آهن: (hnRNA کي mRNA ۾ تبديل ڪرڻ جي عمل ۾ ورهايو ويندو آهي)، (mRNA جي 5' پڇاڙيءَ ۾ m7pGppp ڪيپ سان شامل ڪيو ويندو آهي، ۽ mRNA ايسڊ (polyA) دم جي 3' پڇاڙيءَ ۾ هڪ اضافي پوليڊينيليشن هوندو آهي).
9. پروٽين جي ملٽي-سبونيٽ فارم جا فائدا آهن (سبونيٽ ڊي اين اي استعمال لاءِ هڪ اقتصادي طريقو آهي)، (پروٽين جي سرگرمي تي پروٽين جي جوڙجڪ ۾ بي ترتيب ٿيل غلطين جي اثر کي گھٽائي سگھي ٿو)، (سرگرمي تمام موثر ٿي سگهي ٿي ۽ تيزيءَ سان کوليون ۽ بند ٿيون).
10. پروٽين جي فولڊنگ ميڪانيزم جي پهرين نيوڪليشن نظريي جو بنيادي مواد شامل آهي (نيوڪليشن)، (ساخت جي افزودگي)، (فائنل ٻيهر ترتيب ڏيڻ).
11. Galactose بيڪٽيريا تي ٻه اثر آهي.هڪ پاسي (ان کي سيل جي ترقي لاء ڪاربان ذريعو طور استعمال ڪري سگهجي ٿو)؛ٻئي طرف (اهو پڻ سيل جي ڀت جو هڪ حصو آهي).تنهن ڪري، هڪ CAMP-CRP-آزاد پروموٽر S2 پس منظر جي سطح تي مستقل جوڙجڪ لاء گهربل آهي؛ساڳئي وقت، هڪ CAMP-CRP-انحصار پروموٽر S1 جي ضرورت آهي اعلي سطحي جوڙجڪ کي منظم ڪرڻ لاء.ٽرانسڪرپشن شروع ٿئي ٿو (S2) کان G سان ۽ (S1) کان بغير G کان.
12. Recombinant DNA ٽيڪنالاجي پڻ (gene cloning) يا (molecular cloning) جي نالي سان مشهور آهي.آخري مقصد آهي (هڪ جاندار ۾ جينياتي معلومات ڊي اين اي کي ٻئي جاندار ۾ منتقل ڪرڻ).هڪ عام ڊي اين اي ٻيهر ٺهڻ واري تجربي ۾ عام طور تي هيٺيان مرحلا شامل هوندا آهن: (1) ڊونر آرگنزم جي ٽارگيٽ جين (يا خارجي جين) کي ڪڍيو ۽ ان کي اينزيمي طور تي ٻئي ڊي اين اي ماليڪيول (ڪلوننگ ويڪٽر) سان ڳنڍيو ته جيئن هڪ نئون ٻيهر ٺهندڙ ڊي اين اي ماليڪيول ٺاهيو وڃي.② Recombinant DNA ماليڪيول وصول ڪندڙ سيل ۾ منتقل ڪيو ويندو آهي ۽ وصول ڪندڙ سيل ۾ نقل ڪيو ويندو آهي.هن عمل کي transformation سڏيو ويندو آهي.③ انهن وصول ڪندڙن جي سيلن کي اسڪرين ۽ ان جي سڃاڻپ ڪريو جن ريٽومبيننٽ ڊي اين اي جذب ڪيو آهي.④Cultivate recombinant DNA تي مشتمل سيلز کي وڏي مقدار ۾ معلوم ڪرڻ لاءِ ته ڇا خارجي امداد جين جو اظهار ڪيو ويو آهي.
13. پلاسميڊ ريپليڪشن جا ٻه قسم آهن: اهي جيڪي سختي سان ميزبان سيل پروٽين جي ٺهڪندڙ ذريعي ڪنٽرول ڪيا ويندا آهن (تنگ پلازميڊ) سڏيو ويندو آهي، ۽ اهي جيڪي سختي سان ميزبان سيل پروٽين جي ٺهڪندڙ ذريعي ڪنٽرول نه هوندا آهن (آرام ٿيل پلازميڊ) سڏيو ويندو آهي.
14. پي سي آر جي رد عمل واري نظام ۾ ھيٺيون شرطون ھجن: الف.ڊي اين اي پرائمر (اٽڪل 20 بيسز) مڪمل طور تي ترتيبن سان هر هڪ جي آخر ۾ ٽارگيٽ جين جي ٻن حصن کي الڳ ڪيو وڃي.ب.حرارتي استحڪام سان اينزايمز جهڙوڪ: TagDNA پوليمريز.ج، dNTPd، دلچسپي جي ڊي اين اي تسلسل ٽيمپليٽ جي طور تي
15. PCR جي بنيادي رد عمل جي عمل ۾ ٽي مرحلا شامل آهن: (denaturation)، (annealing)، ۽ (extension).
16. ٽرانسجينڪ جانورن جي بنيادي عمل ۾ عام طور تي شامل آهن: ①ڪلون ٿيل پرڏيهي جين جو هڪ ڀاڻ واري آنڊن يا جنين جي اسٽيم سيل جي مرڪز ۾ داخل ٿيڻ؛② انوڪيول ٿيل ڀاڻ واري بيضي يا جنين جي اسٽيم سيل کي عورت جي رحم ۾ منتقل ڪرڻ؛③ مڪمل جنين جي ترقي ۽ ترقي غير ملڪي جين سان اولاد لاءِ؛④ انهن جانورن کي استعمال ڪريو جيڪي غير ملڪي پروٽين پيدا ڪري سگھن ٿيون نسلن جي اسٽاڪ جي طور تي نئين هوموزيگس لائينن کي نسل ڏيڻ لاء.
17. Hybridoma cell lines hybridizing (spleen B) سيلن کي (myeloma) سيلن سان گڏ ٺاهيا ويندا آهن، ۽ جيئن ته (spleen Cells) hypoxanthine استعمال ڪري سگھن ٿا ۽ (Bone Cells) سيل ڊويزن جا ڪم مهيا ڪن ٿا، ان ڪري اهي HAT وچولي ۾ پوکي سگھجن ٿيون.وڌڻ.
18. تحقيق جي اونهائي سان، اينٽي باڊيز جي پهرين نسل کي (پولي ڪلونل اينٽي باڊيز)، ٻئي نسل کي (مونوڪلونل اينٽي باڊيز) ۽ ٽيون نسل (جينياتي انجنيئرنگ اينٽي باڊيز) سڏيو وڃي ٿو.
19. في الحال، حشرات جي وائرس جي جينياتي انجنيئرنگ بنيادي طور تي بيڪولو وائرس تي مرکوز آهي، جيڪو (exogenous toxin gene) جي تعارف ۾ ظاهر ٿئي ٿو؛(جينس جيڪي حشرات جي عام زندگيءَ جي چڪر ۾ خلل وجهن ٿا)؛(وائرس جين جي تبديلي).
20. ٿلهي جي آر اين اي پوليمريز II پروموٽر ۾ عام عنصرن TATA، GC ۽ CAAT سان ملندڙ ٽرانس-ايڪٽنگ پروٽين جا عنصر (TFIID)، (SP-1) ۽ (CTF/NF1) آهن.
ايڪويهه.آر اين اي پوليمريز Ⅱ جا بنيادي ٽرانسڪرپشن عنصر آهن، TFⅡ-A، TFⅡ-B، TFII-D، TFⅡ-E، ۽ انهن جو پابند سلسلو آهي: (D, A, B, E).جتي TFII-D جو ڪم آهي (TATA باڪس تي پابند).
ٻه ٻه.گھڻا ٽرانسڪرپشن فيڪٽر جيڪي ڊي اين اي سان جڙيل آھن ڊمر جي صورت ۾ ڪم ڪن ٿا.ٽرانسڪرپشن فيڪٽرز جي فنڪشنل ڊومينز جيڪي ڊي اين اي سان جڙيل آهن عام طور تي هيٺيان آهن (هيلڪس-ٽرن-هيلڪس)، (زنڪ فنگر موٽف)، (بنيادي-ليوسين) زپ موٽف).
ٽيويهه.ٽي قسم جا پابنديون endonuclease cleavage modes آهن: (5' چپچپا سرون پيدا ڪرڻ لاءِ سميٽري محور جي 5' پاسي کان ڪٽيو)، (3' چپچپا سرون پيدا ڪرڻ لاءِ سميٽري محور جي 3' پاسي کان ڪٽيو (سمتري محور تي ڪٽ ڪريو) فليٽ ڪرڻ لاءِ.
چوويهه.Plasmid DNA ۾ ٽي مختلف ترتيبون آهن: (SC configuration)، (oc configuration)، (L configuration).الیکٹروفورسس ۾ پهريون آهي (SC ترتيب).
25. Exogenous gene expression systems، خاص طور تي (Escherichia coli)، (Yeast)، (Insect) ۽ (Mammalian cell table).
26. ٽرانسجنڪ جانورن لاءِ عام طور استعمال ٿيندڙ طريقا آھن: (retroviral انفيڪشن جو طريقو)، (DNA microinjection method)، (embryonic stem cell method).
ايپليڪيشن ماليڪيولر حياتيات
1. 5 کان وڌيڪ آر اين ايز جي ڪمن جا نالا ٻڌايو؟
منتقلي RNA tRNA منتقلي امينو اسيد رائبوزوم RNA rRNA Ribosome ميسينجر RNA mRNA پروٽين جي ٺهڪندڙ ٺهيل آهي Heterogeneous ائٽمي RNA hnRNA اڳڪٿي جو اڳوڻو mRNA ننڍو ائٽمي RNA snRNA شامل آهي hnRNA جي ورهائڻ ۾ شامل آهي ننڍڙو cytoplasmic re-RNA-SnRNA-SnRNA-Synthes-Sytoplasmic-RNA-s سائز جي سگنل جي سڃاڻپ جسماني اجزاء اينٽيسينس آر اين اي anRNA/micRNA جين ايڪسپريشن ريبوزيم آر اين اي اينزيمي طور تي فعال آر اين اي کي منظم ڪري ٿو
2. prokaryotic ۽ eukaryotic پروموٽرز جي وچ ۾ بنيادي فرق ڇا آهي؟
پروڪريوٽڪ TTGACA --- TATAAT------شروعاتي سائيٽ-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-شروعاتي سائيٽ-110 -70 -25
3. قدرتي پلاسميڊ جي مصنوعي تعمير جا مکيه حصا ڇا آهن؟
قدرتي پلاسميڊن ۾ اڪثر خرابيون هونديون آهن، تنهن ڪري اهي جينياتي انجنيئرنگ لاءِ ڪيريئر جي طور تي استعمال لاءِ مناسب نه هوندا آهن، ۽ انهن کي تبديل ۽ تعمير ڪرڻ گهرجي: الف.مناسب چونڊ مارڪر جينز شامل ڪريو، جهڙوڪ ٻه يا وڌيڪ، جيڪي چونڊ لاء استعمال ڪرڻ آسان آهن، عام طور تي اينٽي بايوٽڪ جين.ب.ٻيهر ٺهڻ جي سهولت لاءِ مناسب اينزيم ڪٽڻ واري سائيٽن کي وڌايو يا گهٽايو.ج.ڊگھائي گھٽ ڪريو، غير ضروري ٽڪرا ڪٽيو، درآمد جي ڪارڪردگي کي بهتر ڪريو ۽ لوڊشيڊنگ جي صلاحيت کي وڌايو.ڊي.نقل کي تبديل ڪريو، تنگ کان لوز تائين، گهٽ نقلن کان وڌيڪ نقلن تائين.e.جينياتي انجنيئرنگ جي خاص ضرورتن مطابق خاص جينياتي عناصر شامل ڪريو
4. ٽشو مخصوص سي ڊي اين اي جي فرق واري اسڪريننگ جي طريقي جو مثال ڏيو؟
ٻن سيلن جي آبادي تيار ڪئي وئي آهي، ٽارگيٽ جين کي ظاهر ڪيو ويو آهي يا انتهائي ظاهر ڪيو ويو آهي هڪ سيل ۾، ۽ ٽارگيٽ جين کي ظاهر نه ڪيو ويو آهي يا گهٽ ظاهر ڪيو ويو آهي ٻئي سيل ۾، ۽ پوء ٽارگيٽ جين کي هائبرڊائيزيشن ۽ مقابلي ذريعي مليو آهي.مثال طور، ٽيومر جي واقعن ۽ ترقي دوران، ٽيومر سيلز mRNAs کي عام سيلز جي ڀيٽ ۾ مختلف اظهار جي سطح سان پيش ڪندا.تنهن ڪري، ٽامي سان لاڳاپيل جين کي فرق واري هائبرڊائيزيشن ذريعي ٻاهر ڪڍي سگهجي ٿو.انڊڪشن جو طريقو به استعمال ڪري سگهجي ٿو انهن جين کي اسڪرين ڪرڻ لاءِ جن جو اظهار متاثر ٿيل آهي.
