RT-qPCR عام پي سي آر ٽيڪنالاجي مان ٺهيل آهي.اهو روايتي پي سي آر رد عمل واري نظام ۾ فلورسنٽ ڪيميڪل (فلوريسنٽ رنگ يا فلورسنٽ پروبس) شامل ڪري ٿو، ۽ پي سي آر اينيلنگ ۽ توسيع واري عمل کي حقيقي وقت ۾ انهن جي مختلف روشني واري ميڪانيزم جي مطابق ڳولي ٿو.وچولي ۾ فلورسنٽ سگنل تبديليون پي سي آر جي هر چڪر ۾ پيداوار جي تبديلي جي مقدار کي ڳڻڻ لاء استعمال ڪيا ويا آهن.في الحال، سڀ کان وڌيڪ عام طريقا آهن فلورسنٽ رنگ جو طريقو ۽ تحقيق جو طريقو.

فلورسنٽ رنگ جو طريقو:
ڪجھ فلورسنٽ رنگ، جھڙوڪ SYBR Green Ⅰ، PicoGreen، BEBO، وغيره، پاڻ ۾ روشني خارج نه ڪندا آھن، پر dsDNA جي ننڍڙي نالن سان جڙيل ٿيڻ کان پوءِ فلوروسينس خارج ڪندا آھن.تنهن ڪري، PCR ردعمل جي شروعات ۾، مشين فلورسنٽ سگنل کي ڳولي نه ٿو سگهي.جڏهن رد عمل annealing-extension (ٻن قدمن جو طريقو) يا ايڪسٽينشن اسٽيج (ٽي-مرحلي طريقو) ڏانهن وڌي ٿو، هن وقت ڊبل اسٽريڊس کوليا ويندا آهن، ۽ نئين ڊي اين اي پوليمريز اسٽرينڊ سنٿيسس جي دوران، فلورسنٽ ماليڪيولز dsDNA مائنر گروو ۽ ايمٽ فلوورسڪ ۾ گڏ ٿين ٿا.جيئن ته PCR سائيڪلن جو تعداد وڌي ٿو، وڌيڪ ۽ وڌيڪ رنگ dsDNA سان گڏ ٿين ٿا، ۽ فلورسنٽ سگنل پڻ مسلسل وڌايو ويو آهي.مثال طور SYBR Green Ⅰ وٺو.
تحقيق جو طريقو:
Taqman تحقيق سڀ کان عام استعمال ٿيل hydrolysis تحقيق آهي.تحقيق جي 5′ آخر ۾ هڪ فلورسنٽ گروپ آهي، عام طور تي FAM.پروب بذات خود ٽارگيٽ جين لاءِ هڪ تسلسل آهي.فلوروفور جي 3′ پڇاڙيءَ ۾ هڪ فلورسنٽ ڪونچنگ گروپ آهي.fluorescence resonance energy transfer (Förster resonance energy transfer, FRET) جي اصول موجب، جڏهن رپورٽر فلورسنٽ گروپ (ڊونر فلورسنٽ ماليڪيول) ۽ quenching fluorescent گروپ (قبول ڪندڙ fluorescent ماليڪيول) جڏهن excitation spectrum overlap ٿي وڃي ٿو ۽ فاصلو تمام گهڻو ويجهو ٿي سگهي ٿو. قبول ڪندڙ ماليڪيول جو fluorescence، جڏهن ته autofluorescence ڪمزور آهي.تنهن ڪري، PCR ردعمل جي شروعات ۾، جڏهن تحقيق آزاد آهي ۽ سسٽم ۾ برقرار آهي، رپورٽر فلورسنٽ گروپ فلورسنس کي خارج نه ڪندو.جڏهن annealing، پرائمر ۽ تحقيق ٽيمپليٽ سان پابند.توسيع واري مرحلي دوران، پوليميرس مسلسل نئين زنجيرن کي گڏ ڪري ٿو.ڊي اين اي پوليمريز ۾ 5′-3′ exonuclease سرگرمي آهي.جڏهن جاچ تائين پهچندي، ڊي اين اي پوليميرس ٽيمپليٽ مان جاچ کي هائيڊروائيز ڪندو، رپورٽر فلورسنٽ گروپ کي ڪوينچر فلورسنٽ گروپ کان الڳ ڪندو، ۽ فلورسنٽ سگنل جاري ڪندو.جيئن ته پروب ۽ ٽيمپليٽ جي وچ ۾ هڪ کان هڪ تعلق آهي، جاچ جو طريقو، ٽيسٽ جي درستگي ۽ حساسيت جي لحاظ کان رنگ جي طريقي کان بهتر آهي.

تصوير 1 اصول qRT-PCR

پرائمر ڊيزائن
اصول:

پرائمر کي نيوڪليڪ ايسڊ سيريز جي محفوظ علائقي ۾ ڊزائين ڪيو وڃي ۽ خاصيت هجي.

cDNA sequence استعمال ڪرڻ بھترين آھي، ۽ mRNA sequence پڻ قابل قبول آھي.جيڪڏهن نه، ڊي اين اي جي ترتيب جي سي ڊي ڊي علائقي جي ڊيزائن کي ڳوليو.
فلورسنٽ مقداري پراڊڪٽ جي ڊيگهه 80-150bp آهي، سڀ کان ڊگھي 300bp آهي، پرائمر جي ڊيگهه عام طور تي 17-25 بيز جي وچ ۾ آهي، ۽ اپ اسٽريم ۽ هيٺيون پرائمر جي وچ ۾ فرق تمام وڏو نه هجڻ گهرجي.

G+C مواد 40% ۽ 60% جي وچ ۾ آهي، ۽ 45-55% بهترين آهي.
TM قدر 58-62 درجا جي وچ ۾ آهي.
ڪوشش ڪريو پرائمر ڊائمرز ۽ سيلف ڊائمرز کان پاسو ڪريو، (مسلسل 4 جوڑوں کان وڌيڪ ڪمپليمينٽري بيسز جو ظاهر نه ٿيو) وارن جي پنن جي جوڙجڪ، جيڪڏھن ناگزير هجي، ΔG<4.5kJ/mol* ٺاهيو جيڪڏھن توھان پڪ نه ٿا ڪري سگھو ته gDNA کي ريورس ٽرانسڪرپشن دوران ھٽايو ويو آھي صاف، اھو بھتر آھي ته انٽرون جي پرائمر کي ڊيزائين ڪريو، GAT موڊ کان پاسو نه ٿي سگھي، GAT ′ 3 کان پاسو ڪري سگھجي ٿو. /C، A/G مسلسل ساخت (2-3) پرائمر ۽ غير
مخصوص هومولوجي جو هيٽروجني طور تي وڌايل تسلسل ترجيحي طور تي 70 سيڪڙو کان گهٽ آهي يا 8 مڪمل ڪندڙ بنيادي هومولوجي آهي.
ڊيٽابيس:
CottonFGD ڳولا لفظن جي ذريعي
پرائمر ڊيزائن:
IDT-qPCR پرائمر ڊيزائن

Fig2 IDT آن لائن پرائمر ڊيزائن ٽول صفحو

تصوير 3 نتيجو صفحو ڊسپلي
lncRNA پرائمر جي ڊيزائن:
lncRNA:ساڳيو قدم mRNA وانگر.
miRNA:اسٽيم-لوپ طريقي جو اصول: جيئن ته سڀئي miRNAs اٽڪل 23 NT جا مختصر تسلسل آهن، سڌو PCR جي چڪاس نه ٿي ڪري سگھجي، تنهنڪري اسٽيم-لوپ ترتيب وارو اوزار استعمال ڪيو ويندو آهي.اسٽيم-لوپ جي ترتيب تقريباً 50 NT جو هڪ واحد-اسٽينڊڊ ڊي اين اي آهي، جيڪو پنهنجي پاڻ ۾ وار پن جي جوڙجڪ ٺاهي سگهي ٿو.3 'آخر کي miRNA جزوي ٽڪرا لاءِ مڪمل تسلسل جي طور تي ڊزائين ڪري سگهجي ٿو، پوءِ ٽارگيٽ miRNA کي ريورس ٽرانسڪرپشن دوران اسٽيم-لوپ جي ترتيب سان ڳنڍجي سگھجي ٿو، ۽ ڪل ڊگھائي 70bp تائين پهچي سگھي ٿي، جيڪا qPCR پاران مقرر ڪيل پراڊڪٽ جي ڊگھائي جي مطابق آھي.ٽائلنگ miRNA پرائمر ڊيزائن.
ايمپليفڪيشن-مخصوص سڃاڻپ:
آن لائين ڌماڪي جو ڊيٽابيس: CottonFGD ڌماڪي جي ترتيب سان هڪجهڙائي
Local blast: Blast+ استعمال ڪرڻ جو حوالو ڏيو لوڪل blast ڪرڻ لاءِ، لينڪس ۽ ميڪوس سڌو سنئون مقامي ڊيٽابيس قائم ڪري سگھن ٿا، Win10 سسٽم به ubuntu bash انسٽال ڪرڻ کان پوءِ ڪري سگھجي ٿو.مقامي ڌماڪي جو ڊيٽابيس ۽ مقامي ڌماڪو ٺاهيو؛ubuntu bash win10 تي کوليو.
نوٽ: اپلينڊ ڪپهه ۽ سمنڊ جي ٻيٽ ڪپهه tetraploid فصل آهن، تنهنڪري ڌماڪي جي نتيجي ۾ اڪثر ٻه يا وڌيڪ ميچ هوندا.ماضي ۾، اين اي يو سي ڊيز کي ڊيٽابيس جي طور تي استعمال ڪندي ڌماڪي کي انجام ڏيڻ لاء صرف چند SNP اختلافن سان ٻه هومولوجس جين ڳولڻ جو امڪان آهي.عام طور تي، ٻه homologous جين کي پرائمر ڊيزائن سان الڳ نه ٿو ڪري سگهجي، تنهنڪري انهن کي ساڳيو علاج ڪيو وڃي ٿو.جيڪڏهن هڪ واضح انڊيل آهي، پرائمر عام طور تي انڊيل تي ٺهيل آهي، پر اهو ٿي سگهي ٿو پرائمر جي ثانوي ڍانچي کي آزاد توانائي وڌيڪ ٿئي ٿي، جنهن جي نتيجي ۾ ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي ۾ گهٽتائي، پر اهو ناگزير آهي.

پرائمري ثانوي ڍانچي جو پتو لڳائڻ:
مرحلا:اوپن اوليگو 7 → انپٽ ٽيمپليٽ ترتيب → بند سب-ونڊو → محفوظ ڪريو → لوڪيٽ پرائمر تي ٽيمپليٽ، پريس ڪريو ctrl+D پرائمر جي ڊيگهه مقرر ڪرڻ لاءِ → مختلف ثانوي ڍانچين جو تجزيو ڪريو، جهڙوڪ سيلف ڊائمرائيزيشن باڊي، هيٽروڊيمر، هيئر پين، ميلاپ، وغيره. شڪل 4 جي آخري ٻن تصويرن جا پرائمر نتيجا آهن.سامهون واري پرائمر جو نتيجو سٺو آهي، ڪو به واضح ڊائمر ۽ هيئرپن جي جوڙجڪ نه آهي، ڪو به مسلسل مڪمل ڪندڙ بيس نه آهي، ۽ مفت توانائي جي مطلق قيمت 4.5 کان گهٽ آهي، جڏهن ته پوئتي پرائمر مسلسل ڏيکاري ٿو 6 بيسز مڪمل ڪندڙ آهن، ۽ آزاد توانائي 8.8 آهي؛ان کان علاوه، هڪ وڌيڪ سنجيده ڊيمر 3′ آخر ۾ ظاهر ٿئي ٿو، ۽ 4 لڳاتار بنيادن جو هڪ ڊيمر ظاهر ٿئي ٿو.جيتوڻيڪ آزاد توانائي وڌيڪ نه آهي، 3′ dimer Chl سنجيدگي سان ايمپليفڪيشن جي خاصيت ۽ ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي کي متاثر ڪري سگهي ٿو.ان کان سواء، اهو ضروري آهي ته بال جي پنن، هيٽرروڊيمرز، ۽ بي ترتيب جي جانچ ڪرڻ لاء.

Fig3 oligo7 ڳولڻ جا نتيجا
وڌائڻ جي ڪارڪردگي جو پتو لڳائڻ:
پي سي آر جي رد عمل جي افاديت جي ڪارڪردگي کي پي سي آر جي نتيجن کي سنجيده متاثر ڪري ٿو.پڻ qRT-PCR ۾، ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي خاص طور تي مقدار جي نتيجن لاء اهم آهي.رد عمل بفر ۾ ٻين مادي، مشين ۽ پروٽوڪول کي هٽايو.پرائمر جي معيار تي پڻ وڏو اثر آهي qRT-PCR جي افاديت جي ڪارڪردگي تي.نتيجن جي درستگي کي يقيني بڻائڻ لاء، ٻئي لاڳاپا فلورسنس جي مقدار ۽ مطلق فلوروسينس مقدار کي پرائمر جي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي کي ڳولڻ جي ضرورت آهي.اهو تسليم ڪيو ويو آهي ته مؤثر qRT-PCR amplification ڪارڪردگي 85٪ ۽ 115٪ جي وچ ۾ آهي.اتي ٻه طريقا آهن:
1. معياري وکر جو طريقو:
هڪسي ڊي اين اي ملايو
ب.گريجوئيٽ گھٽائڻ
c.qPCR
ڊي.لڪير ريگريشن مساوات کي وڌائڻ جي ڪارڪردگي کي ڳڻڻ لاء
2. LinRegPCR
LinRegPCR حقيقي وقت RT-PCR ڊيٽا جي تجزيي لاءِ هڪ پروگرام آهي، جنهن کي مقداري PCR (qPCR) ڊيٽا پڻ سڏيو ويندو آهي، جيڪو SYBR گرين يا ساڳي ڪيمسٽري تي ٻڌل آهي.پروگرام نان بيس لائين درست ڪيل ڊيٽا استعمال ڪري ٿو، هر نموني تي بيس لائين اصلاح ڪري ٿو الڳ الڳ، ونڊو جي لڪيريت جو تعين ڪري ٿو ۽ پوءِ پي سي آر ڊيٽا سيٽ ذريعي سڌي لڪير کي فٽ ڪرڻ لاءِ لينر ريگريشن تجزيو استعمال ڪري ٿو.هن لڪير جي سلپ مان هر فرد جي نموني جي PCR ڪارڪردگي جو حساب ڪيو ويندو آهي.مطلب PCR ڪارڪردگي في ايمپليڪن ۽ Ct قيمت في نمونو استعمال ڪيو ويندو آھي ھڪڙي شروعاتي ڪنسنٽريشن في نموني کي ڳڻڻ لاءِ، بيان ڪيل صوابديدي fluorescence يونٽن ۾.ڊيٽا ان پٽ ۽ آئوٽ پٽ هڪ Excel اسپريڊ شيٽ ذريعي آهن.صرف نموني
ملائڻ جي ضرورت آهي، ڪابه ترتيب نه
قدم گهربل آهن:(مثال طور Bole CFX96 وٺو، بلڪل صاف ABI سان مشين نه آهي)
تجربو:اهو هڪ معياري qPCR تجربو آهي.
qPCR ڊيٽا آئوٽ:LinRegPCR آئوٽ پٽ فائلن جي ٻن شڪلن کي سڃاڻي سگھي ٿو: RDML يا quantification Amplification نتيجو.حقيقت ۾، اها مشين جي سائيڪل نمبر ۽ فلورسنس سگنل جي حقيقي وقت معلوم ڪرڻ جي قيمت آهي، ۽ ايمپليفڪيشن حاصل ڪئي وئي آهي لڪير واري حصي جي ڪارڪردگي جي فلورسنس تبديلي قدر جو تجزيو ڪندي.
ڊيٽا جي چونڊ: نظريي ۾، RDML قدر استعمال لائق هجڻ گھرجي.اندازو لڳايو ويو آهي ته منهنجي ڪمپيوٽر جو مسئلو اهو آهي ته سافٽ ويئر RDML کي سڃاڻي نٿو سگهي، تنهنڪري مون وٽ اصل ڊيٽا جي طور تي ايڪسل آئوٽ پُٽ ويل آهي.اها سفارش ڪئي وئي آهي ته پهرين ڊيٽا جي سخت اسڪريننگ ڪريو، جهڙوڪ نمونا شامل ڪرڻ ۾ ناڪامي وغيره. پوائنٽس آئوٽ پٽ ڊيٽا ۾ حذف ڪري سگھجن ٿيون (يقيناً، توهان انهن کي حذف نه ٿا ڪري سگهو، LinRegPCR بعد واري مرحلي ۾ انهن نقطن کي نظرانداز ڪندو)

تصوير 5 qPCR ڊيٽا برآمد

تصوير 6 اميدوارن جي نموني جي چونڊ

ڊيٽا ان پٽ:Open qualification amplification results.xls، → Open LinRegPCR → فائل → excel مان پڙهو → تصوير 7 ۾ ڏيکاريل پيرا ميٽرز کي چونڊيو → OK → بيس لائين طئي ڪرڻ تي ڪلڪ ڪريو

Fig7 linRegPCR ڊيٽا ان پٽ جا مرحلا

نتيجو:جيڪڏهن ڪو ورجائي نه آهي، ڪو گروهه جي ضرورت ناهي.جيڪڏهن ٻيهر ورجائي ٿي، گروپنگ کي نموني گروپنگ ۾ تبديل ڪري سگهجي ٿو، ۽ جين جو نالو سڃاڻپ ڪندڙ ۾ داخل ڪيو ويندو، ۽ پوء ساڳيو جين پاڻمرادو گروپ ٿي ويندو.آخرڪار، فائل تي ڪلڪ ڪريو، ايڪسپورٽ برآمد ڪريو، ۽ نتيجا ڏسو.هر کوهه جي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي ۽ R2 نتيجا ڏيکاريا ويندا.ٻيو، جيڪڏهن توهان گروپن ۾ ورهايو ٿا، صحيح سراسري واڌارو ڪارڪردگي ڏيکاري ويندي.پڪ ڪريو ته هر پرائمر جي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي 85٪ ۽ 115٪ جي وچ ۾ آهي.جيڪڏهن اهو تمام وڏو يا تمام ننڍڙو آهي، ان جو مطلب آهي ته پرائمر جي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي غريب آهي.

تصوير 8 نتيجو ۽ ڊيٽا آئوٽ

تجرباتي عمل:
آر اين اي معيار جون گهرجون:
پاڪائي:1.72.0 ظاھر ڪري ٿو ته ٿي سگھي ٿو بقايا isothiocyanate.صاف nucleic acid A260/A230 لڳ ڀڳ 2 هجڻ گهرجي .جيڪڏهن 230 nm تي مضبوط جذب ٿئي ٿو ته اهو ظاهر ڪري ٿو ته اتي نامياتي مرکبات آهن جهڙوڪ فينٽ آئنز.ان کان سواء، اهو 1.5٪ agarose gel electrophoresis ذريعي ڳولي سگهجي ٿو.مارڪر کي اشارو ڪريو، ڇاڪاڻ ته ssRNA جو ڪو به ٺهڪندڙ نه آهي ۽ ماليڪيولر وزن لاگارٿم جو هڪ لڪير تعلق نه آهي، ۽ ماليڪيولر وزن صحيح طور تي ظاهر نٿو ڪري سگهجي.ڪنسنٽريشن: نظرياتي طورنه100ng/ul کان گھٽ، جيڪڏھن ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آھي، تپاسي عام طور تي گھٽ آھي ڊگھي نه

