Ⅰ. ردعمل سسٽم جي حساسيت کي وڌايو:

1. الڳ اعلي معيار آر اين اي:

ڪامياب سي ڊي اين اي جي جوڙجڪ اعلي معيار جي آر اين اي مان ايندي آهي.اعلي معيار جي آر اين اي کي يقيني بڻائڻ گهرجي ته گهٽ ۾ گهٽ هڪ ڊگهو ڊگهو آهي ۽ ان ۾ رڪاوٽون شامل نه آهن جيڪي رڪارڊنگ اينزيمس تي مشتمل نه آهن، جهڙوڪ EDTA يا SDS.آر اين اي جي معيار ترتيب جي معلومات جي وڌ ۾ وڌ قيمت کي طئي ڪري ٿي جيڪا توهان سي ڊي اين اي ۾ نقل ڪري سگهو ٿا.عام آر اين اي صاف ڪرڻ جو طريقو isoocyanate/acidophenol استعمال ڪرڻ جو هڪ مرحلو طريقو آهي.RNase جي آلودگي کي روڪڻ لاءِ، RNase (جهڙوڪ پينڪرياز) ۾ مالا مال نمونن کان الڳ ٿيل RNA کي اعليٰ معيار جي RNA کي بچائڻ لاءِ فارملڊيهائيڊ جي اسٽوريج جي ضرورت آهي، جيڪا گهڻي عرصي تائين رکڻ لاءِ اڃا به وڌيڪ آهي.چوهيءَ جي جگر مان نڪتل آر اين اي بنيادي طور تي پاڻيءَ ۾ رکڻ جي هڪ هفتو کان پوءِ خراب ٿي ويو هو، جڏهن ته چوهيءَ جي اسپين مان نڪتل RNA ٽن سالن تائين پاڻيءَ ۾ رکڻ کان پوءِ به مستحڪم رهي.ان کان علاوه، 4kb کان وڏيون ٽرانسڪرپٽون ننڍيون ٽرانسڪرپٽس جي ڀيٽ ۾ RNase جي تباهي کي ٽريڪ ڪرڻ لاءِ وڌيڪ حساس هونديون آهن.اسٽوريج آر اين اي نموني جي استحڪام کي وڌائڻ لاء، آر اين اي آئن جي ميٿالامين ۾ ڦهلائي سگهجي ٿو، ۽ ذخيرو ٿيل آهي -70 ° C.RNA کي بچائڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ ٿائلائيڊ ۾ لازمي طور تي متفرق شئي نه هجڻ گهرجي جيڪا RNA کي خراب ڪري.آر اين اي، جيڪو پينڪرياز مان نڪتل آهي، گهٽ ۾ گهٽ هڪ سال تائين ميٿالامين ۾ محفوظ ڪري سگهجي ٿو.جڏهن توهان آر اين اي استعمال ڪرڻ لاءِ تيار آهيو، ته توهان هيٺ ڏنل طريقا استعمال ڪري سگهو ٿا آر اين اي کي تيز ڪرڻ لاءِ: NaCl کي 0.2m ۾ شامل ڪريو ۽ ايٿانول جي مقدار کان 4 ڀيرا، ڪمري جي حرارت کي 3-5 منٽن لاءِ رکو، ۽ 5 منٽن لاءِ 10,000 × g سينٽريفيوگل.

2. RNaseH سرگرمي (RNaseH-) کان سواءِ ريورس ٽرانسڪرپٽ استعمال ڪريو:

RNase inhibitors اڪثر شامل ڪيا ويندا آھن ريورس ٽرانسڪرپشن رد عمل کي وڌائڻ لاءِ سي ڊي اين اي ٺاھڻ جي ڊگھائي ۽ پيداوار کي.RNase inhibitor کي بفرز جي موجودگي ۾ پهرين زنجير جي ترکیب جي رد عمل ۾ شامل ڪيو ويو آهي ۽ ايجنٽ کي گهٽائڻ جهڙوڪ ڊي ٽي ٽي ڇاڪاڻ ته اڳ-سي ڊي اين اي ٺهڪندڙ عمل انابيٽر کي رد ڪري ٿو، ان ڪري پابند RNases کي آزاد ڪري ٿو جيڪو RNA کي خراب ڪري ٿو.Protein RNase inhibitor صرف RNase A, B, C ذريعي RNA جي خراب ٿيڻ کي روڪي ٿو ۽ چمڙي تي RNases کي نه ٿو روڪي، ان ڪري احتياط ڪيو وڃي ته انهن inhibitors جي استعمال جي باوجود آڱرين مان RNase متعارف نه ڪرايو وڃي.

ريورس ٽرانسڪرپٽس آر اين اي کي سي ڊي اين اي ۾ تبديل ڪري ٿو.ٻئي M-MLV ۽ AMV انهن جي پنهنجي پوليمريز سرگرمي کان علاوه آر اين ايس ايڇ سرگرميون آهن.RNaseH سرگرمي پوليمريز سرگرمي سان مقابلو ڪري ٿي هيٽرروزائگس اسٽينڊز لاءِ آر اين اي ٽيمپليٽس ۽ ڊي اين اي پرائمر يا سي ڊي اين اي ايڪسٽينشن اسٽريڊس جي وچ ۾ ٺهيل ، ۽ آر اين اي کي خراب ڪري ٿي: ڊي اين اي ڪمپليڪس ۾ آر اين اي اسٽريڊس.آر اين اي ٽيمپليٽس RNaseH سرگرمي جي ڪري خراب ٿي ويا آھن سي ڊي اين اي جي ٺاھ جوڙ لاءِ اثرائتو ذيلي ذيلي ذخيرا ھاڻي استعمال نٿا ڪري سگھجن، سي ڊي اين اي ٺاھڻ جي پيداوار ۽ ڊگھائي گھٽائي ٿي.اهڙيءَ طرح ريورس ٽرانسڪرپٽ جي RNaseH سرگرمي کي ختم ڪرڻ يا تمام گھٽ ڪرڻ تمام وڏو فائدو ٿيندو.

SuperScriptⅡ ريورس ٽرانسڪرپٽ، RNaseH جي MMLV ريورس ٽرانسڪرپٽ- ۽ ThermoScript ريورس ٽرانسڪرپٽ، RNaseH جي AMV- MMLV ۽ AMV کان وڌيڪ مڪمل ڊگھي cDNA حاصل ڪئي.RT-PCR حساسيت متاثر ٿئي ٿي سي ڊي اين اي جي مقدار جي ترتيب سان.ThermoScript AMV کان گهڻو وڌيڪ حساس آهي.RT-PCR پروڊڪٽس جي سائيز محدود هوندي آهي ريورس ٽرانسڪرپٽ جي صلاحيت جي ڪري سي ڊي اين اي کي ٺهڪائڻ لاءِ، خاص طور تي جڏهن وڏن سي ڊي اين ايز کي ڪلون ڪرڻ لاءِ.MMLV جي مقابلي ۾، SuperScripⅡ خاص طور تي ڊگھي RT-PCR پروڊڪٽس جي پيداوار کي وڌايو.RNaseH- جي ريورس ٽرانسڪرپٽ پڻ حرارتي استحڪام کي وڌائي ٿو، تنهنڪري رد عمل 37-42 ℃ جي عام کان وڌيڪ درجه حرارت تي ٿي سگهي ٿو.تجويز ڪيل تجزيي جي حالتن جي تحت، oligo (dT) پرائمر ۽ 10μCi [alpha-p] dCTP استعمال ڪيا ويا.پهرين زنجير جي ڪل پيداوار جي حساب سان حساب ڪيو ويو TCA ورن جي طريقي سان.مڪمل ڊگھي سي ڊي اين جي تجزيو ڪيو ويو سائيز جي ترتيب واري پٽي کي هٽائڻ ۽ ڳڻڻ ۾ هڪ الڪائن ايگرز جيل استعمال ڪندي.