5. هائبرڊوما سيل لائنن جي پيدائش ۽ اسڪريننگ؟
Spleen B سيلز + myeloma سيلز، سيل فيوزن کي فروغ ڏيڻ لاء polyethylene glycol (PEG) شامل ڪريو، ۽ Splenic B-myeloma فيوزن سيلز HAT وچولي ۾ وڌندا آهن (جنهن ۾ هائيپوڪسانٿائن، امينوپيٽرن، ٽي شامل آهن) غذا کي وڌائڻ لاء جاري آهن.سيل فيوزن تي مشتمل آهي: spleen-spleen fusion Cells: وڌڻ جي قابل نه، spleen سيلز کي ويٽرو ۾ ڪلچر نٿو ڪري سگهجي.هڏا-هڏا فيوزن سيلز: هائپوڪسانٿائن استعمال نٿا ڪري سگهن، پر فوليٽ ريڊڪٽيس استعمال ڪندي ٻئي رستي ذريعي purine کي گڏ ڪري سگھن ٿا.Aminopterin folate reductase کي روڪي ٿو ۽ اهڙيءَ طرح وڌي نٿو سگهي.هڏن جي سپلين فيوزن سيلز: HAT ۾ وڌي سگهن ٿا، اسپيني سيلز هائپوڪسانٿائن کي استعمال ڪري سگهن ٿا، ۽ هڏن جي سيلز سيل ڊويزن فنڪشن مهيا ڪن ٿا.
6. ڊيوڊ آڪسي ٽرمينل ٽرمينيشن ميٿڊ (سنجر ميٿڊ) ذريعي ڊي اين اي جي بنيادي ڍانچي کي طئي ڪرڻ جو اصول ۽ طريقو ڇا آهي؟
اصول اهو آهي ته ڊي اين اي جي واڌ کي ختم ڪرڻ لاءِ نيوڪليوٽائيڊ چين ٽرمينيٽر-2,,3,-dideoxynucleotide استعمال ڪيو وڃي.ڇاڪاڻ ته ان ۾ 3/5/فاسفوڊيسٽر بانڊز جي ٺهڻ لاءِ گهربل 3-OH نه آهي، هڪ ڀيرو ڊي اين اي زنجير ۾ شامل ٿيڻ کان پوءِ، ڊي اين اي زنجير کي اڳتي وڌائي نٿو سگهجي.بيس پيئرنگ جي اصول موجب، جڏهن به ڊي اين اي پوليمريز کي عام طور تي وڌايل ڊي اين اي زنجير ۾ حصو وٺڻ لاءِ dNMP جي ضرورت پوي ٿي، اتي ٻه امڪان آهن، هڪ ته ddNTP ۾ حصو وٺڻ، جنهن جي نتيجي ۾ deoxynucleotide chain extension ختم ٿي وڃي ٿي؛ٻيو آهي dNTP ۾ حصو وٺڻ، ته جيئن DNA جو سلسلو اڃا تائين جاري رهي جيستائين ايندڙ ddNTP شامل نه ٿئي.هن طريقي جي مطابق، ڊي اين ٽي پي ۾ ختم ٿيندڙ مختلف ڊيگهه جي ڊي اين اي ٽڪرن جو هڪ گروپ حاصل ڪري سگهجي ٿو.طريقه ڪار چار گروپن ۾ ورهايل آهي ترتيب وار ddAMP، ddGMP، ddCMP، ۽ ddTMP.رد عمل کان پوء، polyacrylamide gel electrophoresis سوئمنگ بينڊ جي مطابق ڊي اين اي جي ترتيب کي پڙهي سگهي ٿو.
7. ٽرانسپشن تي ايڪٽيويٽ پروٽين (CAP) جو مثبت ريگيوليشن اثر ڇا آهي؟
Cyclic adenylate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein)، CAMP ۽ CRP جي ميلاپ سان ٺھيل پيچيده کي CAP (cAMPactivated پروٽين) چئبو آھي.جڏهن E. coli کي گلوڪوز جي گھٽتائي جي وچ ۾ وڌو ويندو آهي، CAP جي ٺهڪندڙ وڌندي آهي، ۽ CAP کي فعال ڪرڻ وارو ڪم آهي جهڙوڪ ليڪٽوز (Lac).ڪجھ CRP-انحصار پروموٽرن وٽ عام -35 علائقي جي ترتيب واري خصوصيت (TTGACA) جي کوٽ آھي جيڪا عام پروموٽرن وٽ آھي.تنهن ڪري، آر اين اي پوليمريز لاء ان کي پابند ڪرڻ ڏکيو آهي.CAP (فنڪشن) جي موجودگي: خاص طور تي اينزيم ۽ پروموٽر جي پابند مسلسل کي بهتر بڻائي سگھي ٿو.اهو بنيادي طور تي هيٺين ٻن پاسن کي ڏيکاري ٿو: ① CAP انزائيم ماليڪيول کي صحيح رخ ۾ مدد ڪري ٿو پروموٽر جي ترتيب ۽ انزائم سان رابطي کي تبديل ڪندي، جيئن -10 علائقي سان ملائي ۽ -35 علائقي جي ڪم کي تبديل ڪرڻ جو ڪردار ادا ڪري.②CAP پڻ RNA پوليمريز جي پابند ٿيڻ کي روڪي سگھي ٿو DNA ۾ ٻين سائيٽن تي، ان ڪري ان جي مخصوص پروموٽر جي پابند ٿيڻ جو امڪان وڌي ٿو.
8. عام طور تي ڊي اين اي جي ٻيهر ٺهڻ واري تجربي ۾ ڪهڙا مرحلا شامل ڪيا ويندا آهن؟
هڪڊونر آرگنزم جي ٽارگيٽ جين (يا exogenous جين) کي ڪڍيو، ۽ ان کي اينزيميٽڪ طور تي هڪ ٻئي ڊي اين اي ماليڪيول (ڪلوننگ ويڪٽر) سان ڳنڍيو ته جيئن هڪ نئون ٻيهر ٺهيل ڊي اين اي ماليڪيول ٺاهيو وڃي.ب.وصول ڪندڙ سيل ۾ ٻيهر ٺهڪندڙ ڊي اين اي ماليڪيول کي منتقل ڪريو ۽ ان کي نقل ڪريو ۽ وصول ڪندڙ سيل ۾ محفوظ ڪريو.هن عمل کي transformation سڏيو ويندو آهي.ج.اسڪرين ۽ انهن وصول ڪندڙ سيلن جي سڃاڻپ ڪريو جن کي ٻيهر ٺهڪندڙ ڊي اين اي جذب ڪيو آهي.ڊي.ماس ڪلچر انهن سيلن کي جنهن ۾ ريٽومبيننٽ ڊي اين اي آهي اهو معلوم ڪرڻ لاءِ ته ڇا پرڏيهي امداد جين جو اظهار ڪيو ويو آهي.
9. جين لائبريريءَ جي اڏاوت ريٽومبيننٽس جي اسڪريننگ جا ٽي طريقا ڏنل آهن ۽ عمل کي مختصر طور بيان ڪيو ويو آهي.
اينٽي بائيوٽڪ مزاحمت جي اسڪريننگ، مزاحمت جي غير فعال ٿيڻ، نيري-سفيد اسپاٽ اسڪريننگ يا پي سي آر اسڪريننگ، ڊفرنشل اسڪريننگ، ڊي اين اي پروب اڪثر ڪلوننگ ویکٹر اينٽي بايوٽڪ مزاحمتي جينز (اينٽي امپيسلن، ٽيٽراسائڪلين) کڻندا آهن.جڏهن پلازميڊ کي Escherichia coli ۾ منتقل ڪيو ويندو آهي، بيڪٽيريا مزاحمت حاصل ڪري سگهندا آهن، ۽ جيڪي منتقلي کان سواء آهن انهن کي مزاحمت نه هوندي.پر اهو فرق نٿو ڪري سگهي ته ان کي ٻيهر منظم ڪيو ويو آهي يا نه.ٻن مزاحمتي جينز تي مشتمل ويڪٽر ۾، جيڪڏهن هڪ غير ملڪي ڊي اين اي جو ٽڪڙو ڪنهن هڪ جين ۾ داخل ڪيو وڃي ۽ جين کي غير فعال ٿيڻ جو سبب بڻائين، ته ٻه پليٽ ڪنٽرول جيڪي مختلف دوائن تي مشتمل هجن، انهن کي استعمال ڪري سگھجن ٿا مثبت ٻيهر ٺهڪندڙن جي اسڪريننگ لاءِ.مثال طور، pUC پلاسميڊ ۾ LacZ جين (انڪوڊنگ β-galactosidase) شامل آهي، جيڪو ڪروموجنڪ سبسٽريٽ X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) کي ختم ڪري نيرو پيدا ڪري سگهي ٿو، اهڙيءَ طرح داغ کي نيرو ڪري ٿو.جڏهن غير ملڪي ڊي اين اي داخل ڪيو ويندو آهي، LacZ جين کي ظاهر نٿو ڪري سگهجي، ۽ دٻاء اڇو هوندو آهي، جيئن ٻيهر ٺهڪندڙ بيڪٽيريا کي اسڪرين ڪرڻ لاء.
10. جنين جي اسٽيم سيلز ذريعي ٽرانسجنڪ جانور حاصل ڪرڻ جي بنيادي عمل جي وضاحت ڪريو؟
جنين جي اسٽيم سيلز (ES) جنين جي ترقي جي دوران جنين جي سيلز آهن، جن کي مصنوعي طور تي ڪلچر ۽ ترقي ڪري سگهجي ٿو ۽ ٻين قسمن جي سيلن ۾ فرق ڪرڻ جو ڪم آهي.ES سيلز جو ڪلچر: blastocyst جي اندروني سيل ماس کي الڳ ۽ ڪلچر ڪيو ويو آهي.جڏهن ES هڪ فيڊر فري پرت ۾ ڪلچر ڪيو ويندو آهي، اهو مختلف فنڪشنل سيلز جهڙوڪ عضلاتي سيلز ۽ اين سيلز ۾ فرق ڪندو.جڏهن هڪ وچولي ۾ ڪلچر ڪيو ويو جنهن ۾ فائبروبلاسٽ شامل آهن، اي ايس فرق جي ڪم کي برقرار رکندو.ES جينياتي طور تي ٺهڪندڙ ٿي سگهي ٿو، ۽ ان جي تفاوت جي فنڪشن کي ان جي مختلف ڪم کي متاثر ڪرڻ کان سواء ضم ٿي سگهي ٿو، جيڪو بي ترتيب انضمام جي مسئلي کي حل ڪري ٿو.Exogenous genes کي ايمبريونڪ اسٽيم سيلز ۾ متعارف ڪرايو، پوءِ حامله ماده چوهڙن جي رحم ۾ امپلانٽ ڪيو وڃي، پپ ۾ وڌو، ۽ هوموزيگس چوهاڻ حاصل ڪرڻ لاءِ پار ڪيو وڃي.
