پي سي آر, گھڻا پي سي آر, حالت ۾ PCR, ريورس پي سي آر, RT-PCR, qPCR (1)-پي سي آر

اسان مختلف PCR جي تصورن، مرحلن ۽ تفصيلن کي ترتيب ڏينداسين

Ⅰ. پي سي آر

Polymerase Chain Reaction، جنهن کي PCR چيو ويندو آهي، هڪ ماليڪيولر حياتياتي ٽيڪنالاجي آهي، جيڪا مخصوص ڊي اين اي ٽڪڙن کي وڌائڻ لاءِ استعمال ٿيندي آهي.اهو ويٽرو ۾ هڪ خاص ڊي اين اي نقل جي طور تي سمجهي سگهجي ٿو.ڊي اين اي پوليمريز (ڊي اين اي پوليمريز آءِ) 1955ع جي شروعات ۾ دريافت ٿي ۽ E. Coli جو ڪلينو فريگمينٽ، جنهن ۾ تجرباتي قدر ۽ عملي صلاحيت آهي، ڊاڪٽر ايڇ ڪلينيو 1970ع جي شروعات ۾ دريافت ڪئي، پر ڇاڪاڻ ته هي انزايم گرمي پد کي برداشت نٿو ڪري، ان ڪري اعليٰ درجه حرارت ان کي ڊيجنريٽ نٿو ڪري سگهي، ان ڪري اهو پوليمرجين جي اعليٰ رد عمل سان ملندو.اڄڪلهه استعمال ۾ آيل اينزائمز (جنهن کي Taq پوليميرس سڏيو وڃي ٿو)، Thermus aquaticus، هڪ گرم چشمي جي بيڪٽيريا کان 1976 ۾ ڌار ڪيو ويو. ان جي خاصيت اها آهي ته اهو تيز گرمي جي مزاحمت ڪري سگهي ٿو ۽ هڪ مثالي اينزائيم آهي، پر اهو 1980 کان پوء وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويو آهي.PCR جي اصلي پروٽوٽائپ جو اصل تصور جين جي مرمت ۽ نقل ڪرڻ جهڙو آهي، جيڪو 1971 ۾ ڊاڪٽر KJell Kleppe پاران پيش ڪيو ويو هو. هن پهرين سادي ۽ مختصر مدت جي جين ڪاپي شايع ڪئي (PCR جي پهرين ٻن چڪر رد عمل وانگر).اڄڪلهه ترقي يافته PCR 1983 ۾ ڊاڪٽر ڪيري بي موليس پاران تيار ڪئي وئي هئي. ڊاڪٽر موليس ان سال پي اي ڪمپنين جي خدمت ڪئي، تنهنڪري پي سي آر انڊسٽري ۾ PE کي خاص حيثيت حاصل آهي.ڊاڪٽر مليس سرڪاري طور تي پهريون لاڳاپيل مقالو سائيڪي ۽ ٻين سان 1985ع ۾ شايع ڪيو. ان وقت کان وٺي پي سي آر جو استعمال روزانو هزارين ميلن جو فاصلو آهي، ۽ لاڳاپيل پيپرن جي معيار کي چئي سگهجي ٿو ته تحقيق جا ٻيا ڪيترائي طريقا اڻ وڻندڙ ​​آهن.تنهن کان پوء، پي سي آر ٽيڪنالاجي وڏي پيماني تي حياتياتي سائنسي تحقيق ۽ ڪلينڪ ايپليڪيشنن ۾ استعمال ڪيو ويو آهي، جيڪو ماليڪيولر حياتيات جي تحقيق جي سڀ کان اهم ٽيڪنالاجي بڻجي رهيو آهي.موليس کي ڪيمسٽري ۾ 1993 جو نوبل انعام پڻ مليو.

پي سي آراصول

PCR ٽيڪنالاجي جو بنيادي اصول ڊي اين اي جي قدرتي نقل جي عمل سان ملندڙ جلندڙ آهي، ۽ ان جي خاصيت جو دارومدار oligonucleotide پرائمر تي آهي، جيڪو حدف جي تسلسل جي ٻنهي سرن تي مڪمل آهي.PCR degeneration-annealing-extending ٽن بنيادي رد عملن جي مرحلن تي مشتمل آهي: ①DNA جي ٽيمپليٽ جي تنزلي: ٽيمپليٽ ڊي اين اي کي هڪ خاص وقت لاءِ تقريباً 93 °C تي گرم ڪرڻ کان پوءِ، ڊبل ڊي اين اي لاءِ ڊبل چينل ڊي اين اي جو حل ٺاهي ٿو جيڪو ٺهيل پي سي آر امپليفڪيشن سان ٺهيل آهي، ان ڪري ٽيمپليٽ جي ڊي اين اي کي سنگل ٺاهڻ لاءِ تيار ڪري سگهجي ٿو. ايندڙ دور جو ردعمل.②The annealing (compound) of the template DNA ۽ پرائمر: ٽيمپليٽ DNA کي گرم ڪرڻ ۽ هڪ واحد زنجير ۾ تبديل ٿيڻ کان پوءِ، گرمي پد 55 °C تائين گهٽجي وڃي ٿو.پرائمر ۽ ٽيمپليٽ ڊي اين اي سنگل چين جو پورو تسلسل.③پرائمر جي توسيع: ڊي اين اي ٽيمپليٽ- پرائمر بائنڊنگ TaqDNA پوليميرس جي عمل تي مبني آهي، ڊي اين ٽي پي سان رد عمل جي خام مال جي طور تي.نقل جي اصول کي برقرار رکو، هڪ نئين نيم محفوظ ڪاپي زنجير کي ترتيب ڏيو جيڪا ٽيمپليٽ ڊي اين اي زنجير کي پورو ڪري، ۽ ٻيهر سائيڪل ڊيجنريشن-اينيلنگ-ايڪسٽينشن ٽن عملن کي وڌيڪ “سيمي ريزروڊ ڪاپي چين” حاصل ڪري سگهجي ٿو، ۽ هي نئون سلسلو ٻيهر دستياب آهي ايندڙ چڪر لاءِ ٽيمپليٽ بڻجي.لوپ کي مڪمل ڪرڻ ۾ 2-4 منٽ لڳن ٿا، ٽارگيٽ جين کي 2-3 ڪلاڪن ۾ ڪيترائي ملين ڀيرا وڌايو وڃي ٿو.

معياريپي سي آررد عمل سسٽم

PCR ردعمل جا پنج عنصر

پي سي آر جي رد عمل ۾ بنيادي طور تي پنج قسم جا مادا شامل آهن، يعني پرائمر، اينزائم، ڊي اين ٽي پي، ٽيمپليٽ ۽ بفر (Mg2+ گهربل آهي).[PCR طريقيڪار]

معياري PCR عمل ٽن مرحلن ۾ ورهايل آهي

1. DNA degeneration (90°C-96°C): دوئي زنجير DNA ٽيمپليٽس حرارتي عمل هيٺ، هائيڊروجن بانڊ ٽوڙي، هڪ واحد زنجير DNA ٺاهيندي.

2. اينيلنگ (25℃ -65℃): سسٽم جو گرمي پد گھٽجي ويندو آهي، پرائمر کي ڊي اين اي ٽيمپليٽ سان ملائي هڪ مقامي ڊبل چين ٺاهي ويندي آهي.

3. ايڪسٽينشن (70℃ -75℃): Taq enzyme (اٽڪل 72°C، بهترين سرگرمي) جي عمل هيٺ، dNTP کي خام مال طور استعمال ڪيو ويندو آهي، پرائمر جي 5′ آخر تائين → 3′ پڇاڙيءَ تائين وڌايو ويندو آهي، سنٿيسس ۽ ٽيمپليٽ هڪ ٻئي جي ڊي اين اي زنجير کي پورو ڪن ٿا.

هر چڪر کي رد ڪيو ويو آهي، annealed ۽ وڌايو ويو آهي، ڊي اين اي مواد کي ٻيڻو ڪري ٿو.في الحال، مختصر ايمپليفڪيشن ايريا جي ڪري، ڪجهه پي سي آر کي تمام ٿوري وقت ۾ نقل ڪري سگهجي ٿو جيتوڻيڪ Taq اينزائم سرگرمي بهتر نه آهي، تنهنڪري ان کي ٻن مرحلن ۾ تبديل ڪري سگهجي ٿو، اهو آهي، اينيلنگ ۽ ايڪسٽينشن 60 ° C-65 ° C تي هڪ ئي وقت تي ڪري سگهجي ٿو.کڻڻ ۽ کولنگ جي عمل کي گهٽائڻ ۽ جواب جي رفتار کي بهتر ڪرڻ لاء.

