(96-سٺي) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR کٽ - SYBR گرين I
وضاحتون
جي(96-به) QuickEasyTM سيل سڌو RT-qPCR کٽ-SYBR گرين Iمهيا ڪري ٿوهڪ منفرد ليسس بفر سسٽمto جلدي آر اين اي ڇڏڻثقافتي سيل مانRT-qPCR رد عمل لاءِ نمونا، وقت سازي ۽ محنتي کي ختم ڪرڻآر اين اي صاف ڪرڻ وارو عمل، ۽ گهربل آر اين اي ٽيمپليٽ حاصل ڪرڻ ۾ صرف 7 منٽ لڳن ٿا.جي5 × سڌو RT ميڪس۽2 × سڌو qPCR ميڪس-SYBRباڪس ۾ مهيا ڪيل جلدي ۽مؤثر طور تي حقيقي وقت جي مقدار کي حاصل ڪرڻپي سي آر جا نتيجا.
5× Direct RT Mix ۽ 2× Direct qPCR Mix-SYBR وٽ مضبوط روڪٿام رواداري آهي، ۽ نموني جي lysate کي استعمال ڪري سگھن ٿا ٽيمپليٽ جي طور تي موثر ريورس ٽرانسپشن ۽ مخصوص ايمپليفڪيشن لاءِ.ريجينٽ ۾ فرجيني منفرد ريورس ٽرانسڪرپٽيز شامل آهي جنهن ۾ آر اين اي لاءِ اعليٰ لاڳاپا شامل آهن، انهي سان گڏ گرم ڊي-ٽيڪ ڊي اين اي پوليمريز، ڊي اين ٽي پيز، MgCl2 ، ردعمل بفر، پي سي آر آپٽمائزر ۽ اسٽيبلائيزر، ۽ نموني کي جلدي، آساني سان ۽ صحيح طور تي ڳولڻ لاء ليسس بفر سان گڏ استعمال ڪري سگهجي ٿو، ۽ ان ۾ اعلي حساسيت، مضبوط خاصيت ۽ سٺي استحڪام جون خاصيتون آهن.
کٽ جو مقصد 96-سٺو ڪلچر ٿيل سيلز جي مائڪرو سسٽم ليسس آهي، ۽ سٺي هڪجهڙائي ۽ استحڪام آهي؛ڪٽ جا جزا 96 ليسس رد عمل، 96 ريورس ٽرانسڪرپشن رد عمل ۽ 96 × 2 qPCR رد عمل مهيا ڪن ٿا، جيڪي 96-ويل سيلز پليٽ کي هڪ وقت جي استعمال لاءِ ملن ٿا، بار بار کولڻ، منجمد ٿيڻ ۽ ريجينٽس جي پگھلڻ ۽ ريجينٽ جي ڪارڪردگي جي خراب ٿيڻ سبب پيدا ٿيندڙ آلودگي کان بچي سگهن ٿا.
کٽ جا اجزاء
| کٽ جي جوڙجڪ ( 50 μايل ليسس سسٽم / 20 μLRT ردعمل سسٽم / 20μايل qPCR ردعمل سسٽم) | ڊي آر ٽي-03011 | تبصرو | |
| 96 تي | |||
| حصوI | بفرCL | 5 ايم ايل | سيلليسس |
| اڳوڻوپروٽيز پلس II | 100 μL | ||
| بفرST | 500 μL | ||
| حصو II | ڊي اين ايصاف ڪندڙ | 100 μL | |
| 5 × سڌو RT ميڪس | 400 μL | RT | |
| 2 × سڌو qPCR ميڪس-SYBR | 1 مL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX حوالو رنگ | 400µL | ||
| RNase- واندوڊي ايڇ2 O | 1.7 ملي ليٽر |
| |
| Mسالياني | 1 ٽڪرو | 1 سرونگ | |
*: lysis reagent DNA Eraser کٽ جي حصو II ۾ شامل آهي؛سيل ليسس، آر ٽي، ۽ qPCR اجزاء الڳ الڳ خريد ڪري سگھجن ٿيون.
خاصيتون ۽ فائدا
■سادي ۽ اثرائتو: Cell Direct RT ٽيڪنالاجي سان، RNA جا نمونا صرف 7 منٽن ۾ حاصل ڪري سگھجن ٿا.
■ نموني جو مطالبو ننڍڙو آهي، جيئن گهٽ ۾ گهٽ 10 سيلز کي آزمائي سگهجي ٿو.
■ هاءِ ٿرو پُٽ: اهو 384، 96، 24، 12، 6-ويل پليٽس ۾ ڪلچر ٿيل سيلز ۾ آر اين اي کي جلدي ڳولي سگهي ٿو.
■ ڊي اين اي ريزر جلدي جاري ڪيل جينوم کي هٽائي سگھي ٿو، بعد ۾ ايندڙ تجرباتي نتيجن تي اثر گھٽائي سگھي ٿو.
■ آپٽمائزڊ RT ۽ qPCR سسٽم ٻن قدمن واري RT-PCR ريورس ٽرانسڪرپشن کي وڌيڪ ڪارائتو ۽ PCR وڌيڪ مخصوص، ۽ RT-qPCR رد عمل جي روڪٿام کي وڌيڪ مزاحمتي بڻائي ٿو.
ڪٽ ايپليڪيشن
ايپليڪيشن جو دائرو: ثقافتي سيلز.
- آر اين اي نموني ليسس پاران جاري ڪيو ويو: صرف هن کٽ جي RT-qPCR ٽيمپليٽ تي لاڳو ٿئي ٿو.
- ڪٽ ھيٺين مقصدن لاءِ استعمال ٿي سگھي ٿو: جين جي اظهار جو تجزيو، siRNA-ثالث جين سائلننگ اثر جي تصديق، دوا جي اسڪريننگ وغيره.
اسٽوريج ۽ شيلف زندگي
ھن کٽ جو حصو I 4 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃؛حصو II -20 ℃ تي ذخيرو ڪيو وڃي.
Foregene Protease Plus II کي 4 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃، منجمد نه ڪريو -20 ℃ تي.
ريجنٽ 2×سڌو qPCR ميڪس-تقمان -20 تي ذخيرو ڪيو وڃي℃اونداهي ۾؛جيڪڏهن اڪثر استعمال ڪيو وڃي، اهو پڻ محفوظ ڪري سگهجي ٿو 4℃ مختصر مدت جي اسٽوريج لاء (10 ڏينهن اندر استعمال ڪريو).
حقيقي وقت پي سي آر پرائمر ڊيزائن جا اصول
فارورڊ پرائمر ۽ ريورس پرائمر
حقيقي وقت پي سي آر لاء، پرائمر ڊيزائن تمام ضروري آهي.پرائمر PCR amplification جي خاصيت ۽ ڪارڪردگي سان لاڳاپيل آهن، ۽ هيٺ ڏنل اصولن جي حوالي سان ٺهيل ٿي سگهن ٿا:
- پرائمر جي ڊيگهه: 18-30bp.
- جي سي مواد: 40-60٪.
- Tm قدر: پرائمر ڊيزائن سافٽ ويئر، جهڙوڪ پرائمر 5، پرائمر جي Tm قدر ڏئي سگھي ٿو.اپ اسٽريم ۽ لانڊ اسٽريم پرائمر جي Tm قدرن کي جيترو ٿي سگھي ويجھو ٿيڻ گھرجي.Tm حساب ڪتاب جو فارمولا پڻ استعمال ڪري سگھجي ٿو: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).جڏهن پي سي آر کي انجام ڏيو، 5 ° C جي پرائمر Tm قدر کان هيٺ درجه حرارت عام طور تي اينيلنگ جي درجه حرارت جي طور تي چونڊيو ويندو آهي (اينيلنگ جي درجه حرارت ۾ لاڳاپيل اضافو پي سي آر جي رد عمل جي خاصيت کي وڌائي سگھي ٿو).
- پرائمر ۽ پي سي آر پروڊڪٽس:
- ڊزائين پرائمر پي سي آر ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ جي ڊيگهه ترجيحي طور تي 100-150bp آهي.
- ٽيمپليٽ جي ثانوي ساخت واري علائقي ۾ ڊيزائن جي پرائمر کي ممڪن حد کان بچڻ گهرجي.
- اپ اسٽريم ۽ ڊائون اسٽريم پرائمر جي 3′ سرن جي وچ ۾ 2 يا وڌيڪ مڪمل ڪندڙ بنيادن جي ٺهڻ کان پاسو ڪريو.
- پرائمر 3′ ٽرمينل بيس موجود نه ٿو ٿي سگھي 3 اضافي لڳاتار G يا C سان.
- پرائمر پاڻ کي مڪمل ڍانچي نه ٿا ڪري سگھن، ٻي صورت ۾ هڪ بال جي پنن جي جوڙجڪ ٺاهي ويندي، PCR امپليفڪيشن کي متاثر ڪندي.
- ATCG کي پرائمر جي ترتيب ۾ جيترو ممڪن طور تي ورهايو وڃي، ۽ 3′ ٽرمينل بيس کي T کان بچڻ گهرجي.
ضميمو1: سيايل سڌوRT-qPCR کٽ جو جزوt اضافي پيڪيج
1. سيل ليسس حل
| سيل ليسس حل | |||
| کٽ جا اجزاء (24-سٺو lysis نظام / چڱي طرح) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٽي | 500 ٽي | ||
| حصواي | بفر CL | 20 مليل | 100 مليل |
| Foregene Protease پلس II | 400 μl | 1 ملي × 2 | |
| بفر ايس ٽي | 1 ملي × 2 | 10 مليل | |
| حصوII | ڊي اين اي ريزر | 400 μl | 1 ملي × 2 |
| RT مکس | |
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٽي | |
| 5 × سڌو RT ميڪس | 800 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 ملي × 2 |
| qPCR مکس | ||
| کٽ جا اجزاء (20 μl ردعمل سسٽم) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ٽي | 1000 ٽي | |
| 2 × سڌو qPCR ميڪس-تقمان | 1 ملي × 2 | 1.7 ملي × 6 |
| 20 × ROX حوالو رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-مفت ddH2O | 1.7 مليل | 10 مليل |
هدايتون:
