Cell Direct RT qPCR Kit-SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR کٽ
وضاحتون
هي ڪٽ هڪ منفرد ليسس بفر سسٽم استعمال ڪري ٿو جيڪو جلدي آر اين اي کي ڪلچر ٿيل سيلن جي نمونن مان RT-qPCR رد عملن لاءِ آزاد ڪري سگهي ٿو، ان ڪري وقت سازي ۽ محنتي RNA صاف ڪرڻ واري عمل کي ختم ڪري ٿو.آر اين اي ٽيمپليٽ صرف 7 منٽن ۾ حاصل ڪري سگھجي ٿو.5×سڌو RT ميڪس ۽ 2×کٽ پاران مهيا ڪيل سڌو qPCR Mix-SYBR ريجينٽ جلدي ۽ مؤثر طريقي سان حقيقي وقت جي مقداري PCR نتيجا حاصل ڪري سگھن ٿا.
5×سڌو RT ميڪس ۽ 2×سڌو qPCR Mix-SYBR وٽ مضبوط روڪٿام رواداري آهي، ۽ نموني جي lysate کي RT-qPCR لاء ٽيمپليٽ طور استعمال ڪري سگهجي ٿو.ھن کٽ ۾ منفرد RNA ھاءِ affinity Foregene reverse transcriptase، ۽ Hot D-Taq DNA پوليمريز، dNTPs، MgCl شامل آھن.2، ردعمل بفر، پي سي آر آپٽمائزر ۽ اسٽيبلائيزر.
وضاحتون
200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
کٽ جا اجزاء
| حصو I | بفر CL |
| Foregene Protease پلس II | |
| بفر ايس ٽي | |
| حصو II | ڊي اين اي ريزر |
| 5 × سڌو RT ميڪس | |
| 2 × سڌو qPCR ميڪس-SYBR | |
| 50 × ROX حوالو رنگ | |
| RNase-مفت ddH2O | |
| هدايتون | |
خاصيتون ۽ فائدا
■سادي ۽ اثرائتو: Cell Direct RT ٽيڪنالاجي سان، RNA جا نمونا صرف 7 منٽن ۾ حاصل ڪري سگھجن ٿا.
■ نموني جو مطالبو ننڍڙو آهي، جيئن گهٽ ۾ گهٽ 10 سيلز کي آزمائي سگهجي ٿو.
■ هاءِ ٿرو پُٽ: اهو 384، 96، 24، 12، 6-ويل پليٽس ۾ ڪلچر ٿيل سيلز ۾ آر اين اي کي جلدي ڳولي سگهي ٿو.
■ ڊي اين اي ريزر جلدي جاري ڪيل جينوم کي هٽائي سگھي ٿو، بعد ۾ ايندڙ تجرباتي نتيجن تي اثر گھٽائي سگھي ٿو.
■ آپٽمائزڊ RT ۽ qPCR سسٽم ٻن قدمن واري RT-PCR ريورس ٽرانسڪرپشن کي وڌيڪ ڪارائتو ۽ PCR وڌيڪ مخصوص، ۽ RT-qPCR رد عمل جي روڪٿام کي وڌيڪ مزاحمتي بڻائي ٿو.
ڪٽ ايپليڪيشن
ايپليڪيشن جو دائرو: ثقافتي سيلز.
- آر اين اي نموني ليسس پاران جاري ڪيو ويو: صرف هن کٽ جي RT-qPCR ٽيمپليٽ تي لاڳو ٿئي ٿو.
- ڪٽ ھيٺين مقصدن لاءِ استعمال ٿي سگھي ٿو: جين جي اظهار جو تجزيو، siRNA-ثالث جين سائلننگ اثر جي تصديق، دوا جي اسڪريننگ وغيره.
خاڪو
اسٽوريج ۽ شيلف زندگي
هن کٽ جو حصو I 4 ℃ تي ذخيرو ڪيو وڃي.حصو II -20 ℃ تي ذخيرو ڪيو وڃي.
Foregene Protease Plus II کي 4 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃، منجمد نه ڪريو -20 ℃ تي.
ريجنٽ 2×سڌو qPCR Mix-SYBR -20 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃اونداهي ۾؛جيڪڏهن اڪثر استعمال ڪيو وڃي، اهو پڻ محفوظ ڪري سگهجي ٿو 4℃ مختصر مدت جي اسٽوريج لاء (10 ڏينهن اندر استعمال ڪريو).
حقيقي وقت پي سي آر پرائمر ڊيزائن جا اصول
فارورڊ پرائمر ۽ ريورس پرائمر
حقيقي وقت پي سي آر لاء، پرائمر ڊيزائن تمام ضروري آهي.پرائمر PCR amplification جي خاصيت ۽ ڪارڪردگي سان لاڳاپيل آهن، ۽ هيٺ ڏنل اصولن جي حوالي سان ٺهيل ٿي سگهن ٿا:
پرائمر جي ڊيگهه: 18-30bp.
جي سي مواد: 40-60٪.
Tm قدر: پرائمر ڊيزائن سافٽ ويئر، جهڙوڪ پرائمر 5، پرائمر جي Tm قدر ڏئي سگھي ٿو.اپ اسٽريم ۽ لانڊ اسٽريم پرائمر جي Tm قدرن کي جيترو ٿي سگھي ويجھو ٿيڻ گھرجي.Tm حساب ڪتاب جو فارمولا پڻ استعمال ڪري سگھجي ٿو: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).جڏهن پي سي آر کي انجام ڏيو، 5 ° C جي پرائمر Tm قدر کان هيٺ درجه حرارت عام طور تي اينيلنگ جي درجه حرارت جي طور تي چونڊيو ويندو آهي (اينيلنگ جي درجه حرارت ۾ لاڳاپيل اضافو پي سي آر جي رد عمل جي خاصيت کي وڌائي سگھي ٿو).
پرائمر ۽ پي سي آر پروڊڪٽس:
ڊزائين پرائمر پي سي آر ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ جي ڊيگهه ترجيحي طور تي 100-150bp آهي.
ٽيمپليٽ جي ثانوي ساخت واري علائقي ۾ ڊيزائن جي پرائمر کي ممڪن حد کان بچڻ گهرجي.
اپ اسٽريم ۽ ڊائون اسٽريم پرائمر جي 3′ سرن جي وچ ۾ 2 يا وڌيڪ مڪمل ڪندڙ بنيادن جي ٺهڻ کان پاسو ڪريو.
پرائمر 3′ ٽرمينل بيس موجود نه ٿو ٿي سگھي 3 اضافي لڳاتار G يا C سان.
پرائمر پاڻ کي مڪمل ڍانچي نه ٿا ڪري سگھن، ٻي صورت ۾ هڪ بال جي پنن جي جوڙجڪ ٺاهي ويندي، PCR امپليفڪيشن کي متاثر ڪندي.
ATCG کي پرائمر جي ترتيب ۾ جيترو ممڪن طور تي ورهايو وڃي، ۽ 3′ ٽرمينل بيس کي T کان بچڻ گهرجي.
ضميمو 1: سيل سڌو RT-qPCR کٽ جزو اضافي پيڪ
1.سيل ليسس حل
|
| |||
| کٽ جا اجزاء (24-سٺو lysis نظام / چڱي طرح) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٽي | 500 ٽي | ||
| حصواي | بفر CL | 20 مليل | 100 مليل |
| Foregene Protease پلس II | 400 μl | 1 ملي × 2 | |
| بفر ايس ٽي | 1 ملي × 2 | 10 مليل | |
| حصوII | ڊي اين اي ريزر | 400 μl | 1 ملي × 2 |
2.RT مکس
|
| |
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٽي | |
| 5 × سڌو RT ميڪس | 800 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 ملي × 2 |
|
| ||
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ٽي | 1000 ٽي | |
| 2 × سڌو qPCR ميڪس-SYBR | 1 ملي × 2 | 1.7 ملي × 6 |
| 50 × ROX حوالو رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 مليل | 10 مليل |
هدايتون:
