گلو جي وصولي کي بهتر ڪرڻ لاء طريقا

1. electrophoresis دوران نموني لوڊ وڌايو.

2. تازو تيار ڪيل الیکٹروفورسس بفر استعمال ڪريو.

3. گلو ڪٽڻ وقت، گلو ڪٽڻ جي مقدار کي گھٽائڻ لاءِ صرف پٽين سان گلو کي ڪٽڻ جي ڪوشش ڪريو: ڪجھ مقصد جي ٽڪرن سان گلو جي ضرورت نه آھي، ٻي صورت ۾ اھو بحالي جي شرح کي متاثر ڪندو.

4. گلو جي ٻن يا وڌيڪ ٽڪرن کي پگھلڻ کان پوء، ٽيوب استعمال ڪريو، ان کان سواء حجم ڪيترو به وڏو هجي ۽ ان کي ساڳئي ڪالمن ۾ منتقل ڪريو.

5. سول ۾ شامل ڪيل حل ٿورڙو وڌيڪ ٿي سگهي ٿو، جيڪو ڊي اين اي جي جھلي کي پابند ڪرڻ لاء وڌيڪ سازگار آهي، پر عام طور تي 750ul کان وڌيڪ نه آهي.

6. جيل جي وصولي جي ڪنجي ڊي اين اي کي ڪالمن ۾ لوڻ جي ڪنسنٽريشن، تيزابيت (چارج) ۽ حل جي هائيڊروفوبيسيٽي ذريعي ڪالمن ۾ پابند ڪرڻ آهي.تنهن ڪري، جيڪڏهن electrophoresis بفر جو pH تمام گهڻو آهي، 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) سول ۾ شامل ڪري سگھجي ٿو؛جھلي تي ڊي اين اي ماليڪيولن کي بهتر طور تي روڪڻ لاءِ، 30٪ آئوسوپروپنول گلو کي ٽوڙڻ کان پوءِ مائع ۾ گرم ڪرڻ لاءِ شامل ڪري سگھجي ٿو.

7. ايليوئنٽ شامل ڪرڻ کان اڳ، ڪالمن کي ڪمري جي حرارت تي ڪجھ منٽ (اٽڪل 10 منٽ) لاءِ ڇڏي ڏيو ته جيئن ايٿانول کي مڪمل طور تي بخاري بڻائي سگهجي.

8. آخرڪار، وصولي جي مقدار کي گھٽائڻ لاء گھٽ ايليونٽ شامل ڪريو.عام طور تي، 30-50μl eluent استعمال ڪيو ويندو آهي ايليوشن لاءِ (تمام ٿورو نه، ٻي صورت ۾ اهو جھلي کي گلي ڪرڻ جي قابل نه هوندو، جيڪو ايلوشن لاءِ سازگار ناهي)؛elution ٻوٽا جھلي جي مرڪز ۾ آھن، مڪمل طور تي جھلي سان جڙيل ڊي اين اي کي ختم ڪرڻ لاء.

9. ايليوئنٽ شامل ڪرڻ کان پوءِ ان کي 55 ڊگرين جي واٽر باٿ ۾ 5 منٽن لاءِ يا 50 ڊگرين جي واٽر باٿ ۾ 10 منٽن کان وڌيڪ رکي سگهجي ٿو، يا پيرا فلم سان 4 ڊگرين تي رات جو بند ڪري پوءِ ٻئي ڏينهن بحال ڪرڻ لاءِ سينٽرفيوج ڪيو وڃي، اثر سٺو ٿيندو.

10. centrifuged eluate کي واپس adsorption ڪالمن ۾ شامل ڪريو ۽ ٻيهر سينٽرفيوج ڪريو.

تفصيلي طريقا ۽ طريقا PCR پيداوار جي بحالي لاء

1. عام ربر ريزائنگنگ

جيڪڏهن توهان گلو کي بحال ڪرڻ چاهيو ٿا، اهو هڪ کٽ استعمال ڪرڻ بهتر آهي، جيڪو آسان آهي ۽ ٿوري گهڻي وصولي جي شرح آهي.جيڪڏھن توھان واقعي کي دستي طور تي بحال ڪرڻ جي ضرورت آھي، توھان گلو کي ڪٽڻ کان پوء TE جي مقدار ۾ 3 ڀيرا شامل ڪري سگھو ٿا.پاڻي جي غسل ۾ پگھلڻ کان پوء، فينول، فينول / ڪلوروفارم صاف طور تي ڪڍيا ويندا آھن، ۽ ايٿانول کي تيز ڪيو ويندو آھي.بس اهو آهي.

2. گھٽ پگھلڻ واري پوائنٽ جيل مان ڊي اين اي بحالي

DNA جي ٽڪرن کي صاف ڪرڻ لاءِ جيل جي مقدار جي برابر TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) شامل ڪريو، ۽ جيل کي مڪمل طور تي ڦهلائڻ لاءِ 5 منٽن لاءِ 65 °C پاڻيءَ جي غسل ۾ رکو.

ان کي ڪمري جي گرمي پد تي آڻڻ کان پوء، فينول جي برابر مقدار (TE سان ڀريل، TE کي مٿئين پرت ۾ بند ڪيو ويو، ۽ فينول جي هيٺين پرت کي هٽايو ويو) شامل ڪيو ويو، ۽ مرکب کي نرمي سان ملايو ويو (مڪس ڪرڻ جي ضرورت ناهي)، ۽ 12,000 rpm تي 3 منٽن لاء سينٽرفيوج ڪيو ويو.ورجايو 1-2 ڀيرا.

سپرنيٽنٽ وٺو، 3mol/L sodium acetate جو 0.1 حجم شامل ڪريو (pH 5.2) ۽ 2.5 ڀيرا حجم مطلق ايٿانول جو مقدار شامل ڪريو ايٿانول ورن کي کڻڻ لاءِ.TE جي مناسب مقدار سان صاف ٿيل ڊي اين اي کي ٽوڙيو، مواد کي ماپيو، ۽ استعمال لاءِ تيار ڪيو (ان کي ٽارگيٽ جين جي جوڙجڪ جي تجزيي، تحقيق جي تياري وغيره لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو).

3. PCR وصولي سٺي amplification specificity سان

جيڪڏهن PCR امپليفڪيشن جي خاصيت سٺي آهي، اهو صرف هڪ سادي صاف ڪرڻ ۽ پي سي آر جي پيداوار جي بحالي آهي.توهان PCR پراڊڪٽ ۾ 50ug/ml پروٽيناس K شامل ڪري سگهو ٿا، 1h لاءِ 37 درجا، فينول/ڪلوروفارم سان هڪ ڀيرو ڪڍو، ڪلوروفارم سان هڪ ڀيرو ڪڍو، ۽ سپرنٽنٽ جو 0.1 حجم شامل ڪريو.سوڊيم ايڪٽيٽ 2.5 حجمن جي مطلق ايٿانول سان ورن سان هٿ ڪيو ويو.

لاڳاپيل مصنوعات:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/