ڪوبه واڌارو سگنل

1. ڪِٽ ۾ موجود ٽاڪ ڊي اين اي پوليمريز پنهنجي سرگرمي وڃائي ويهندي آهي ڇاڪاڻ ته کٽ جي غلط اسٽوريج يا ختم ٿيڻ سبب.
سفارش: کٽ جي اسٽوريج جي حالتن جي تصديق ڪريو؛PCR سسٽم ۾ Taq DNA Polymerase جي مناسب مقدار کي ٻيهر شامل ڪريو يا لاڳاپيل تجربن لاءِ نئين حقيقي وقت PCR کٽ خريد ڪريو.

2.DNA ٽيمپليٽ ۾ Taq DNA Polymerase جا تمام گھڻا inhibitors آھن.
صلاح: ٽيمپليٽ کي صاف ڪريو يا استعمال ٿيل ٽيمپليٽ جي مقدار کي گھٽايو.

3.The Mg2+ ڪنسنٽريشن مناسب ناهي.
تجويز: اسان جي مهيا ڪيل 2 × حقيقي پي سي آر ميڪس جو Mg2+ ڪنسنٽريشن 3.5 ايم ايم آهي.بهرحال، ڪجهه خاص پرائمر ۽ ٽيمپليٽس لاءِ، Mg2+ ڪنسنٽريشن وڌيڪ ٿي سگهي ٿو.تنهن ڪري، توهان سڌو MgCl2 شامل ڪري سگهو ٿا Mg2+ ڪنسنٽريشن کي بهتر ڪرڻ لاءِ.اهو تجويز ڪيل آهي Mg2+ 0.5mM هر وقت بهتر ڪرڻ لاءِ.

4. پي سي آر ايمپليفڪيشن حالتون مناسب نه آهن، ۽ پرائمر ترتيب يا ڪنسنٽريشن نا مناسب آهي.
تجويز: پرائمر جي ترتيب جي صحيحيت جي تصديق ڪريو ۽ پرائمر کي خراب نه ڪيو ويو آهي؛جيڪڏهن ايمپليفڪيشن سگنل سٺو نه آهي، ڪوشش ڪريو اينيلنگ جي درجه حرارت کي گهٽائڻ ۽ پرائمر ڪنسنٽريشن کي مناسب طور تي ترتيب ڏيو.

5. ٽيمپليٽ جو مقدار تمام ٿورو يا تمام گهڻو آهي.
سفارش: ٽيمپليٽ لينرائيزيشن گريڊيئيٽ ڊيليشن کي انجام ڏيو، ۽ ريئل ٽائيم پي سي آر جي تجربي لاءِ بهترين پي سي آر اثر سان ٽيمپليٽ ڪنسنٽريشن چونڊيو.

NTC تمام گھڻي فلورسنس قدر آھي

1. آپريشن دوران ريجنٽ آلودگي سبب.
سفارش: ريئل ٽائيم پي سي آر تجربن لاءِ نئين ريجنٽ سان تبديل ڪريو.

2.Contamination PCR رد عمل سسٽم جي تياري دوران واقع ٿي.
سفارش: آپريشن دوران ضروري حفاظتي اپاءَ ورتا وڃن، جھڙوڪ: ليٽڪس دستانا پائڻ، فلٽر سان پائيپٽ ٽپ استعمال ڪرڻ وغيره.

3. پرائمر خراب ٿي ويا آھن، ۽ پرائمر جي خراب ٿيڻ سان غير مخصوص واڌارو ٿيندو.
تجويز: SDS-PAGE electrophoresis استعمال ڪريو معلوم ڪرڻ لاءِ ته ڇا پرائمر خراب ٿي ويا آھن، ۽ انھن کي تبديل ڪريو نئين پرائمر سان ريئل ٽائيم پي سي آر تجربن لاءِ.

پرائمر ڊيمر يا غير مخصوص امپلائيشن

1.The Mg2+ ڪنسنٽريشن مناسب ناهي.
تجويز: 2× حقيقي PCR EasyTM Mix جو Mg2+ ڪنسنٽريشن جيڪو اسان مهيا ڪريون ٿا 3.5 mM آهي.بهرحال، ڪجهه خاص پرائمر ۽ ٽيمپليٽس لاءِ، Mg2+ ڪنسنٽريشن وڌيڪ ٿي سگهي ٿو.تنهن ڪري، توهان سڌو MgCl2 شامل ڪري سگهو ٿا Mg2+ ڪنسنٽريشن کي بهتر ڪرڻ لاءِ.اهو تجويز ڪيل آهي Mg2+ 0.5mM هر وقت بهتر ڪرڻ لاءِ.

2.The PCR annealing گرمي پد تمام گهٽ آهي.
تجويز: PCR annealing گرمي پد 1 ℃ يا 2 ℃ هر وقت وڌايو.

3.The PCR پيداوار تمام ڊگهو آهي.
سفارش: حقيقي وقت جي پي سي آر پراڊڪٽ جي ڊيگهه 100-150bp جي وچ ۾ هجڻ گهرجي، 500bp کان وڌيڪ نه.

4. پرائمر خراب ٿي ويا آهن، ۽ پرائمر جي خراب ٿيڻ سان مخصوص ايمپليفڪيشن جي ظاهر ٿيڻ جي ڪري ٿي.
تجويز: SDS-PAGE electrophoresis استعمال ڪريو معلوم ڪرڻ لاءِ ته ڇا پرائمر خراب ٿي ويا آھن، ۽ انھن کي تبديل ڪريو نئين پرائمر سان ريئل ٽائيم پي سي آر تجربن لاءِ.

5. پي سي آر سسٽم نا مناسب آهي، يا سسٽم تمام ننڍو آهي.
تجويز: پي سي آر جي رد عمل جو نظام تمام ننڍڙو آهي، ان جي چڪاس جي درستگي کي گھٽائڻ جو سبب بڻائيندو.ريئل ٽائيم پي سي آر تجربو کي ٻيهر هلائڻ لاءِ مقداري PCR اوزار جي تجويز ڪيل رد عمل واري نظام کي استعمال ڪرڻ بھترين آھي.

مقداري قدرن جي خراب ورجائي قابليت

1. اوزار خراب آهي.
صلاح: اوزار جي هر پي سي آر سوراخ جي وچ ۾ غلطيون ٿي سگهن ٿيون، نتيجي ۾ درجه حرارت جي انتظام يا چڪاس دوران خراب پيداوار جي صلاحيت.مهرباني ڪري لاڳاپيل اوزار جي هدايتن جي مطابق چيڪ ڪريو.

2. نموني جي پاڪائي سٺي ناهي.
سفارش: ناپاڪ نمونا تجربي جي خراب پيداواري صلاحيت کي ڏسندا، جنهن ۾ ٽيمپليٽ ۽ پرائمر جي پاڪائي شامل آهي.ٽيمپليٽ کي ٻيهر صاف ڪرڻ لاءِ بھترين آھي، ۽ پرائمر SDS-PAGE پاران بھترين صاف ڪيا ويندا آھن.

3. پي سي آر سسٽم جي تياري ۽ اسٽوريج وقت تمام ڊگهو آهي.
صلاح: تياري کان پوءِ فوري طور تي پي سي آر جي تجربي لاءِ ريئل ٽائيم پي سي آر سسٽم استعمال ڪريو، ۽ ان کي گهڻي دير لاءِ پاسي نه ڇڏيو.

4. پي سي آر ايمپليفڪيشن حالتون مناسب نه آهن، ۽ پرائمر ترتيب يا ڪنسنٽريشن نا مناسب آهي.
تجويز: پرائمر جي ترتيب جي صحيحيت جي تصديق ڪريو ۽ پرائمر کي خراب نه ڪيو ويو آهي؛جيڪڏهن ايمپليفڪيشن سگنل سٺو نه آهي، ڪوشش ڪريو اينيلنگ جي درجه حرارت کي گهٽائڻ ۽ پرائمر ڪنسنٽريشن کي مناسب طور تي ترتيب ڏيو.

5. پي سي آر سسٽم نا مناسب آهي، يا سسٽم تمام ننڍو آهي.
تجويز: پي سي آر جي رد عمل جو نظام تمام ننڍڙو آهي، ان جي چڪاس جي درستگي کي گھٽائڻ جو سبب بڻائيندو.ريئل ٽائيم پي سي آر تجربو کي ٻيهر هلائڻ لاءِ مقداري PCR اوزار جي تجويز ڪيل رد عمل واري نظام کي استعمال ڪرڻ بھترين آھي.