تصوير 9 آر اين اي جيل

ان کان علاوه، جيڪڏهن نمونو قيمتي آهي ۽ آر اين اي ڪنسنٽريشن وڌيڪ آهي، ته اها سفارش ڪئي وئي آهي ته ان کي ڪڍڻ کان پوءِ ان کي ختم ڪيو وڃي، ۽ ريورس ٽرانسڪرپشن لاءِ آر اين اي کي 100-300ng/ul جي آخري ڪنسنٽريشن تائين گھٽايو وڃي.۾ريورس ٽرانسپشن جو عمل، جڏهن mRNA ٽرانسڪرپشن ڪئي ويندي آهي، oligo (dt) پرائمر جيڪي خاص طور تي polyA tails سان جڙيل هوندا آهن ريورس ٽرانسڪرپشن لاءِ استعمال ٿيندا آهن، جڏهن ته lncRNA ۽ circRNA random hexamer (Random 6 mer) پرائمر استعمال ڪندا آهن ڪل RNA جي ريورس ٽرانسڪرپشن لاءِ miRNA لاءِ، miRNA-specific trickloopan پرائمر استعمال ٿيندا آهن.ڪيتريون ئي ڪمپنيون هاڻي شروع ڪيون آهن خاص tailing کٽ.اسٽيم لوپ جي طريقي لاءِ، ٽيلنگ جو طريقو وڌيڪ سولو، اعليٰ ذريعي ۽ ريجنٽ بچائڻ وارو آهي، پر هڪ ئي خاندان جي miRNAs کي ڌار ڪرڻ جو اثر اسٽيم لوپ جي طريقي جيترو سٺو نه هجڻ گهرجي.هر ريورس ٽرانسپشن کٽ ۾ جين مخصوص پرائمر (اسٽيم لوپس) جي ڪنسنٽريشن لاءِ گهرجون هونديون آهن.miRNA لاءِ استعمال ٿيل اندروني حوالو U6 آهي.اسٽيم لوپ جي ڦيرڦار جي عمل ۾، U6 جي هڪ ٽيوب کي الڳ الڳ ڪيو وڃي، ۽ U6 جي اڳيان ۽ پوئتي پرائمر کي سڌو سنئون شامل ڪيو وڃي.ٻئي circRNA ۽ lncRNA HKGs کي اندروني حوالي طور استعمال ڪري سگھن ٿا.۾سي ڊي اين جي سڃاڻپ،
جيڪڏهن آر اين اي سان ڪو مسئلو ناهي ته سي ڊي اين اي به ٺيڪ هجڻ گهرجي.بهرحال، جيڪڏهن تجربي جي تڪميل جي تعاقب ڪئي وڃي، اهو بهتر آهي ته هڪ اندروني حوالو جين (Reference gene, RG) استعمال ڪيو وڃي جيڪو cds کان gDNA ۾ فرق ڪري سگهي.عام طور تي، آر جي هڪ گھر جي سنڀال جين آهي.، HKG) جيئن تصوير 10 ۾ ڏيکاريل آهي؛ان وقت، مان سويابين اسٽوريج پروٽين ٺاهي رهيو هوس، ۽ استعمال ڪيو ويو actin7 جنهن ۾ introns شامل هئا اندروني حوالي طور.gDNA ۾ هن پرائمر جي وڌايل ٽڪڙي جي ماپ 452bp هئي، ۽ جيڪڏهن cDNA کي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪيو ويو، اهو 142bp هو.پوءِ ٽيسٽ جي نتيجن مان معلوم ٿيو ته سي ڊي اين اي جو حصو اصل ۾ جي ڊي اين اي سان آلوده هو، ۽ اهو پڻ ثابت ٿيو ته ريورس ٽرانسڪرپشن جي نتيجي ۾ ڪو مسئلو نه هو، ۽ اهو پي سي آر لاءِ ٽيمپليٽ طور استعمال ٿي سگهي ٿو.agarose gel electrophoresis سڌو سنئون cDNA سان هلائڻ بيڪار آهي، ۽ اهو هڪ ڊفيوز بينڊ آهي، جيڪو قائل نه آهي.

تصوير 10 سي ڊي اين اي جو پتو لڳائڻ

qPCR حالتن جو تعينڪٽ جي پروٽوڪول جي مطابق عام طور تي ڪو مسئلو ناهي، خاص طور تي tm قدر جي قدم ۾.جيڪڏهن پرائمر ڊيزائن دوران ڪي پرائمر چڱيءَ طرح نه ٺاهيا ويا آهن، جنهن جي نتيجي ۾ ٽي ايم ويليو ۽ نظرياتي 60 ڊگري سينٽي گريڊ جي وچ ۾ وڏو فرق آهي، اها سفارش ڪئي وئي آهي ته سي ڊي اين اي جا نمونا ملائڻ کان پوءِ، پرائمر سان گڏ گريڊيئينٽ پي سي آر هلايو، ۽ ڪوشش ڪريو ته بينڊن کان سواءِ درجه حرارت کي TM ويل جي طور تي مقرر ڪرڻ کان پاسو ڪيو وڃي.

ڊيٽا جو تجزيو

روايتي لاڳاپو fluorescence quantitative PCR پروسيسنگ طريقو بنيادي طور 2 مطابق آهي-ΔΔCT.ڊيٽا پروسيسنگ ٽيمپليٽ.

لاڳاپيل مصنوعات:

حقيقي وقت PCR آسان^TM -تقمان

حقيقي وقت PCR آسان^TM - سائبر گرين آء

RT Easy I (Master Premix for First Strand cDNA synthesis)

RT Easy II (ماسٽر پريمڪس فرسٽ اسٽرينڊ سي ڊي اين اي سنٿيسس فار qPCR لاءِ)