3. ريورس ٽرانسپشن جي گرمي تحفظ جي درجه حرارت کي وڌايو:

وڌيڪ گرمي پد آر اين اي جي ثانوي ساخت کي کولڻ ۽ رد عمل جي پيداوار کي وڌائڻ ۾ مدد ڪري ٿي.اڪثر آر اين اي ٽيمپليٽس لاءِ، آر اين اي ۽ پرائمر کي 65°C تي بغير بفر يا لوڻ جي رکڻ ۽ پوءِ انهن کي برف تي تيزيءَ سان کولڻ سان اڪثر ثانوي ڍانچي ختم ٿي ويندا آهن ۽ پرائمر کي پابند ڪرڻ جي اجازت ملندي آهي.بهرحال، ڪجهه ٽيمپليٽس اڃا تائين ثانوي ڍانچي آهن، جيتوڻيڪ حرارتي خراب ٿيڻ کان پوء.انهن مشڪل ٽيمپليٽس جي ايمپليفڪيشن کي استعمال ڪري سگهجي ٿو ThermoScript reverse transcriptase ۽ ريورس ٽرانسڪرپٽ رد عمل کي وڌيڪ درجه حرارت تي رکڻ سان ايمپليفڪيشن کي بهتر ڪرڻ لاءِ.وڌيڪ ھولڊنگ گرمي پد پڻ خاصيت وڌائي سگھي ٿو، خاص طور تي جڏھن سي ڊي اين اي جي جوڙجڪ جين مخصوص پرائمر (GSPS) استعمال ڪندي ڪيو ويندو آھي (ڏسو باب 3).جيڪڏهن GSP استعمال ڪري رهيا آهيو، پڪ ڪريو ته پرائمر جي Tm قدر ساڳئي درجه حرارت جي توقع رکي ٿي.oligo (dT) ۽ بي ترتيب پرائمر 60℃ کان مٿي استعمال نه ڪريو.رينڊم پرائمر کي 25 ℃ تي رکڻ جي ضرورت آھي 10 منٽن تائين 60 ℃ تائين وڌڻ کان اڳ.وڌيڪ ريورس ٽرانسڪرپشن جي درجه حرارت کي استعمال ڪرڻ کان علاوه، مخصوصيت کي سڌو سنئون آر اين اي / پرائمر مرکب کي 65 ℃ کي رد ڪرڻ واري درجه حرارت کان ريورس ٽرانسڪرپشن هولڊنگ جي درجه حرارت ڏانهن منتقل ڪندي ۽ اڳ ۾ گرم ٿيل 2 × ردعمل مرکب (cDNA تھرمل شروعاتي سنٿيسس) شامل ڪري سگھجي ٿو.اهو طريقو انٽرموليڪولر بنيادي جوڙي کي روڪڻ ۾ مدد ڪري ٿو جيڪو گهٽ درجه حرارت تي ٿئي ٿو.PCR اوزار استعمال ڪندي RT-PCR لاءِ گھربل ڪيترن ئي گرمي پد جي سوئچز کي آسان بڻائي ٿو.

Tth گرمي مستحڪم پوليمريز Mg2+ جي موجودگي ۾ ڊي اين اي پوليمريز ۽ Mn2+ جي موجودگي ۾ آر اين اي پوليمريز جو ڪم ڪري ٿو.اهو گرمي پد 65 ℃ تي رکي سگهي ٿو.جڏهن ته، PCR دوران Mn2+ جي موجودگي وفاداري کي گھٽائي ٿي، جيڪا Tth پوليمريز کي اعلي درستي واري ايمپليفڪيشن لاءِ گهٽ موزون بڻائي ٿي، جهڙوڪ cDNA ڪلوننگ.ان کان علاوه، ريورس ٽرانسپشن تي Tth گهٽ موثر آهي، جيڪا حساسيت کي گھٽائي ٿي، ۽ جيئن ته هڪ واحد اينزيم ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ پي سي آر انجام ڏئي سگهي ٿو، ريورس ٽرانسڪرپشن کان سواء ڪنٽرول ردعمل استعمال نه ٿو ڪري سگھجي cDNA جي پروڊڪٽس کي آلودگي جينومڪ ڊي اين اي مان فرق ڪرڻ لاء.

4. اضافو جيڪو ريورس ٽرانسپشن کي فروغ ڏئي ٿو:

اضافي جو اضافو، گليسرين ۽ DMSO سميت، پهرين زنجير جي ترکیب جي رد عمل ۾، نيوڪليڪ ايسڊ ڊبل اسٽرينڊ جي استحڪام کي گهٽائي سگهي ٿو ۽ آر اين اي ثانوي ساخت کي ختم ڪري سگهي ٿو.SuperScriptⅡ يا MMLV جي سرگرمي کي متاثر ڪرڻ کان سواءِ 20% گليسرين يا 10% DMSO شامل ڪري سگھجي ٿو.AMV پڻ برداشت ڪري سگھي ٿو 20٪ گليسرول بغير سرگرمي کي گھٽائڻ جي.SuperScriptⅡ ريورس ٽرانسڪرپشن رد عمل ۾ RT-PCR جي حساسيت کي وڌائڻ لاءِ، 10% گليسرول شامل ڪري سگھجي ٿو ۽ 45℃ تي موصل ڪري سگھجي ٿو.جيڪڏهن 1/10 ريٽروٽرانڪرپشن-رد عمل جي پيداوار پي سي آر ۾ شامل ڪئي وئي آهي، ايمپليفڪيشن رد عمل ۾ گليسرول جو تسلسل 0.4٪ آهي، جيڪو پي سي آر کي روڪڻ لاء ڪافي ناهي.

5. RNaseH پروسيسنگ:

PCR کان اڳ RNaseH سان سي ڊي اين اي جي تجزيي جي رد عمل جي علاج سان حساسيت کي بهتر بڻائي سگهجي ٿو.ڪجهه ٽيمپليٽس لاءِ، اهو سوچيو ويو آهي ته آر اين اي سي ڊي اين اي جي ٺهڪندڙ رد عمل ۾ وڌيل شين جي پابند ٿيڻ کان روڪي ٿي، ان صورت ۾ آر اين اي ايڇ علاج سان حساسيت وڌائي سگهي ٿي.عام طور تي، RNaseH علاج گھربل آھي ھڪڙي نسبتا ڊگھي پوري ڊگھي سي ڊي اين اي ھدف واري ٽيمپليٽ جي واڌاري لاءِ، جھڙوڪ ٽيوبرس شيروسسⅡ گھٽ نقل سان.ھن مشڪل ٽيمپليٽ لاءِ، RNaseH سُپر اسڪرپٽⅡ يا AMV پاران ٺھيل cDNA پاران ٺاھيل سگنل کي وڌايو.اڪثر RT-PCR رد عملن لاءِ، RNaseH علاج اختياري هوندو آهي ڇاڪاڻ ته 95℃ موصل ٿيل PCR denaturation قدم عام طور تي RNA مان RNA کي هائيڊولائيز ڪري ٿو: DNA ڪمپليڪس.

6. آر اين اي جي ننڍي مقدار کي ڳولڻ لاء بهتر طريقا:

RT-PCR خاص طور تي مشڪل آهي جڏهن صرف ننڍي مقدار ۾ آر اين اي موجود آهن.آر اين اي جي علحدگيءَ دوران گلائڪوجن کي ڪيريئر طور شامل ڪرڻ سان ننڍڙن نمونن جي پيداوار کي وڌائڻ ۾ مدد ملندي آهي.هڪ RNase-free glycogen شامل ڪري سگھجي ٿو ساڳئي وقت Trizol طور.گلائڪوجن پاڻي ۾ حل ٿيندڙ آهي ۽ آر اين اي سان پاڻي جي مرحلي ۾ رهي سگهي ٿو ته جيئن ايندڙ ورهاڱي ۾ مدد ڪري سگهي.RNase-free glycogen جو تجويز ڪيل ڪنسنٽريشن 250μg/ml آھي نمونن لاءِ 50mg کان گھٽ ٽشو يا 106 ڪلچر ٿيل سيلز.

SuperScriptⅡ استعمال ڪندي ٽرانسڪرپشن جي رد عمل کي ريورس ڪرڻ لاءِ Acetylated BSA جو اضافو حساسيت کي وڌائي سگھي ٿو، ۽ RNA جي ننڍي مقدار لاءِ، SuperScriptⅡ جي مقدار کي گھٽائڻ ۽ RnaseOut nuclease inhibitor جي 40 يونٽن کي شامل ڪرڻ سان سڃاڻپ جي سطح کي بهتر بڻائي سگھجي ٿو.جيڪڏهن Glycogen RNA جي علحدگيءَ ۾ استعمال ٿئي ٿي، ته BSA يا RNase inhibitors جو اضافو ڪيو وڃي ته جيئن SuperScriptⅡ استعمال ڪندي ٽرانسڪرپشن جي رد عمل کي رد ڪري سگهجي.

Ⅱ. RT-PCR جي خاصيت کي وڌايو

1. cNDA ترکیب:

ٽي مختلف طريقا استعمال ڪري سگھجن ٿا فرسٽ اسٽرينڊ سي ڊي اين اي جي ٺاھڻ کي شروع ڪرڻ لاءِ، ۽ ھر طريقي جي لاڳاپي جي خصوصيت سي ڊي اين اي جي مقدار ۽ قسم کي متاثر ڪري ٿي.

بي ترتيب پرائمر طريقو ٽن طريقن مان گھٽ ۾ گھٽ مخصوص آھي.مختصر، جزوي ڊگھائي سي ڊي اين اي پيدا ڪرڻ لاءِ پرائمر پوري ٽرانسڪرپٽ ۾ گھڻن سائيٽن تي اينيل ٿيل آھن.اهو طريقو اڪثر استعمال ڪيو ويندو آهي 5′ ٽرمينل تسلسل ۽ سي ڊي اين اي حاصل ڪرڻ لاءِ آر اين اي ٽيمپليٽس مان ثانوي ساخت جي علائقن سان يا ختم ٿيڻ واري سائيٽن سان جيڪي ريورس ٽرانسڪرپٽيز نقل نه ڪري سگھن ٿيون.سڀ کان ڊگھي سي ڊي اين اي حاصل ڪرڻ لاءِ، هر آر اين اي نموني ۾ پرائمر ۽ آر اين اي جو تناسب تجرباتي طور تي طئي ڪرڻو پوندو.بي ترتيب پرائمر جي شروعاتي ڪنسنٽريشن 50 کان 250ng في 20μl ردعمل سسٽم جي حد تائين.ڇاڪاڻ ته بي ترتيب پرائمر استعمال ڪندي ڪل آر اين اي مان ٺهيل سي ڊي اين اي بنيادي طور تي رائبوسومل آر اين اي آهي، پولي (اي) + آر اين اي کي عام طور تي ٽيمپليٽ طور چونڊيو ويندو آهي.

Oligo (dT) جي شروعات بي ترتيب پرائمر کان وڌيڪ مخصوص آهي.اهو اڪثر يوڪريوٽڪ سيلز ۾ mRNA جي 3′ آخر ۾ مليل پولي (A) دم سان گڏ ڪري ٿو.ڇاڪاڻ ته پولي (اي) + آر اين اي لڳ ڀڳ 1٪ کان 2٪ ڪل آر اين اي جو آهي، سي ڊي اين اي جي مقدار ۽ پيچيدگي تمام گهٽ آهي جيڪڏهن بي ترتيب پرائمر استعمال ڪيا ويا آهن.ان جي اعلي خصوصيت جي ڪري، oligo (dT) عام طور تي آر اين اي کان پرائمر تناسب ۽ پولي (A) + چونڊ لاء اصلاح جي ضرورت ناهي.اهو 0.5μg oligo (dT) في 20μl ردعمل سسٽم استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.oligo(dT)12-18 اڪثر RT-PCR لاءِ موزون آهي.ThermoScript RT-PCR سسٽم oligo (dT) 20 مهيا ڪري ٿو ڇاڪاڻ ته ان جي سٺي حرارتي استحڪام جي ڪري ۽ وڌيڪ هولڊنگ درجه حرارت لاء مناسب آهي.

