گذريل ڏهن سالن ۾، CRISPR جي بنياد تي جين ايڊيٽنگ ٽيڪنالاجي تيزيءَ سان ترقي ڪئي آهي، ۽ ڪاميابيءَ سان انساني ڪلينڪل تجربن ۾ جينياتي بيمارين ۽ ڪينسر جي علاج لاءِ لاڳو ڪئي وئي آهي.ساڳي ئي وقت ۾، دنيا جي سائنسدانن جين ايڊيٽنگ جي صلاحيت سان مسلسل نوان نوان اوزار ٽيپ ڪري رهيا آهن ته جيئن موجوده جين ايڊيٽنگ جي اوزارن ۽ فيصلن جي مسئلن کي حل ڪن.

سيپٽمبر 2021 ۾، ژانگ فينگ جي ٽيم سائنس جرنل ۾ هڪ مقالو شايع ڪيو [1]، ۽ ڏٺائين ته ٽرانسپوسٽرز جي هڪ وسيع رينج آر اين اي گائيڊڊ نيوڪليڪ ايسڊ اينزائمز کي ڪوڊ ڪيو ۽ ان کي اوميگا سسٽم جو نالو ڏنو (بشمول ISCB، ISRB، TNP8).مطالعي ۾ اهو پڻ معلوم ٿيو ته اوميگا سسٽم آر اين اي جو هڪ حصو استعمال ڪري ٿو ڪٽڻ واري ڊي اين اي ڊبل چين جي رهنمائي ڪرڻ لاءِ، يعني ωRNA.وڌيڪ اهم، اهي نيوڪليڪ ايسڊ اينزائمز تمام ننڍا آهن، صرف CAS9 جو 30٪، جنهن جو مطلب اهو آهي ته اهي سيلز تائين پهچائڻ جو امڪان وڌيڪ هوندا.

12 آڪٽوبر 2022 تي، ژانگ فينگ جي ٽيم نيچر جرنل ۾ شايع ڪيو جنهن جو عنوان آهي: Structure of the Omega Nickase ISRB in Complex with ωrna and Target DNA [2].

مطالعي وڌيڪ تجزيو ڪيو ISRB-ωRNA جي منجمد اليڪٽران خوردبيني ساخت ۽ اوميگا سسٽم ۾ ٽارگيٽ ڊي اين اي پيچيده.

ISCB CAS9 جو آڳاٽو آهي، ۽ ISRB ISCB جي HNH نيوڪليڪ ايسڊ ڊومين جي کوٽ جو ساڳيو اعتراض آهي، تنهنڪري سائيز ننڍو آهي، صرف اٽڪل 350 امينو اسيد.ڊي اين اي وڌيڪ ترقي ۽ انجنيئرنگ جي تبديلي جو بنياد پڻ فراهم ڪري ٿو.

آر اين اي گائيڊڊ آئي ايس آر بي اوميگا فيملي جو ميمبر آهي IS200/IS605 پاران انڪوڊ ٿيل سپر فيملي آف ٽرانسپوسن.phylogenetic تجزيو ۽ گڏيل منفرد ڊومينز مان، IsrB ممڪن آهي ته IscB جو اڳوڻو هجي، جيڪو Cas9 جو اڳوڻو آهي.

مئي 2022 ۾، ڪارنيل يونيورسٽي جي لولي ڊريگن ليبارٽري سائنس جي جرنل ۾ هڪ مقالو شايع ڪيو [3]، IscB-ωRNA جي ساخت ۽ ڊي اين اي کي ڪٽڻ جي ان جي ميڪانيزم جو تجزيو ڪيو.

IscB ۽ Cas9 جي مقابلي ۾، IsrB وٽ HNH نيوڪليز ڊومين، REC lobe، ۽ PAM جي ترتيب سان رابطي واري ڊومينز جو فقدان آهي، تنهنڪري IsrB Cas9 کان تمام ننڍو آهي (صرف 350 امينو اسيد).بهرحال، IsrB جي ننڍڙي سائيز نسبتا وڏي گائيڊ آر اين اي (ان جي اوميگا آر اين اي جي باري ۾ 300 nt ڊگهو آهي) سان متوازن آهي.

Zhang Feng جي ٽيم IsrB (DtIsrB) جي cryo-اليڪٽران خوردبيني ساخت جو تجزيو ڪيو نم-گرمي اينروبڪ بيڪٽيريا Desulfovirgula thermocuniculi ۽ ان جي پيچيده ωRNA ۽ ٽارگيٽ ڊي اين اي مان.ساخت جي تجزيي ڏيکاري ٿي ته IsrB پروٽين جي مجموعي جوڙجڪ Cas9 پروٽين سان گڏ هڪ پٺي جي هڏن جي جوڙجڪ سان حصيداري ڪئي.

پر فرق اهو آهي ته Cas9 REC lobe استعمال ڪري ٿو ٽارگيٽ جي سڃاڻپ کي آسان ڪرڻ لاءِ، جڏهن ته IsrB ان جي ωRNA تي ڀاڙي ٿو، جنهن جو هڪ حصو هڪ پيچيده ٽي-dimensional جوڙجڪ ٺاهي ٿو جيڪو REC وانگر ڪم ڪري ٿو.

RuvC کان ارتقا دوران IsrB ۽ Cas9 جي ساخت جي تبديلين کي بهتر سمجهڻ لاءِ، Zhang Feng جي ٽيم Thermus Thermophilus مان RuvC (TtRuvC)، IsrB، CjCas9 ۽ SpCas9 جي ٽارگيٽ ڊي اين اي بائنڊنگ ڍانچي جو مقابلو ڪيو.

IsrB ۽ ان جي ωRNA جو ڍانچي جو تجزيو واضح ڪري ٿو ته ڪيئن IsrB-ωRNA گڏيل طور تي ٽارگيٽ ڊي اين اي کي سڃاڻي ٿو ۽ ان کي صاف ڪري ٿو، ۽ هن ننڍڙي نيوڪليز جي وڌيڪ ترقي ۽ انجنيئرنگ لاءِ بنياد پڻ فراهم ڪري ٿو.ٻين آر اين اي-هدايت واري نظام سان مقابلو پروٽين ۽ آر اين اي جي وچ ۾ ڪارڪردگي رابطي کي نمايان ڪري ٿو، انهن متنوع سسٽم جي حياتيات ۽ ارتقاء جي اسان جي سمجھ کي وڌايو.

لنڪس:

1.https://www.science.org/doi/10.1126/science.abj6856

2.https://www.science.org/doi/10.1126/science.abq7220

3.https://www.nature.com/articles/s41586-022-05324-6