Escherichia Coli O157: H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR فلورسنٽ پروب ميٿڊ/ لائوفيلائيزيشن)
کٽ جي وضاحت:
ٻلي. نمبر.ايف پي 103
اهو E. coli O157:H7 جي تيزيءَ سان ڳولڻ ۽ اسڪريننگ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي کاڌي، کاڌ خوراڪ، پاڻي جي نموني ۽ ماحولياتي نموني ۾.
وضاحتون
لاء استعمال ڪيو ويندو آهيE. coli O157:H7 جي تيزيءَ سان سڃاڻپ ۽ اسڪريننگ کاڌي، کاڌ، پاڻي جي نموني ۽ ماحولياتي نموني ۾.
[آزمائشي اصول]
فلورسنٽ پي سي آر ٽيڪنالاجي جي اصول جي مطابق، مخصوص پرائمر ۽ تاقمان پروبس Escherichia coli O157: H7 جي مخصوص جين لاءِ ٺاهيا ويا آهن، ۽ فلورسنٽ پي سي آر اوزار جي ذريعي معلوم ڪيا ويا آهن، ته جيئن Escherichia coli O157: H7 جي ڊي اين اي جي کوٽائي جي سڃاڻپ کي محسوس ڪري سگهجي.
کٽ جو مواد
نوٽ: ROX چينل جي تحقيق شامل نه آهي.
| Cاجزاء | تفصيل | Qوحدت |
| بفر اي | ٽيوب | 1 |
| بفر بي | ٽيوب | 1 |
| مثبت ڪنٽرول | ٽيوب | 1 |
| ناڪاري ڪنٽرول | ٽيوب | 1 |
متوقع استعمال
لاء استعمال ڪيو ويندو آهي E. coli O157:H7 جي تيزيءَ سان سڃاڻپ ۽ اسڪريننگ کاڌي، کاڌ، پاڻي جي نموني ۽ ماحولياتي نموني ۾.
اسٽوريج حالتون ۽ ختم ٿيڻ جي تاريخ
اونداهي ۾ -20 ℃ تي اسٽور ڪريو ۽ بار بار منجمد ٿيڻ ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو.
صحيح مدت 12 آهيمهينا، ۽ پيداوار جي تاريخ ٻاهرين پيڪنگنگ تي ڏيکاريل آهي.
اوزار ۽ استعمال جون شيون
فلورسنٽ مقداري پي سي آر اوزار، پائيپٽ گن ۽ ملندڙ ٽوٽڪا، وورٽيڪ شيڪر، ميني سينٽريفيوج.
استعمال
1. نموني پروسيسنگ
1.1 نموني جو قسم: هي ڪٽ کاڌي، کاڌ خوراڪ، پاڻي جي نمونن ۽ ٻين نمونن لاءِ موزون آهي جنهن کي شڪي آهي ته Escherichia coli O157:H7.گہرے پروسيس ٿيل گوشت جي شين، مشروبات ۽ ٻين شين لاءِ جن ۾ رنگ شامل آهن، انهن کي ڌوئڻ جي ضرورت آهي ته جيئن فلورسنس سگنل جمع کي متاثر ٿيڻ کان بچڻ لاء.
1.2 نموني پروسيسنگ: GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 ٽيسٽ" جو حوالو ڏيو نمونو تيار ڪرڻ، افزودگي ڪلچر ۽ Escherichia coli O157 کي الڳ ڪرڻ لاءِ: H7.
- Nucleic امل ڪڍڻ
1.5 ملي ليٽر سينٽريفيوج ٽيوب ۾ 20 ملي ايل افزودگي جو حل وٺو، 200 μL مائڪروبيل لائسٽ (اضافي کٽ گهربل آهي) شامل ڪريو، 30 سيڪنڊن لاء وورٽيڪس، مختصر طور تي سينٽرريفيوج، ۽ هڪ طرف رکي ڇڏيو.
تبصرا: lysate مان نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جو عمل 10 منٽن اندر مڪمل ٿيڻ گهرجي، ۽ گهڻي وقت تائين محفوظ نه ٿو ڪري سگهجي.
3. نيوڪليڪ ايسڊ امپليڪشن
3.1 استعمال ڪرڻ لاءِ فلورسنٽ مقداري PCR اوزار کي چالو ڪريو.
بفر A ۽ Buffer B کٽ مان، انهن کي چڱي طرح ڳرايو، ۽ مختصر طور تي سينٽرفيوج.شامل ڪريو 18 μL بفر A ۽ 2 μL بفر B هر PCR ردعمل ٽيوب ۾.پوءِ شامل ڪريو 5 mL هر هڪ منفي ڪنٽرول، نڪتل نيوڪليڪ ايسڊ، ۽ مثبت ڪنٽرول PCR رد عمل واري ٽيوب ۾، ٽيوب کي ڪيپ ڪريو، ۽ سينٽرفيوج کي مختصر طور تي.
3.3 PCR ردعمل ٽيوب کي فلورسنٽ PCR مشين ڏانھن منتقل ڪريو، ۽ ھيٺيون طريقا استعمال ڪريو ايمپليفڪيشن تجربن کي انجام ڏيڻ لاءِ: رد عمل واري نظام لاءِ 25 mL چونڊيو، ھر چڪر لاءِ 60°C تي فلوروسينس سگنل گڏ ڪريو، ۽ چڪاسي چينل لاءِ FAM چونڊيو.
| قدم | پروگرام | چڪر جو تعداد |
| 1 | 37 ℃ 5 منٽ | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (فلوروسينس گڏ ڪريو) |
مسئلن جي تجزيو لاء هدايتون
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ڪوبه آر اين اي ڪڍي نٿو سگهجي يا نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار گهٽ آهي
عام طور تي ڪيترائي عنصر آھن جيڪي وصولي جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪن ٿا، جھڙوڪ: نمونو آر اين اي مواد، آپريشن جو طريقو، ايليوشن حجم، وغيره.
عام سببن جو تجزيو:
1. برف جو غسل يا گھٽ گرمي پد (4 ° C) آپريشن دوران سينٽرفيوگريشن.
صلاح: ڪمري جو گرمي پد (15-25 ° C) آپريشن، ڪڏهن به برفاني غسل ۽ گهٽ درجه حرارت سينٽرفيوج.
2. غير مناسب نموني اسٽوريج يا نموني اسٽوريج تمام گهڻي عرصي تائين.
صلاح: نمونن کي -80 ° C تي ذخيرو ڪريو يا مائع نائٽروجن ۾ منجمد ڪريو، ۽ بار بار منجمد ٿيل استعمال کان پاسو ڪريو؛آر اين اي ڪڍڻ لاءِ تازو گڏ ڪيل نمونا استعمال ڪرڻ جي ڪوشش ڪريو.
3. ناکافي نموني ليسس
سفارش: مھرباني ڪري پڪ ڪريو ته نموني ۽ ڪم ڪندڙ حل (Linear Acrylamide) کي چڱيءَ طرح ملايو ويو آھي ۽ 10 منٽ لاءِ ڪمري جي حرارت تي (15-25 ° C)
4. ايليوئنٽ غلط شامل ڪيو ويو
سفارش: پڪ ڪريو ته RNase-Free ddH2O صاف ڪرڻ واري ڪالمن جي جھلي جي وچ ۾ شامل ڪيو ويو آهي
5. بفر viRW2 ۾ anhydrous ethanol جو غلط مقدار
صلاح: مھرباني ڪري ھدايتن تي عمل ڪريو، بفر viRW2 ۾ anhydrous ethanol جو صحيح مقدار شامل ڪريو ۽ کٽ استعمال ڪرڻ کان اڳ انھن کي چڱي طرح ملايو.
6. غلط نموني استعمال.
تجويز: 200µl نموني جو في 500μl بفر viRL جي.گھڻي نموني مقدار جي نتيجي ۾ آر اين اي ڪڍڻ جي شرح گھٽائي ويندي.
7. نامڪمل اخراج حجم يا نامڪمل اخراج.
صلاح: صاف ڪرڻ واري ڪالمن جو ايلوئنٽ حجم 30-50μl آهي.جيڪڏهن ايليوشن اثر اطمينان بخش نه آهي، اهو اڳ ۾ گرم ٿيل RNase-Free ddH شامل ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.2اي ۽ ڪمري جي حرارت تي رکڻ جو وقت وڌايو، جهڙوڪ 5-10 منٽ
8. Purification ڪالمن ۾ بفر viRW2 ۾ ڌوئڻ کان پوءِ ايٿانول جي رهجي وئي آهي.
تجويز: جيڪڏهن ايٿانول بفر viRW2 ۾ ڌوئڻ کان پوءِ به باقي رهي ٿو ۽ 2 منٽ لاءِ خالي-ٽيوب سينٽريفيوگريشن، صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽ لاءِ خالي-ٽيوب سينٽرفيوگريشن کان پوءِ ڇڏي سگهجي ٿو باقي ايٿانول کي مڪمل طور تي ختم ڪرڻ لاءِ.
