Cell Direct RT qPCR Kit- Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR ڪِٽس پروب
وضاحتون
هي پراڊڪٽ RT-qPCR رد عمل لاءِ ڪلچر ٿيل سيلن جي نمونن مان آر اين اي کي جلدي ڇڏڻ لاءِ هڪ منفرد ليسس بفر سسٽم استعمال ڪري ٿو، وقت سازي ۽ محنت طلب آر اين اي صاف ڪرڻ واري عمل کي ختم ڪري ٿو، ۽ گهربل آر اين اي ٽيمپليٽ حاصل ڪرڻ لاءِ صرف 7 منٽ، 5× Direct RT Mix، 2× Direct qPCR Mix-Tacientant by Real-Tacientant by 2× Direct qPCR Mix-Tacientant by the Real Time. نتيجا.
5× Direct RT Mix ۽ 2× Direct qPCR Mix-Taqman وٽ مضبوط روڪٿام رواداري آهي ۽ نموني جي lysate کي استعمال ڪندي موثر ريورسل ۽ مخصوص ايمپليفڪيشن انجام ڏئي سگھن ٿا ٽيمپليٽ جي طور تي ماپڻ لاءِ.ريجنٽ ۾ Foregene Reverse Transcriptase، Hot D-Taq DNA Polymerase، dNTPs، MgCl شامل آهن.2, Reaction Buffer, PCR Optimizer ۽ Stabilizer، جيڪو lysis بفر سان استعمال ڪري سگھجي ٿو جلدي ۽ آساني سان نموني کي معلوم ڪرڻ لاءِ، ۽ ان ۾ اعليٰ حساسيت، خاصيت ۽ استحڪام جون خاصيتون آھن.
وضاحتون
200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
کٽ جا اجزاء
| QuickEasyTMسيل سڌو RT-qPCR کٽ-تقمان | ||||
| کٽ جا اجزاء 20μl qPCR رد عمل سسٽم | DRT-01021 | DRT-01022 | نوٽ | |
| 200 ٽي | 1000 ٽي | |||
|
حصو I | بفر CL | 4 ملي | 20 مليل | سيل ليسس |
| Foregene Protease پلس II | 80 μl | 400 μl | ||
| بفر ايس ٽي | 400 μl | 1 ملي × 2 | ||
|
حصو II | ڊي اين اي ريزر | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × سڌو RT ميڪس * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× سڌو qPCR ميڪس-تقمان * | 1 ملي × 2 | 1.7 ملي × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX حوالو رنگ | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 مليل | 10 مليل | ||
| ھدايت وارو دستور | 1 ٽڪرو | 1 ٽڪرو | ||
*:سيل ليسس، 5×Direct RT Mix، 2× Direct qPCR Mix-Taqman الڳ الڳ خريد ڪري سگھجي ٿو
خاصيتون ۽ فائدا
■سادي ۽ اثرائتو: Cell Direct RT ٽيڪنالاجي سان، RNA جا نمونا صرف 7 منٽن ۾ حاصل ڪري سگھجن ٿا.
■ نموني جو مطالبو ننڍڙو آهي، جيئن گهٽ ۾ گهٽ 10 سيلز کي آزمائي سگهجي ٿو.
■ هاءِ ٿرو پُٽ: اهو 384، 96، 24، 12، 6-ويل پليٽس ۾ ڪلچر ٿيل سيلز ۾ آر اين اي کي جلدي ڳولي سگهي ٿو.
■ ڊي اين اي ريزر جلدي جاري ڪيل جينوم کي هٽائي سگھي ٿو، بعد ۾ ايندڙ تجرباتي نتيجن تي اثر گھٽائي سگھي ٿو.
■ آپٽمائزڊ RT ۽ qPCR سسٽم ٻن قدمن واري RT-PCR ريورس ٽرانسڪرپشن کي وڌيڪ ڪارائتو ۽ PCR وڌيڪ مخصوص، ۽ RT-qPCR رد عمل جي روڪٿام کي وڌيڪ مزاحمتي بڻائي ٿو.
ڪٽ ايپليڪيشن
ايپليڪيشن جو دائرو: ثقافتي سيلز.
- آر اين اي نموني ليسس پاران جاري ڪيو ويو: صرف هن کٽ جي RT-qPCR ٽيمپليٽ تي لاڳو ٿئي ٿو.
- ڪٽ ھيٺين مقصدن لاءِ استعمال ٿي سگھي ٿو: جين جي اظهار جو تجزيو، siRNA-ثالث جين سائلننگ اثر جي تصديق، دوا جي اسڪريننگ وغيره.
اسٽوريج ۽ شيلف زندگي
ھن کٽ جو حصو I 4 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃؛حصو II -20 ℃ تي ذخيرو ڪيو وڃي.
Foregene Protease Plus II کي 4 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃، منجمد نه ڪريو -20 ℃ تي.
ريجنٽ 2×سڌو qPCR ميڪس-تقمان -20 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃اونداهي ۾؛جيڪڏهن اڪثر استعمال ڪيو وڃي، اهو پڻ محفوظ ڪري سگهجي ٿو 4℃ مختصر مدت جي اسٽوريج لاء (10 ڏينهن اندر استعمال ڪريو).
حقيقي وقت پي سي آر پرائمر ڊيزائن جا اصول
فارورڊ پرائمر ۽ ريورس پرائمر
حقيقي وقت پي سي آر لاء، پرائمر ڊيزائن تمام ضروري آهي.پرائمر PCR amplification جي خاصيت ۽ ڪارڪردگي سان لاڳاپيل آهن، ۽ هيٺ ڏنل اصولن جي حوالي سان ٺهيل ٿي سگهن ٿا:
- پرائمر جي ڊيگهه: 18-30bp.
- جي سي مواد: 40-60٪.
- Tm قدر: پرائمر ڊيزائن سافٽ ويئر، جهڙوڪ پرائمر 5، پرائمر جي Tm قدر ڏئي سگھي ٿو.اپ اسٽريم ۽ لانڊ اسٽريم پرائمر جي Tm قدرن کي جيترو ٿي سگھي ويجھو ٿيڻ گھرجي.Tm حساب ڪتاب جو فارمولا پڻ استعمال ڪري سگھجي ٿو: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).جڏهن پي سي آر کي انجام ڏيو، 5 ° C جي پرائمر Tm قدر کان هيٺ درجه حرارت عام طور تي اينيلنگ جي درجه حرارت جي طور تي چونڊيو ويندو آهي (اينيلنگ جي درجه حرارت ۾ لاڳاپيل اضافو پي سي آر جي رد عمل جي خاصيت کي وڌائي سگھي ٿو).
- پرائمر ۽ پي سي آر پروڊڪٽس:
- ڊزائين پرائمر پي سي آر ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ جي ڊيگهه ترجيحي طور تي 100-150bp آهي.
- ٽيمپليٽ جي ثانوي ساخت واري علائقي ۾ ڊيزائن جي پرائمر کي ممڪن حد کان بچڻ گهرجي.
- اپ اسٽريم ۽ ڊائون اسٽريم پرائمر جي 3′ سرن جي وچ ۾ 2 يا وڌيڪ مڪمل ڪندڙ بنيادن جي ٺهڻ کان پاسو ڪريو.
- پرائمر 3′ ٽرمينل بيس موجود نه ٿو ٿي سگھي 3 اضافي لڳاتار G يا C سان.
- پرائمر پاڻ کي مڪمل ڍانچي نه ٿا ڪري سگھن، ٻي صورت ۾ هڪ بال جي پنن جي جوڙجڪ ٺاهي ويندي، PCR امپليفڪيشن کي متاثر ڪندي.
- ATCG کي پرائمر جي ترتيب ۾ جيترو ممڪن طور تي ورهايو وڃي، ۽ 3′ ٽرمينل بيس کي T کان بچڻ گهرجي.
ضميمو1: سيايل سڌوRT-qPCR کٽ جو جزوt اضافي پيڪيج
1. سيل ليسس حل
| سيل ليسس حل | |||
| کٽ جا اجزاء (24-سٺو lysis نظام / چڱي طرح) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٽي | 500 ٽي | ||
| حصواي | بفر CL | 20 مليل | 100 مليل |
| Foregene Protease پلس II | 400 μl | 1 ملي × 2 | |
| بفر ايس ٽي | 1 ملي × 2 | 10 مليل | |
| حصوII | ڊي اين اي ريزر | 400 μl | 1 ملي × 2 |
| RT مکس | |
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٽي | |
| 5 × سڌو RT ميڪس | 800 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 ملي × 2 |
| qPCR مکس | ||
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ٽي | 1000 ٽي | |
| 2 × سڌو qPCR ميڪس-تقمان | 1 ملي × 2 | 1.7 ملي × 6 |
| 20 × ROX حوالو رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 مليل | 10 مليل |
هدايتون:
