RNase هڪ حساس لفظ آهي جنهن کي ڪيترائي شاگرد جيڪي اڪثر ڪري آر اين اي ڪڍڻ جا تجربا ڪن ٿا اهي ٻڌڻ نٿا چاهين.مڪمل طور تي هٿياربند، آر اين اي جيڪو آخرڪار انتهائي زهريلي ريجينٽ فينول ۽ ڪلوروفارم سان ڪڍيو ويو هو خراب ٿي ويو.مان سمجهه ۾ نه آيو آهيان!!!اڄ، اچو ته مشهور Rnase جي اصليت تي هڪ نظر رکون.

Ribonuclease (RNase)، يا RNase، ھڪڙو نيوڪليز آھي جيڪو RNA کي ھائيڊروائيز ڪري سگھي ٿو ننڍن ماليڪيولن ۾.RNase، هڪ ننڍڙو ماليڪيول پروٽين جي طور تي، غير معمولي طور تي مستحڪم آهي .روايتي تيز گرمي پد ۽ تيز پريشر ٻاڦ واري اسٽيلائيزيشن ۽ پروٽين کي روڪڻ وارا ان کي مڪمل طور تي غير فعال نٿا ڪري سگهن.RNase جي استحڪام بنيادي طور تي ساخت ۾ ڊسلفائيڊ بانڊ مان اچي ٿو.مثال طور، بوائن پينڪرياز جي عام طور تي استعمال ٿيل RNase ۾ صرف 124 امينو اسيد آهن، پر 4 ڊسلفائيڊ بانڊ شامل آهن.سلفر بانڊ ۽ ڊسلفائيڊ بانڊ RNase کي شاندار حرارتي استحڪام سان گڏ ڪن ٿا.ان کان علاوه، rnase هڪ نسبتا ننڍڙو ماليڪيولر وزن آهي ۽ جلدي ڪيترن ئي ڪيسن ۾ ان جي اصلي شڪل کي بحال ڪري سگهي ٿو.

ان کان علاوه انتهائي مستحڪم،RNases ليبارٽري ۾ عام آهن .RNase هڪ حياتياتي دفاعي ميڪانيزم آهي.سيل لاء، خارجي آر اين اي اڪثر ڪري موتمار آهي.exogenous DNA جي مقابلي ۾، exogenous RNA اڪثر وڌيڪ خطرناڪ هوندو آهي.آر اين اي خوشيءَ سان نقل ڪيو ويو آهي ۽ ترجمو ڪيو ويو آهي، تنهنڪري تقريبن سڀني جاندارن آر اين ايز کي ترقي ڪئي آهي ته جيئن خارجي آر اين اي جي حملي جي خلاف دفاع ڪن.تنهن ڪري، ليبارٽري ۾ پوکيل بيڪٽيريا سيلز ۽ توهان جيڪي آر اين اي ڪڍندا آهن، آر اين ايس جي خوشبو کي خارج ڪري ٿو.انساني جسم جي رطوبت (لعاب، ڳوڙها، وغيره) ۾ وڏي مقدار ۾ RNase شامل آهي، تنهنڪري روئڻ نه گهرجي جڏهن RNA خراب ٿي وڃي.وڌيڪ توهان روئندا، وڌيڪ خراب آر اين اي جي تباهي!!ڀيڻ دايو آر اين اي ڪڍڻ لاءِ مناسب ناهي!

ان کان علاوه، توهان جي نازڪ چمڙي ۾ پڻ تمام گهڻو RNase شامل آهي، ۽ مارڪر، پائپيٽ، فرج جا دروازا، ۽ دروازن جا هينڊلز جن کي چمڙي سان ڇڪيو ويو آهي انهن ۾ پڻ RNase شامل آهي.

تمام گھڻي گھمڻ سان، اچو ته ھڪڙي نظر رکون ته ڪيئن ڊيل ڪرڻ لاء RNases.

پهرين شيء جيڪا هرڪو سوچيندو آهي جڏهن آر اين اي کي هٽائڻ آهيڊي پي سي(ڊيٿائل پائرو ڪاربونٽ).DEPC خاص طور تي پروٽين کي رد ڪري ٿو RNase فعال گروپ هسٽيڊائن جي اميڊازول رنگ سان گڏ، ان سان اينزيم جي سرگرمي کي روڪيو.0.1% DEPC Rnase تي بهتر هٽائڻ وارو اثر رکي سگهي ٿو، پر اسان کي ڌيان ڏيڻ جي ضرورت آهي ته DEPC هڪ ڄاتل ڪارڪينجن آهي، تنهنڪري ان کي استعمال ڪرڻ وقت خاص ڌيان ڏيڻ گهرجي.

RNase لاء، اسان کي ٻن پاسن کان شروع ڪرڻ جي ضرورت آهي،سڀ کان پهرين آهي endogenous RNase جي سرگرمي کي روڪڻ

روايتي آر اين اي ڪڍڻ وارا ريجنٽس جهڙوڪ گانيڊائن آئسوٿيوسائنيٽ ۽ ڊي ٽي ٽي ٽيزول ۾ شامل آهن RNase جي ڊسلفائيڊ بانڊ کي کولي سگهن ٿا، پر اڃا به ڪجهه RNases آهن، خاص طور تي ٽشو نموني ۾، تنهنڪري گهٽ درجه حرارت تي ڌيان ڏيو.