جين-مخصوص پرائمر (GSP) ريورس ٽرانسپشن قدم لاءِ بهترين مخصوص پرائمر آهن.GSP هڪ antisense oligonucleoside آهي جيڪو خاص طور تي RNA منزلن جي ترتيبن سان گڏ ڪري سگھي ٿو، بجاءِ سڀني Rnas جهڙوڪ random primers يا oligo(dT).PCR پرائمر کي ڊزائين ڪرڻ لاءِ استعمال ٿيل ضابطا پڻ ريورس ٽرانسپشن ريڪشن GSP جي ڊيزائن تي لاڳو ٿين ٿا.GSP ساڳيو ئي تسلسل ٿي سگهي ٿو جيئن ايمپليفڪيشن پرائمر کي ايم آر اين اي 3 جي آخر ۾ اينيل ڪيو ويو آهي، يا GSP کي ڊزائين ڪري سگهجي ٿو ته جيئن ريورس ايمپليفڪيشن پرائمر سان هيٺئين پاسي اينيل ڪيو وڃي.ڪجھ وسيع ڪيل شين لاءِ، ڪامياب RT-PCR لاءِ ھڪ کان وڌيڪ اينٽي سينس پرائمر ٺاھڻ ضروري آھي، ڇاڪاڻ ته ٽارگيٽ RNA جو ثانوي ڍانچو پرائمر کي پابند ٿيڻ کان روڪي سگھي ٿو.اهو 1pmol antisense GSP استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏني وئي آهي 20μl جي پهرين زنجير سنٿيسس ردعمل سسٽم ۾.

2. ريورس ٽرانسپشن جي گرمي تحفظ جي درجه حرارت کي وڌايو:

GSP خاصيت جو پورو فائدو وٺڻ لاءِ، اعليٰ حرارتي استحڪام سان ريورس ٽرانسڪرپٽ استعمال ڪيو وڃي.گرمي-مستحڪم ريورس ٽرانسڪرپٽ تيز گرمي پد تي موصل ٿي سگهي ٿو رد عمل جي سختي کي وڌائڻ لاء.مثال طور، جيڪڏهن هڪ GSP کي 55°C تي annealed ڪيو وڃي ٿو، ته پوءِ GSP جي خاصيت مڪمل طور استعمال نه ڪئي ويندي آهي جيڪڏهن ريورس ٽرانسڪرپشن 37°C تي AMV يا M-MLV استعمال ڪندي گهٽ سختي سان ڪئي ويندي آهي.بهرحال، SuperScripⅡ ۽ ThermoScript 50 ℃ يا وڌيڪ تي رد عمل ڪري سگھن ٿا، جيڪو گھٽ درجه حرارت تي پيدا ٿيندڙ غير مخصوص شين کي ختم ڪري ٿو.وڌ ۾ وڌ خاصيت لاءِ، آر اين اي/پرائمر مرکب کي 65 ℃ ڊنيچريشن جي گرمي پد کان سڌو منتقل ڪري سگھجي ٿو ريورس ٽرانسڪرپشن هولڊنگ گرمي پد تي اڳي گرم ٿيل 2 x رد عمل واري مرکب جي اضافي سان (سي ڊي اين اي سنٿيسس جي حرارتي شروعات).هي گهٽ درجه حرارت تي ماليڪيولز جي وچ ۾ بنيادي جوڙي کي روڪڻ ۾ مدد ڪري ٿو.PCR اوزار استعمال ڪندي RT-PCR لاءِ گھربل ڪيترن ئي درجه حرارت جي منتقلي کي آسان بڻائي ٿو.

3. جينومڪ ڊي اين اي آلودگي کي گھٽائڻ:

RT-PCR سان هڪ امڪاني مشڪل اها آهي ته آر اين اي جينومڪ ڊي اين اي کي آلوده ڪري ٿو.بهتر آر اين اي علحدگي جي طريقن جو استعمال، جهڙوڪ ٽريزول ريجنٽ، آر اين اي جي تيارين ۾ جينومڪ ڊي اين اي آلودگي کي گھٽائي ٿو.جينومڪ ڊي اين اي مان پيدا ٿيندڙ شين کان بچڻ لاءِ، آر اين اي کي ريورس ٽرانسڪرپشن کان اڳ آلوده ڊي اين اي کي هٽائڻ لاءِ ايمپليفڪيشن گريڊ DnasⅠ سان علاج ڪري سگهجي ٿو.DNaseⅠ هضم کي ختم ڪرڻ لاءِ 10 منٽ لاءِ 2.0mM EDTA ۾ 65℃ تي نمونا رکيا ويا.EDTA ميگنيشيم آئن کي چيليٽس ڪري ٿو مگنيشيم آئن تي منحصر آر اين اي هائڊروليسس کي روڪڻ لاءِ جيڪو تيز گرمي پد تي ٿئي ٿو.

