توهان ڪيترو ڄاڻو ٿا

بابت Nucleic امل ڪڍڻ

پاڪ نيوڪليڪ اسيد جي شروعات ۽ پڇاڙي

شروعات ۾ سڀ ڪجهه ڏکيو آهي، پاڪ نيوڪليڪ اسيد سڀ کان وڌيڪ آهي

ماليڪيولر تجربن جي شروعات، ايندڙ تجربن لاءِ

ڪاميابي يا ناڪامي جو هڪ اهم اثر آهي.

ٽريس/الٽرا ٽريس UV اسپيڪٽرفوٽوميٽر ڪيترن ئي سائنسي محققن طرفان پسند ڪيو ويو آهي ڇاڪاڻ ته اهو نيوڪليڪ ايسڊ ڪنسنٽريشن ۽ پروٽين ۽ لوڻ آئن جي باقيات کي آسان، جلدي ۽ اقتصادي طور تي ڳولي سگهي ٿو.

جيئن ته اسان سڀ ڄاڻون ٿا، A260 جو مطلب آهي nucleic acid absorbance OD قدر، A280 جو مطلب آهي پروٽين جي ڪنسنٽريشن جاذب OD قدر، A230 جو مطلب آهي لوڻ آئن ڪنسنٽريشن جاذب OD قدر، تنهن ڪري A260 جو مطلب آهي نيوڪليڪ ايسڊ ڪنسنٽريشن کي تبديل ڪري سگهي ٿو، A260/280 جو مطلب آهي پروٽين جي باقيات، پر A260 جو مطلب آهي لوڻ جو قاعدو، صرف A260/260 ريسرچ تي ٻڌل آهي. ماپ جي نتيجن جي وڏي تعداد تي، ۽ اهو آهي "روايتي”يقين ڪرڻ ته اهو ڊي اين اي ۽ آر اين اي جي پاڪيزگي جي وضاحت ڪري سگهي ٿوهڪ خاص حد تائين.اهو صرف هڪ معيار نه آهي nucleic امل جي پيداوار ۽ پاڪائي جي سڃاڻپ لاءِ، اهو صرف هڪ حوالي طور استعمال ڪيو ويندو آهي، ۽ اهو نه آهي ”سون جو معيار“.

Thermo Fisher ND-2000 دستياتي امتحان جي نتيجن جي اعتبار تي زور ڏئي ٿو

ان جو سبب اهو آهي ته هڪ مائڪرو/الٽرامائڪرو يو وي اسپيڪٽروفوٽو ميٽر استعمال ڪندي حاصل ڪيل نتيجا صرف پاسي کان نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار ۽ پاڪائي کي ظاهر ڪن ٿا، ۽ اهڙا ڪيترائي اثر ڪندڙ عنصر آهن (نظري رستو، نموني جو مقدار، نموني ڪنسنٽريشن، پي ايڇ ويليو، ٻيا آئنز جيڪي جاذب جي ماپ تي اثرانداز ٿين ٿا، وغيره)، او ڊي جي قدر ضروري نه آهي.ساڳي ئي وقت، جذبي قدر جي تعين ڪرڻ واري مواد جي مخصوصيت جي کوٽ جي ڪري، سنگل اسٽرينڊ ڊي اين اي، ڊبل اسٽرينڊ ڊي اين اي، آر اين اي، ڊي اين ٽي پيز، ۽ ڪجهه پروٽين سڀني جي جذبي جي چوٽي 260nm موج جي ڊيگهه تي آهي، ۽ صرف A260 پاران طئي ٿيل ڪنسنٽريشن لازمي طور تي DNA يا حقيقي RNA نه آهي.توجهه، ۽ ان جي سالميت ۽ زوال جو فيصلو نٿو ڪري سگهجي.

پوء ڪيئن اسان جي پاڪ nucleic اسيد جي معيار کي فيصلو ڪرڻ لاء؟ان کان علاوه هڪ micro/ultramicro UV spectrophotometer استعمال ڪرڻ کان علاوه، طريقن جهڙوڪ agarose gel electrophoresis جي ضرورت پوندي آهي ته جيئن بصري طور تي نيوڪليڪ ايسڊ جي پاڪيزگي ۽ سالميت کي ظاهر ڪن، ۽ ڪنسنٽريشن کي هڪ خاص حد تائين ظاهر ڪن.اهڙيءَ طرح، مختلف طريقن جي چڪاس جي نتيجن مان حاصل ڪيل نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار ۽ پاڪائي قابل اعتبار آهي.

تجرباتي چارٽ جو مقابلو

H1299 سيلز جي جينومڪ ڊي اين اي ڪمپني A جي ڊي اين اي ايڪسٽريشن ڪٽس استعمال ڪندي ڪڍيو ويو، ۽ اهم ناپاڪ آلودگي ڏٺو ويو، جنهن جي نتيجي ۾ اعلي OD قدر

(OD ماپي قيمت ۽ لاڳاپيل اليڪٽرروفيروگرام)

تشخيص انڊيڪس

ڇا نيوڪليڪ ايسڊ جي پيداوار ۽ معيار جي جاچ لاءِ ”سون جو معيار“ آهي؟

جيستائين اسان ڄاڻون ٿا، ڪو به سادو، تيز ۽ سستو طريقو ناهي.ڇا اهو spectrophotometer هجي، جيل الیکٹروفورسس، يا ماس اسپيڪٽروميٽري، اهي سڀئي حل ۾ نيوڪليڪ ايسڊ جي ڪنسنٽريشن ۽ پاڪائي کي مختلف پهلوئن کان عڪاسي ڪن ٿا، ۽ انهن کي هڪ ٻئي ڏانهن اشارو ڪندي فيصلو ڪرڻو پوندو.

بهترين تشخيص انڊيڪس هميشه آهيفالو اپ تجرباتي ايپليڪيشن.اهو ريورس ٽرانسپشن ۽ پي سي آر امپليڪشن جي ڪارڪردگي تي اثر انداز نٿو ڪري.قابل اعتماد ايمپليفڪيشن پراڊڪٽس ۽ سي ٽي قدر حاصل ڪرڻ، ۽ ترتيب سان مڪمل ترتيب حاصل ڪرڻ ڪامياب نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ آهي.

اختصار ڪرڻ لاءِ، رڳو تناسب واري نظريي جي نظرئي کي چيلينج ڪيو وڃي ”سٺو هيٺيون وهڪرو تجرباتي نتيجن کي استعمال ڪندي چڱا Extract Parameters“ جي نظر سان!

اعليٰ ڊي اين اي/آر اين اي پاڪائي حاصل ڪرڻ لاءِ تجويز ڪيل فورجيني ڊي اين اي آر اين اي ڪڍڻ واري ڪِٽس:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/