1.ٽشو جي نموني کي فوري طور تي مائع نائٽروجن ۾ وجھو ان کي ڪڍڻ کان پوء، يا تجارتي RNA تحفظ واري حل ۾.

2.سيل جي نموني جي آر اين اي ڪڍڻ کان پوء، ان کي ليسس محلول ۾ شامل ڪريو ۽ ان کي آئس باڪس تي ليس ڪريو.

3. پيسڻ لاءِ مائع نائيٽروجن استعمال ڪرڻ بھترين آھي جڏهن بافتن جا نمونا هڪجهڙا هوندا آهن.جڏهن مائع نائٽروجن کان سواءِ اليڪٽرڪ هوموجنائيزر استعمال ڪيو وڃي، هوموجنيٽ اڊاپٽر کي مڪمل طور تي اڳي کولڻ تي ڌيان ڏيو.

ٻيو آهي exogenous DNase

1.مڪمل طور تي هٿياربند رهو، ليبارٽري ڪوٽ پائڻ، ماسڪ پائڻ، ۽ نوان دستانن جو هڪ جوڙو پائڻ جو يقين رکجو (اتنا سستي نه ٿيو!! اهو ياد رکڻ گهرجي ته ٽريزول سپر corrosive آهي، ۽ اهو پڻ دستانن جي ذريعي تمام مضبوط آهي، تنهنڪري توهان جي هٿن تي نه ڦوڪيو).

2.سڀ استعمال ٿيل پائيپٽ ٽوپس، اي پي ٽيوب، پي سي آر ٽيوب ۽ ٻيو سامان لازمي طور تي ڊي-آر اينز علاج ڪيو وڃي.اهو 0.1٪ DEPC ۾ پسائي سگھجي ٿو ۽ پوء اعلي دٻاء هيٺ دٻايو وڃي.هڪ fume هود ۾ آپريشن تي ڌيان ڏيڻ.مقامي ظالم سڌو سنئون استعمال ڪندڙ شيون خريد ڪري سگھن ٿا اينزيما کي ختم ڪرڻ لاء.

PS: اچو ته توهان کي هڪ سست طريقو ٻڌايان.جيتوڻيڪ تيز درجه حرارت ۽ اعلي دٻاء مڪمل طور تي RNase کي ختم نٿو ڪري سگهي، اهو ان جو وڏو حصو ختم ڪري ڇڏيندو.2 ڀيرا تيز گرمي پد ۽ اعلي دٻاء جو سٺو اثر آهي، ۽ آر اين اي جي نڪرڻ جو ٿورو اثر آهي.

3.شراب پروٽين کي رد ڪري سگهي ٿو،تنهنڪري آر اين اي ڪڍڻ واري ٽيبل کي 75 سيڪڙو شراب سان صاف ڪري سگهجي ٿو ، ۽ دستانا پڻ شراب سان اسپري ڪري سگھجن ٿا.

4.آخري آر اين اي کي ڦهلائڻ واري حل ۽ سينٽرفيوج ٽيوب کي پڻ ڊي-آر نيس علاج ڪيو وڃي.DEPC پاڻي عام طور تي استعمال ٿيل آر اين اي حل ڪرڻ وارو حل آهي.اچو ته DEPC پاڻي جي تياري جي صحيح طريقي جي باري ۾ ڳالهايون (ياد رکو ته تجارتي DEPC کي ٻيهر پيڪيج ڪرڻ وقت جڏهن توهان ان کي خريد ڪريو)

DEPC کي 1:1000 تي الٽرا پيور پاڻي ۾ شامل ڪريو، چڱيءَ طرح ڇڪيو، رات جو 37 ڊگري سينٽي گريڊ تي بيهڻ ڏيو، ۽ 121 ڊگري سينٽي گريڊ تي 15 منٽن لاءِ تيز گرمي پد ۽ اعليٰ دٻاءُ هيٺ sterilize ڪريو.DEPC پاڻي 1ml aliquots ۾ -20 ° C تي ذخيرو ڪري سگھجي ٿو.

آخرڪار، خلاصو ڪرڻ لاء: گهٽ درجه حرارت اهم آهي، استعمال ٿيندڙ شيون چڱي طرح هٿ ڪيا ويا آهن، مڪمل طور تي هٿياربند ۽ گهٽ ڳالهائڻ!

خير، اهو اڄ جي حڪمت عملي لاء آهي.مان توهان سڀني آر اين اي ڪنسنٽريشن ۽ پاڪيزگي جي خواهشمند آهيان جنهن جو توهان ذڪر ڪيو آهي.ٻئي A260/A280 آهن 2.0!!!

يقينا، جيڪڏهن توهان استعمال ڪريو aڪمري جي درجه حرارت آپريشن آر اين اي ڪڍڻ واري کٽ، توهان شايد مٿين مشڪلاتن کي منهن نه ڏيو.

ڪمري جي درجه حرارت تي آپريشن، ڊي اين ايز شامل ڪرڻ کان سواء، 11 منٽن ۾ سيلز مان ڪل RNA ڪڍي ٿو، ۽ 30 منٽن ۾ جانورن جي بافتن يا ٻوٽن مان ڪل RNA ڪڍي ٿو.

آزمائشي نموني لاء، مهرباني ڪري رابطو ڪريو:overseas@foregene.com

لاڳاپيل مصنوعات:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/