جينوم ڊي اين اي ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ مان ايمپليفائيڊ سي ڊي اين اي کي الڳ ڪرڻ لاءِ، پرائمر جيڪي الڳ ٿيل ايڪسون سان الڳ الڳ ڪن ٿا، ٺاهي سگھجن ٿا.پي سي آر پروڊڪٽس جيڪي سي ڊي اين اي مان نڪتل آهن انهن کان ننڍا هوندا جيڪي آلوده جينومڪ ڊي اين اي مان نڪتل آهن.ريورس ٽرانسڪرپشن کان سواءِ هڪ ڪنٽرول ٿيل تجربو هر آر اين اي ٽيمپليٽ تي پڻ ڪيو ويندو آهي اهو طئي ڪرڻ لاءِ ته ڇا ڏنل ٽڪرو جينومڪ ڊي اين اي يا سي ڊي اين اي مان آهي.ريورس ٽرانسپشن جي غير موجودگي ۾ حاصل ڪيل پي سي آر پروڊڪٽس جينوم مان نڪتل آهن.

لاڳاپيل پراڊڪٽ

RT-PCR آسان^{ههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههه}آئون (هڪ قدم)

-هڪ-قدم کٽ ريورس ٽرانسپشن ۽ پي سي آر کي هڪ ئي ٽيوب ۾ ڪرڻ جي قابل بڻائي ٿي.اهو صرف ٽيمپليٽ RNA، مخصوص PCR پرائمر ۽ RNase-Free ddH شامل ڪرڻ جي ضرورت آهي₂O.

آر اين اي جو حقيقي وقت مقداري تجزيو جلدي ۽ صحيح طريقي سان ٿي سگھي ٿو.

-ڪِٽ استعمال ڪري ٿي هڪ منفرد Foregene reverse transscription reagent ۽ Foregene HotStar Taq DNA Polymerase هڪ منفرد رد عمل واري نظام سان گڏيل طريقي سان بهتر ڪرڻ جي ڪارڪردگيءَ ۽ رد عمل جي خاصيت کي.

- اصلاحي رد عمل جو نظام ٺاهيندو آهي ردعمل کي وڌيڪ ڳولڻ جي حساسيت، مضبوط حرارتي استحڪام، ۽ بهتر رواداري.

RT Easy II (GDNase سان) ماسٽر پريمڪس فرسٽ-اسٽرينڊ سي ڊي اين اي سنٿيسس لاءِ ريئل ٽائيم پي سي آر لاءِ GDNase سان

-جي ڊي اين اي کي هٽائڻ جي قابليت، جيڪا 2 منٽن اندر ٽيمپليٽ ۾ جي ڊي اين اي کي ختم ڪري سگهي ٿي.

-موثر ريورس ٽرانسپشن سسٽم، اهو صرف 15 منٽ وٺندو آهي مڪمل ڪرڻ لاءِ پهرين اسٽينڊ سي ڊي اين اي جي ترکیب کي.

-ڪمپليڪس ٽيمپليٽس: اعليٰ GC مواد ۽ پيچيده ثانوي ڍانچي سان گڏ ٽيمپليٽ پڻ اعليٰ ڪارڪردگيءَ سان مٽائي سگھجن ٿا.

-High-sensitivity reverse transscription system، pg-level templates پڻ اعليٰ معيار جي سي ڊي اين اي حاصل ڪري سگھن ٿا.

-ريورس ٽرانسپشن سسٽم اعلي حرارتي استحڪام آهي، بهترين ردعمل جي درجه حرارت 42 ℃ آهي، ۽ اهو اڃا تائين 50 ℃ تي سٺو ريورس ٽرانسپشن ڪارڪردگي آهي.