مسئلن جي تجزيو لاء هدايتون

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

ڪوبه آر اين اي ڪڍي نٿو سگهجي يا نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار گهٽ آهي

عام طور تي ڪيترائي عنصر آھن جيڪي وصولي جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪن ٿا، جھڙوڪ: نمونو آر اين اي مواد، آپريشن جو طريقو، ايليوشن حجم، وغيره.

عام سببن جو تجزيو:

1. برف جو غسل يا گھٽ گرمي پد (4 ° C) آپريشن دوران سينٽرفيوگريشن.

صلاح: ڪمري جو گرمي پد (15-25 ° C) آپريشن، ڪڏهن به برفاني غسل ۽ گهٽ درجه حرارت سينٽرفيوج.

2. غير مناسب نموني اسٽوريج يا نموني اسٽوريج تمام گهڻي عرصي تائين.

صلاح: نمونن کي -80 ° C تي ذخيرو ڪريو يا مائع نائٽروجن ۾ منجمد ڪريو، ۽ بار بار منجمد ٿيل استعمال کان پاسو ڪريو؛آر اين اي ڪڍڻ لاءِ تازو گڏ ڪيل نمونا استعمال ڪرڻ جي ڪوشش ڪريو.

3. ناکافي نموني ليسس

سفارش: مھرباني ڪري پڪ ڪريو ته نموني ۽ ڪم ڪندڙ حل (Linear Acrylamide) کي چڱيءَ طرح ملايو ويو آھي ۽ 10 منٽ لاءِ ڪمري جي حرارت تي (15-25 ° C)

4. ايليوئنٽ غلط شامل ڪيو ويو

سفارش: پڪ ڪريو ته RNase-Free ddH2O صاف ڪرڻ واري ڪالمن جي جھلي جي وچ ۾ شامل ڪيو ويو آهي

5. بفر viRW2 ۾ anhydrous ethanol جو غلط مقدار

صلاح: مھرباني ڪري ھدايتن تي عمل ڪريو، بفر viRW2 ۾ anhydrous ethanol جو صحيح مقدار شامل ڪريو ۽ کٽ استعمال ڪرڻ کان اڳ انھن کي چڱي طرح ملايو.

6. غلط نموني استعمال.

تجويز: 200µl نموني جو في 500μl بفر viRL جي.گھڻي نموني مقدار جي نتيجي ۾ آر اين اي ڪڍڻ جي شرح گھٽائي ويندي.

7. نامڪمل اخراج حجم يا نامڪمل اخراج.

صلاح: صاف ڪرڻ واري ڪالمن جو ايلوئنٽ حجم 30-50μl آهي.جيڪڏهن ايليوشن اثر اطمينان بخش نه آهي، اهو اڳ ۾ گرم ٿيل RNase-Free ddH شامل ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.₂اي ۽ ڪمري جي حرارت تي رکڻ جو وقت وڌايو، جهڙوڪ 5-10 منٽ

8. Purification ڪالمن ۾ بفر viRW2 ۾ ڌوئڻ کان پوءِ ايٿانول جي رهجي وئي آهي.

تجويز: جيڪڏهن ايٿانول بفر viRW2 ۾ ڌوئڻ کان پوءِ به باقي رهي ٿو ۽ 2 منٽ لاءِ خالي-ٽيوب سينٽريفيوگريشن، صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽ لاءِ خالي-ٽيوب سينٽرفيوگريشن کان پوءِ ڇڏي سگهجي ٿو باقي ايٿانول کي مڪمل طور تي ختم ڪرڻ لاءِ.

صاف ٿيل آر اين اي ماليڪيولز جي تباهي

صاف ٿيل آر اين اي جي معيار جو تعلق عنصرن سان آهي جهڙوڪ نموني اسٽوريج، آر اينس آلودگي، ۽ آپريشن.

عام سببن جو تجزيو:

1. گڏ ڪيل نمونا وقت ۾ محفوظ نه ڪيا ويا.

صلاح: جيڪڏهن نموني گڏ ڪرڻ کان پوء وقت ۾ استعمال نه ڪيو وڃي، مهرباني ڪري ان کي ذخيرو ڪريو -80 ℃ يا مائع نائٽروجن کي فوري طور تي.آر اين اي ماليڪيولز کي ڪڍڻ لاءِ، ڪوشش ڪريو تازو گڏ ڪيل نمونا استعمال ڪريو جڏھن به ممڪن ھو.

2. گڏ ڪيل نمونا منجمد ۽ بار بار thawing هئا.

صلاح: نموني گڏ ڪرڻ ۽ ذخيرو ڪرڻ دوران بار بار منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو (هڪ ڀيرو کان وڌيڪ نه)، ٻي صورت ۾ نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار گهٽجي ويندي.

3.RNase آپريٽنگ روم ۾ متعارف ڪرايو ويو يا ڪو به ڊسپوزيبل دستانو، ماسڪ وغيره پائڻ نه هئا.

تجويز: آر اين اي ماليڪيولز کي ڪڍڻ جو تجربو هڪ الڳ آر اين اي آپريشن روم ۾ بهترين طريقي سان ڪيو ويندو آهي، ۽ تجرباتي ٽيبل کي تجربي کان اڳ صاف ڪيو ويندو آهي.تجربو دوران ڊسپوزيبل دستانو ۽ ماسڪ پائڻ لاءِ آر اين اي جي تباهي کان بچڻ لاءِ RNase تعارف جي ڪري.

4.The reagent استعمال دوران RNase کان آلوده آهي.

تجويز: نئين وائرل RNA Isolation Kit سان لاڳاپيل تجربن لاءِ مٽايو.

5. سينٽرفيوج ٽيوب جي RNase آلودگي، پائيپٽ ٽپس، وغيره. تجويز: پڪ ڪريو ته سينٽريفيوج ٽيوب، پائپٽ ٽپس، ۽ پائپيٽ سڀ RNase-مفت آهن.

صاف ٿيل آر اين اي ماليڪيولز هيٺئين پاسي جي تجربن کي متاثر ڪيو

پيوريفڪيشن ڪالم ذريعي صاف ڪيل آر اين اي ماليڪيولز هيٺئين پاسي جي تجربن تي اثرانداز ٿيندا جيڪڏهن تمام گهڻو لوڻ آئن يا پروٽين آهن، جهڙوڪ: ريورس ٽرانسڪرپشن، ناردرن بلٽ وغيره.

1. نڪتل آر اين اي ماليڪيولن ۾ لوڻ جا آئن باقي بچيا آهن.

سفارش: پڪ ڪريو ته اينهائيڊروس ايٿانول جو صحيح مقدار بفر viRW2 ۾ شامل ڪيو ويو آهي، ۽ صاف ڪرڻ واري ڪالم کي ٻه ڀيرا ڌوئي صحيح سينٽرفيوگريشن اسپيڊ موجب آپريٽنگ هدايتون؛ جيڪڏهن اڃا به لوڻ آئنز باقي آهن، ته توهان بفر viRW2 کي صاف ڪرڻ واري ڪالم ۾ شامل ڪري سگهو ٿا، ۽ ڪمري جي گرمي پد 5 منٽن تي ڇڏي ڏيو.پوء لوڻ آئن جي آلودگي کي وڏي حد تائين ختم ڪرڻ لاء سينٽرفيوگريشن انجام ڏيو

2. ايلوٽ ٿيل آر اين اي ماليڪيولن ۾ باقي ايٿانول موجود آهن

صلاح: هڪ ڀيرو تصديق ڪرڻ ته صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي بفر viRW2 ذريعي صاف ڪيو ويو آهي، آپريٽنگ هدايتن تي سينٽرفيوگل رفتار جي مطابق خالي-ٽيوب سينٽرفيوگريشن انجام ڏيو.جيڪڏهن اڃا تائين ايٿانول باقي آهي، ان کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽن لاءِ ڇڏي سگھجي ٿو خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن کان پوءِ باقي ايٿانول کي وڏي حد تائين ختم ڪرڻ لاءِ.

هدايتون:

وائرل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ ھدايت وارو دستور