صاف ٿيل آر اين اي ماليڪيولز جي تباهي
صاف ٿيل آر اين اي جي معيار جو تعلق عنصرن سان آهي جهڙوڪ نموني اسٽوريج، آر اينس آلودگي، ۽ آپريشن.
عام سببن جو تجزيو:
1. گڏ ڪيل نمونا وقت ۾ محفوظ نه ڪيا ويا.
صلاح: جيڪڏهن نموني گڏ ڪرڻ کان پوء وقت ۾ استعمال نه ڪيو وڃي، مهرباني ڪري ان کي ذخيرو ڪريو -80 ℃ يا مائع نائٽروجن کي فوري طور تي.آر اين اي ماليڪيولز کي ڪڍڻ لاءِ، ڪوشش ڪريو تازو گڏ ڪيل نمونا استعمال ڪريو جڏھن به ممڪن ھو.
2. گڏ ڪيل نمونا منجمد ۽ بار بار thawing هئا.
صلاح: نموني گڏ ڪرڻ ۽ ذخيرو ڪرڻ دوران بار بار منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو (هڪ ڀيرو کان وڌيڪ نه)، ٻي صورت ۾ نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار گهٽجي ويندي.
3.RNase آپريٽنگ روم ۾ متعارف ڪرايو ويو يا ڪو به ڊسپوزيبل دستانو، ماسڪ وغيره پائڻ نه هئا.
تجويز: آر اين اي ماليڪيولز کي ڪڍڻ جو تجربو هڪ الڳ آر اين اي آپريشن روم ۾ بهترين طريقي سان ڪيو ويندو آهي، ۽ تجرباتي ٽيبل کي تجربي کان اڳ صاف ڪيو ويندو آهي.تجربو دوران ڊسپوزيبل دستانو ۽ ماسڪ پائڻ لاءِ آر اين اي جي تباهي کان بچڻ لاءِ RNase تعارف جي ڪري.
4.The reagent استعمال دوران RNase کان آلوده آهي.
تجويز: نئين وائرل RNA Isolation Kit سان لاڳاپيل تجربن لاءِ مٽايو.
5. سينٽرفيوج ٽيوب جي RNase آلودگي، پائيپٽ ٽپس، وغيره. تجويز: پڪ ڪريو ته سينٽريفيوج ٽيوب، پائپٽ ٽپس، ۽ پائپيٽ سڀ RNase-مفت آهن.
صاف ٿيل آر اين اي ماليڪيولز هيٺئين پاسي جي تجربن کي متاثر ڪيو
پيوريفڪيشن ڪالم ذريعي صاف ڪيل آر اين اي ماليڪيولز هيٺئين پاسي جي تجربن تي اثرانداز ٿيندا جيڪڏهن تمام گهڻو لوڻ آئن يا پروٽين آهن، جهڙوڪ: ريورس ٽرانسڪرپشن، ناردرن بلٽ وغيره.
1. نڪتل آر اين اي ماليڪيولن ۾ لوڻ جا آئن باقي بچيا آهن.
سفارش: پڪ ڪريو ته اينهائيڊروس ايٿانول جو صحيح مقدار بفر viRW2 ۾ شامل ڪيو ويو آهي، ۽ صاف ڪرڻ واري ڪالم کي ٻه ڀيرا ڌوئي صحيح سينٽرفيوگريشن اسپيڊ موجب آپريٽنگ هدايتون؛ جيڪڏهن اڃا به لوڻ آئنز باقي آهن، ته توهان بفر viRW2 کي صاف ڪرڻ واري ڪالم ۾ شامل ڪري سگهو ٿا، ۽ ڪمري جي گرمي پد 5 منٽن تي ڇڏي ڏيو.پوء لوڻ آئن جي آلودگي کي وڏي حد تائين ختم ڪرڻ لاء سينٽرفيوگريشن انجام ڏيو
2. ايلوٽ ٿيل آر اين اي ماليڪيولن ۾ باقي ايٿانول موجود آهن
صلاح: هڪ ڀيرو تصديق ڪرڻ ته صاف ڪرڻ واري ڪالمن کي بفر viRW2 ذريعي صاف ڪيو ويو آهي، آپريٽنگ هدايتن تي سينٽرفيوگل رفتار جي مطابق خالي-ٽيوب سينٽرفيوگريشن انجام ڏيو.جيڪڏهن اڃا تائين ايٿانول باقي آهي، ان کي ڪمري جي حرارت تي 5 منٽن لاءِ ڇڏي سگھجي ٿو خالي ٽيوب سينٽرفيوگريشن کان پوءِ باقي ايٿانول کي وڏي حد تائين ختم ڪرڻ لاءِ.
هدايتون:
وائرل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ ھدايت وارو دستور