PCR ردعمل خاصيتون

● هاء-خاصيت

PCR جي جواب جا مخصوص فيصلا ڪندڙ عنصر آهن: ① پرائمر ۽ ٽيمپليٽ ڊي اين اي جو مخصوص ميلاپ.②بنياد جوڙڻ جو اصول.③TaqDNA polymerase synthesis ردعمل جي وفاداري.④ ٽارگيٽ جين جي خاصيت ۽ قدامت.

پرائمري ۽ ٽيمپليٽ جو صحيح ميلاپ اهم آهي.پرائمر جي پابند ۽ ٽيمپليٽ ۽ پرائمر زنجير جي توسيع الڪلين بنيادي ميلاپ جي اصول تي ٻڌل آهي.polymerase synthesis رد عمل جي وفاداري ۽ Taq DNA polymerase جي اعلي گرمي پد جي مزاحمت سان ٺهيل (مرڪب) ۽ رد عمل ۾ پرائمر جي پابند ڪرڻ لاء هڪ اعلي گرمي پد تي پرفارم ڪري سگهجي ٿو.ميلاپ جي خاصيت تمام گهڻي وڌي وئي آهي.ڪلپ هڪ اعلي درجي جي درستگي کي برقرار رکي سگهي ٿو.ھدف جينياتي علائقي کي چونڊڻ سان اعلي قدامت پسندي ۽ اعلي قدامت پسنديت سان، ان جي خاصيت وڌيڪ آھي.

● اعلي حساسيت

پي سي آر پروڊڪٽس جو پيداواري حجم انڊيڪس جي حساب سان وڌايو ويندو آهي، جيڪو مائيڪرو ڪنٽرولر جي ليول کي مائڪروگرامس (μg=-6) تائين وڌائڻ لاءِ Picker جي شروعاتي ٽيمپليٽ (PG=10-12) کي وڌائي سگھي ٿو.ٽارگيٽ سيلز 1 ملين سيلز مان ڳولي سگهجن ٿا؛وائرس جي سڃاڻپ ۾، پي سي آر جي حساسيت 3 آر ايف يوز تائين پهچي سگهي ٿي (خالي اسپاٽ ٺهيل يونٽ)؛بيڪٽيريا سائنس ۾ گھٽ ۾ گھٽ ڳولڻ جي شرح 3 بيڪٽيريا آھي.

● سادو ۽ تيز

پي سي آر ريفريڪشن هڪ اعليٰ درجه حرارت Taq DNA پوليميرس استعمال ڪري ٿو، جيڪو هڪ وقت ۾ رد عمل جو حل شامل ڪري ٿو، يعني ڊي اين اي ايمپليفڪيشن سلوشن ۽ واٽر باٿ برتن تي هڪ degeneration-anneal-extension Reaction.عام طور تي، ايمپليفڪيشن ردعمل 2 کان 4 ڪلاڪن ۾ مڪمل ڪيو ويندو آهي.Augmented پراڊڪٽس کي عام طور تي برقي تلوار ذريعي تجزيو ڪيو ويندو آهي، ۽ آئسوٽوپس استعمال ڪرڻ جي ضرورت ناهي، نه ريڊيويڪل آلودگي، ۽ آسان واڌاري.

● نموني جي پاڪائي گهٽ آهي

وائرس يا بيڪٽيريا ۽ ڪلچر سيلز کي الڳ ڪرڻ جي ڪا ضرورت ناهي.ڊي اين اي خام مصنوعات ۽ آر اين اي ايمپليفائرز طور استعمال ڪري سگھجن ٿيون.ڊي اين اي ايمپليفڪيشن جو پتو لڳائڻ سڌو استعمال ڪري سگهجي ٿو ڪلينڪل نموني استعمال ڪندي جهڙوڪ رت، جسم جي مائع، کنگهه ڌوئڻ جو سيال، وار، سيل، ۽ جاندار ٽشو.

پي سي آرعام مسئلا

● ڪوڙو ناڪاري، ڪوبه وڌايل بينڊ

پي سي آر جي رد عمل جي اهم مرحلن ۾ شامل آهن: ① ٽيمپليٽ نيوڪليڪ ايسڊز جي تياري، ② معيار ۽ پرائمر جي خاصيت، ③ اينزيمز جو معيار ④ پي سي آر چڪر حالتون.سبب ڳولهڻ به گهرجي ته مٿي ڏنل لنڪن جو تجزيو ۽ مطالعو ڪيو وڃي.

ٽيمپليٽ: ① ٽيمپليٽ متفرق پروٽين تي مشتمل آهي، ② ٽيمپليٽ ۾ هڪ Taq اينزائم انبيٽر شامل آهي، ③ ٽيمپليٽ ۾ پروٽين کي ختم نه ڪيو ويو آهي، خاص طور تي ڪروموزوم ۾ گروپ پروٽين.⑤ Deminer nucleic acid degeneration مڪمل نه آهي.جڏهن اينزيميمس ۽ پرائمر جو معيار سٺو آهي، اتي ڪو به ايمپليفڪيشن بينڊ نه آهي، جيڪو گهڻو ڪري نموني جي هضمي علاج آهي.ٽيمپليٽ نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ واري عمل ۾ ڪجهه غلط آهي، تنهنڪري هڪ مؤثر ۽ مستحڪم هضمي حل تيار ڪرڻ لاء، ان جي طريقيڪار کي مقرر ڪيو وڃي ۽ پاڻمرادو تبديل نه ڪيو وڃي.

اينزيم غير فعال ٿيڻ: هڪ نئون اينزائم يا ٻئي پراڻي ۽ نئين اينزائمز کي گڏ ڪرڻ لاء استعمال ڪيو وڃي ته ڇا اينزيم جي سرگرمي گم ٿي وئي آهي يا ناکافي، غلط منفيات جي ڪري.اهو ياد رکڻ گهرجي ته Taq enzyme يا ethidium bromide ڪڏهن ڪڏهن وساريو ويندو آهي.

پرائمر: پرائمر جي ڪيفيت، پرائمر جي ڪنسنٽريشن، ۽ ڇا ٻن پرائمر جي ڪنسنٽريشن سميٽري آھي.اهو PCR جي ناڪامي جو هڪ عام سبب آهي يا وڌندڙ بينڊ مثالي نه آهي ۽ ڦهلائڻ جو امڪان آهي.ڪجھ بيچ نمبرن جي پرائمر جي معيار سان مسئلا آھن.ٻن پرائمر ۾ هڪ اعلي ڪنسنٽريشن ۽ گهٽ ڪنسنٽريشن آهي، جنهن جي ڪري گهٽ ڪارڪردگيءَ واري غير سميميٽرڪ امپليڪشن.جوابي طريقا هي آهن: ① يونٽن کي گڏ ڪرڻ لاءِ سٺو پرائمر چونڊيو.② پرائمر جي ڪنسنٽريشن جو دارومدار نه رڳو OD جي قيمت تي آهي، پر پرائمر جي اصل مائع تي به ڌيان ڏئي ٿو ته جيئن ايگر شوگر جيل الیکٹروفورسسز ٺاهي سگهجي.اتي ھڪڙو پرائمر پٽي زون ھئڻ گھرجي، ۽ ٻن پرائمر جي چمڪ عام طور تي برابر ھئڻ گھرجي.بيلٽ، پي سي آر هن وقت ناڪام ٿي سگهي ٿو، ۽ ان کي پرائمر سنٿيسس يونٽ سان حل ڪيو وڃي.جيڪڏهن هڪ پرائمر اعلي آهي، چمڪ گهٽ آهي، ۽ ان جي ڪنسنٽريشن کي متوازن هجڻ گهرجي جڏهن گهٽجي وڃي.③ پرائمر کي ادا ڪيو وڃي ۽ وڏي ڪنسنٽريشن تي ذخيرو ڪيو وڃي ته جيئن ريفريجريٽر جي ڪيترن ئي منجهيل يا ڊگھي مدي واري ريفريجريشن حصن کي روڪيو وڃي، جيڪو پرائمر کي خراب ۽ خراب ٿيڻ جو سبب بڻائيندو.④ پرائمر جي ڊيزائن غير معقول آھي، جيئن ته پرائمر جي ڊگھائي ڪافي نه آھي، ۽ پرائمر جي وچ ۾ ڊي ڪلستر ٺھيل آھي.

Mg2 + ڪنسنٽريشن: Mg2 + آئن ڪنسنٽريشن جو PCR amplification ڪارڪردگي تي وڏو اثر آهي.گهڻو ڪنسنٽريشن PCR امپليڪشن جي مخالف جنس کي گھٽائي سگھي ٿو.جيڪڏهن ڪنسنٽريشن تمام گهٽ آهي، ته پي سي آر ايمپليفڪيشن آئوٽ به پي سي آر ايمپليفڪيشن جي ناڪامي کي وڌائيندو بينڊ بغير.

رد عمل جي مقدار جي تبديلي: پي سي آر ايمپليفڪيشن ۾ استعمال ٿيل حجم 20ul، 30ul، ۽ 50ul يا 100uL آهي، پي سي آر ايمپليفڪيشن لاءِ ايپليڪيشن جو وڏو حجم سائنسي تحقيق ۽ ڪلينڪل ٽيسٽ جي مختلف مقصدن جي مطابق مقرر ڪيو ويو آهي.ننڍي مقدار جهڙوڪ 20ul ٺاهڻ کان پوء، اهو ضروري آهي ته هڪ ڪنڊ شرط ٺاهيو جڏهن سائيز ٺاهڻ، ٻي صورت ۾ اهو ناڪام ٿيندو.

جسماني سبب: تبديلي PCR امپليڪشن لاءِ تمام ضروري آهي.جيڪڏهن تنزلي جو گرمي پد گهٽ آهي، انحطاط جو وقت ننڍو آهي، اهو ممڪن آهي ته غلط منفيات ۾ ٿئي.تمام گھٽ annealing گرمي پد غير مخصوص amplification سبب ڪري سگهو ٿا ۽ مخصوص amplification ڪارڪردگي کي گھٽائي.پرائمر ۽ ٽيمپليٽس جي ميلاپ کي تمام گهڻو متاثر ڪيو پي سي آر امپليڪشن ڪارڪردگي کي گهٽائڻ لاءِ.ڪڏهن ڪڏهن ان کي استعمال ڪرڻ ضروري آهي معياري ٿرماميٽر استعمال ڪرڻ لاءِ متغير، اينيلنگ ۽ وڌايل درجه حرارت کي ايڪسٽينشن يا پاڻي ۾ حل ڪندڙ ڪڪر، جيڪو پي سي آر جي ناڪامي جو هڪ سبب آهي.

ھدف جي ترتيب جي مختلف قسمن: جيڪڏھن ھدف جي ترتيب ٿئي ٿي، ھڪڙو ميوٽيشن يا حذف، پروٽوٽائپ ۽ ٽيمپليٽ جي ميلاپ کي گڏ ڪيو ويو آھي، يا ھدف جي ترتيب جي گھٽتائي جي ڪري، پرائمر ۽ ٽيمپليٽ مڪمل ڪرڻ واري ترتيب کي وڃائي ڇڏيندو، ۽ ان جي پي سي آر ايمپليفڪيشن ڪامياب نه ٿيندي.

● غلط مثبت

PCR ايمپليفڪيشن بئنڊ ھدف جي ترتيب واري بينڊ سان مطابقت رکي ٿو، ۽ ڪڏھن ڪڏھن ان جو بينڊ وڌيڪ صاف ۽ مٿاھين ھوندو آھي.

پرائمر ڊيزائن مناسب نه آهي: چونڊيل ايمپليفڪيشن تسلسل ۽ غير مقصدي ايمپليفڪيشن تسلسل هڪجهڙائي وارا آهن، تنهنڪري جڏهن پي سي آر ايمپليفڪيشن، ايمپليفائيڊ پي سي آر پروڊڪٽس غير مقصدي تسلسل آهن.ھدف جي ترتيب تمام ننڍو آھي يا پرائمر تمام ننڍو آھي، ۽ اھو غلط آھي مثبت ڏانھن.ٻيهر ترتيب ڏيڻ جي ضرورت آهي.

ھدف جي ترتيب يا ايمپليفڪيشن پراڊڪٽس جي ڪراس آلودگي: ھن آلودگي جا ٻه سبب آھن: پهريون، سڄي جينوم يا وڏن حصن جي ڪراس آلودگي، غلط مثبت سببن جي ڪري.هن قسم جي ڪوڙي مثبت کي هيٺين طريقن سان حل ڪري سگهجي ٿو: آپريشن دوران محتاط ۽ نرم رهو ته جيئن ٽارگيٽ جي ترتيب کي نموني گن ۾ داخل ٿيڻ يا سينٽرريفيوگل ٽيوب مان ٻاهر نڪرڻ کان روڪيو وڃي.سواءِ انزايمز ۽ مادي جي جيڪي تيز گرمي پد کي برداشت نه ڪري سگھن ٿيون، سڀني ريجنٽس يا سامان کي تيز دٻاءَ سان نيڪال ڪيو وڃي.centrifugal پائپ ۽ نموني هڪ وقت ۾ استعمال ڪيو وڃي.جڏهن ضروري هجي ته، نمونن کي شامل ڪرڻ کان اڳ، رد عمل واري ٽيوب ۽ ريجنٽ موجود نيوڪليڪ ايسڊ کي تباهه ڪرڻ لاء الٽرا وائلٽ شعاعن جي سامهون اچي وڃن ٿا.ٻيو، هوائي آلودگي ۾ ننڍا ٽڪرا.اهي ننڍا ٽڪرا حدف جي ترتيب کان ننڍا آهن، پر انهن ۾ ڪجهه مخصوص هومولوجي آهي.اهو هڪ ٻئي سان spliced ​​ڪري سگهجي ٿو.پرائمر کي مڪمل ڪرڻ کان پوء، پي سي آر جي پيداوار کي وڌايو وڃي ٿو، جيڪو غلط مثبت پيداوار جو سبب بڻائيندو.اهو استعمال ڪري سگهجي ٿو گھٽائڻ يا ختم ڪرڻ لاء Nest PCR طريقو.

● ظاهر nonspecific amplification بينڊ

بينڊ جيڪي PCR ايمپليفڪيشن کان پوءِ ظاهر ٿيا آهن اهي متوقع سائيز، يا وڏا يا ننڍا، يا ساڳئي وقت، مخصوص ايمپليفڪيشن بينڊ ۽ غير مخصوص ايمپليفڪيشن بينڊز سان مطابقت رکن ٿا.غير مخصوص بئنڊز جو اڀرڻ آهي: پهريون، پرائمر حدف جي ترتيب لاءِ نامڪمل مڪمل آهن، يا پرائمر جي پوليمرائيزيشن کي ڊي ڪلستر ٺاهڻ لاءِ.ٻيو اهو آهي ته MG2 + آئن جي ڪنسنٽريشن تمام گهڻي آهي، انيلنگ جي درجه حرارت تمام گهٽ آهي، ۽ PCR سائيڪلن جو تعداد لاڳاپيل آهي.ٻيو، انزايمز جي معيار ۽ مقدار.گهڻو ڪري، ڪجهه ذريعن جا اينزائمز غير خاص بينڊن جي ڪري هوندا آهن ۽ ٻين ذريعن جي اينزائمز نه ٿينديون آهن.ڪڏهن ڪڏهن اينزايمز جي غير مخصوص واڌارو پڻ ٿئي ٿي.جوابي طريقا آهن: جيڪڏهن ضروري هجي ته پرڪشش شيون ٻيهر ڊزائين ڪيون وڃن.اينزيم جي مقدار کي گھٽايو يا ٻئي ذريعن جي اينزيم کي تبديل ڪريو.پرائمري جي مقدار کي گھٽايو، ٽيمپليٽس جي مقدار کي مناسب طور تي وڌايو، ۽ چڪر جو تعداد گھٽايو.مناسب طور تي اينيلنگ جي درجه حرارت کي وڌايو يا ٻن درجه حرارت پوائنٽ جو طريقو استعمال ڪريو (93 ° C degeneration، annealing ۽ 65 ° C تي وڌائڻ).

● فلڪي ٽو يا سميئر ٽيپ ظاهر ڪريو

PCR amplification ڪڏهن ڪڏهن لاڳو يا شيل يا قالين جهڙو بيلٽ لڳي ٿو.ان لاءِ، انزايمز جي گھڻي مقدار يا انزايمز جي خراب معيار جي ڪري، ڊي اين ٽي پي ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي، Mg2+ ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي، اينيلنگ جي درجه حرارت تمام گھٽ آھي، ۽ چڪر جو تعداد تمام گھڻو آھي.جوابي طريقا هي آهن: ① انزايم جي مقدار کي گھٽائڻ، يا ڪنهن ٻئي ذريعن جي اينزيم کي تبديل ڪرڻ.②DNTP جي ڪنسنٽريشن کي گھٽايو ③مناسب انداز ۾ Mg2+ ڪنسنٽريشن کي گھٽايو.④ ٽيمپليٽ جي مقدار کي وڌايو ۽ چڪر جو تعداد گھٽايو.

لاڳاپيل مصنوعات

PCR Heroᵀᴹ (ڊائي سان)

◮ اعلي وفاداري: 6 ڀيرا عام Taq اينزيم کان؛

◮ تيز رفتار وڌائڻ جي رفتار

◮ وڌيڪ ٽيمپليٽ موافقت

◮ اعلي amplification ڪارڪردگي

◮ ماحولياتي رواداري وڌيڪ مضبوط آهي: هڪ هفتي لاءِ 37 ° C تي رکيل، 90٪ کان وڌيڪ سرگرمي برقرار رکڻ؛

◮ ان ۾ 5'→ 3' ڊي اين اي پوليمريز سرگرمي ۽ 5'→ 3' Exonuclease سرگرمي آهي، بغير 3'→5' exonuclease سرگرمي.

PCR Easyᴹ (ڊائي سان)

منفرد رد عمل جو نظام ۽ اعلي ڪارڪردگي Taq DNA Polymerase PCR جي رد عمل کي وڌيڪ تيز ڪرڻ واري ڪارڪردگي، مخصوصيت ۽ حساسيت ٺاهي ٿو.

آر ٽي-qPCR Easyᵀᴹ (هڪ قدم)-SYBR گرين I

◮ هڪ قدم واري کٽ هڪ ئي ٽيوب ۾ ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ qPCR ٻه رد عمل ٺاهي ٿي، صرف ٽيمپليٽ RNA، مخصوص PCR پرائمر ۽ RNase-Free ddH شامل ڪرڻ جي ضرورت آهي.₂O.

◮ کٽ جلدي ۽ موثر انداز ۾ مقداري طور تي وائرل RNA جو تجزيو ڪري سگھي ٿو يا RNA جو پتو لڳائي سگھي ٿو.

◮ ڪِٽ استعمال ڪري ٿي هڪ منفرد Foregene reverse transscription reagent ۽ Foregene HotStar Taq DNA Polymerase گڏيل رد عمل واري نظام سان گڏ هڪ منفرد رد عمل واري سرشتي کي موثر طريقي سان بهتر ڪرڻ جي ڪارڪردگي ۽ رد عمل جي خاصيت کي بهتر ڪرڻ لاءِ.

◮ اصلاحي رد عمل جو نظام رد عمل کي وڌيڪ حساسيت، مضبوط حرارتي استحڪام، ۽ بهتر رواداري ڏئي ٿو.

◮ RT-qPCR آسان^TM(هڪ قدم)-SYBR گرين I کٽ ROX اندروني ريفرنس ڊائي سان گڏ اچي ٿو، جيڪو سگنل جي پس منظر کي ختم ڪرڻ ۽ کوهن جي وچ ۾ سگنل جي غلطين کي ختم ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو، جيڪو صارفين لاءِ آسان آهي مقدار جي PCR آلات جي مختلف ماڊلز ۾ استعمال ڪرڻ لاءِ.

RT آسان^TMII (ماسٽر پريمڪس لاءِ فرسٽ اسٽرينڊ سي ڊي اين اي سنٿيسس لاءِحقيقي وقت پي سي آر)

-جي ڊي اين اي کي هٽائڻ جي قابليت، جيڪا 2 منٽن اندر ٽيمپليٽ ۾ جي ڊي اين اي کي ختم ڪري سگهي ٿي.

-موثر ريورس ٽرانسپشن سسٽم، اهو صرف 15 منٽ وٺندو آهي مڪمل ڪرڻ لاءِ پهرين اسٽينڊ سي ڊي اين اي جي ترکیب کي.

-ڪمپليڪس ٽيمپليٽس: اعليٰ GC مواد ۽ پيچيده ثانوي ڍانچي سان گڏ ٽيمپليٽ پڻ اعليٰ ڪارڪردگيءَ سان مٽائي سگھجن ٿا.

-High-sensitivity reverse transscription system، pg-level templates پڻ اعليٰ معيار جي سي ڊي اين اي حاصل ڪري سگھن ٿا.

-ريورس ٽرانسپشن سسٽم اعلي حرارتي استحڪام آهي، بهترين ردعمل جي درجه حرارت 42 ℃ آهي، ۽ اهو اڃا تائين 50 ℃ تي سٺو ريورس ٽرانسپشن ڪارڪردگي آهي.