A260/A230 جو گھٽ تناسب عام طور تي 230nm تي وڌ ۾ وڌ جذب واري ويڪرائي ڦاڪ سان نجاست جي ڪري ٿئي ٿو.اچو ته ڏسون ته اهي نجاست ڇا آهن:

• عام آلودگي	جذب موج جي ڊيگهه	تناسب جو اثر
  پروٽين	~ 230nm ۽ 280nm	A جي هڪ ئي وقت ۾ گهٽتائي260/A 280۽ الف260/A 280تناسب
  گوانيڊائن لوڻ	220-240 اين ايم	گھٽايو A260/A 280تناسب
  فينول	~270nm	-
  ٽريزول	~ 230nm ۽ 270nm	گھٽايو A260/A 280تناسب
  EDTA	~230nm	گھٽايو A260/A 280تناسب
  ايٿانول	230-240 اين ايم	گھٽايو A260/A 280تناسب

 
 
 
جذب موج جي ڊيگهه ۽ عام آلودگي جي برعڪس قدر

Pرت جي آلودگي
پروٽين جي آلودگي کي نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ واري عمل ۾ سڀ کان وڌيڪ عام آلودگي سمجهي سگهجي ٿو.پروٽين مٿئين آبي مرحلي ۽ هيٺين جي وچ ۾ موجود آهينامياتيمرحلوآلودگي هڪ ئي وقت A260/A280 ۽ A260/A230 جو تناسب گهٽائي ڇڏيندو، ۽ A260/A230 جو تناسب A260/A280 جي نسبت وڌيڪ واضح طور تي تبديل ٿيندو.
بعد جي دورانريورس ٽرانسپشنor qPCR ردعمل, پروٽين جي رهائش کي روڪي سگھي ٿو يا اينزيم جي ڪم سان مداخلت ڪري سگھي ٿو.پروٽين جي آلودگي کان بچڻ جو بهترين طريقو اهو آهي ته "وڌيڪ کان گهٽ، هڪ ننڍڙي رقم ڪيترائي ڀيرا" جي اصول کي ذهن ۾ رکڻ لاء جڏهن سپرنٽنٽ جي خواهشمند آهي.

2. گيانڊينيم آلودگي
هائيڊروڪلورائڊ (GuHCl) ۽ guanidine thiocyanate (GTC) پروٽينن کي ختم ڪرڻ جو اثر رکن ٿا، جيڪي نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ واري عمل دوران سيل جھلين کي جلدي تباهه ڪري سگھن ٿا، پروٽين جي خراب ٿيڻ ۽ ورهاڱي جو سبب بڻجن ٿا.GuHCl ۽ GTC جي جذب موج 220-240 nm جي وچ ۾ آهي، ۽residual guanidinium لوڻ A260/A230 جي تناسب کي گھٽائي ڇڏيندو.جيتوڻيڪ بقايا گيانڊينيم لوڻ تناسب گھٽائي ڇڏيندو،هيٺئين پاسي جي تجربن تي اثر اصل ۾ ناگزير آهي.

3. Trizol آلودگي
Trizol جو بنيادي جزو فينول آهي.فينول جو بنيادي ڪم سيلز کي لڪائڻ ۽ سيلز ۾ پروٽين ۽ نيوڪليڪ ايسڊ مواد ڇڏڻ آهي.جيتوڻيڪ فينول مؤثر طريقي سان پروٽينن کي رد ڪري سگهي ٿو، اهو مڪمل طور تي RNase سرگرمي کي روڪي نٿو سگهي.تنهن ڪري، 8-hydroxyquinoline، guanidine isothiocyanate، β-mercaptoethanol، وغيره TRIzol ۾ شامل ڪيا ويا آهن ته جيئن endogenous ۽ exogenous RNase کي روڪيو وڃي.
سيلولر آر اين اي کي ڪڍڻ وقت، ٽريزول تيزيءَ سان سيلز کي لڪائي سگهي ٿو ۽ سيلز مان نڪرندڙ نيوڪليز کي روڪي ٿو، ۽ بقايا ٽريزول A260/A230 جي تناسب کي خاص طور تي گهٽائي ڇڏيندو.
پروسيسنگ جو طريقو: جڏهن سينٽرفيوگنگ ڪيو وڃي، اهو ياد رکڻ گهرجي ته ٽريزول ۾ موجود فينول 4 ° ۽ ڪمري جي حرارت جي حالت ۾ پاڻي جي مرحلي ۾ آسانيء سان حل ٿي ويندو آهي.

4. Ethanol باقي
ايٿانول آخري عمل ۾ ڊي اين اي کي تيز ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي جڏهن ته لوڻ جي آئن کي ٽوڙڻ لاءِ جيڪي ڊي اين اي سان جڙيل هوندا.سڀ کان وڌيڪ جي جذب wavelengthجذب جي چوٽيايٿانول پڻ 230-240 nm تي آهي، جيڪوA260/A230 جي تناسب کي به گھٽائي ڇڏيندو.
ايٿانول جي رهجي وڃڻ کان بچڻ جو طريقو آخري ايليوشن دوران ٻه ڀيرا ورجائي سگھجي ٿو،فوم جو ڪپٻن منٽن لاءِ ايٿانول کي مڪمل طور تي بخار ٿيڻ جي اجازت ڏيڻ لاءِ بفر شامل ڪرڻ کان اڳ.
بهرحال، اهو ڄاڻڻ گهرجي ته تناسب صرف آر اين اي جي معيار جو هڪ تشخيص انڊيڪس آهي.جيڪڏهن مٿي بيان ڪيل عملن کي سختي سان ضابطو ڪيو وڃي، تناسب ۽ معياري حد جي وچ ۾ انحراف هيٺئين پاسي جي تجربن تي وڏو اثر نه پوندو.
لاڳاپيل مصنوعات:
جانورن جي ڪل آر اين اي آئسوليشن کٽ
پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ
سيل ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ
پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن ڪٽ پلس