ليڊ

ڊگھو نان ڪوڊنگ آر اين اي، lncRNA ھڪڙو غير ڪوڊنگ آر اين اي آھي جنھن جي ڊگھائي 200 نيوڪليوٽائيڊس کان وڌيڪ آھي، عام طور تي 200-100000 nt جي وچ ۾.lncRNA ايپيگينيٽڪ، ٽرانسڪرپشن ۽ پوسٽ ٽرانسڪرپشن جي سطحن تي جين جي اظهار کي منظم ڪري ٿو، ۽ ايڪس ڪروموزوم خاموش ڪرڻ، جينوم امپرنٽنگ ۽ ڪروميٽين جي ترميم ۾ حصو وٺندو آهي، ٽرانسپشن ايڪٽيوشن، ٽرانسپشن مداخلت، ايٽمي ٽرانسپورٽ، سيل سائيڪل ريگيوليشن، سيل جي تفريق ۽ ٻين ڪيترن ئي اهم اثرن کي ترتيب ڏئي ٿو. انساني بيمارين جي ظهور، ترقي ۽ روڪٿام سان ويجهڙائي سان لاڳاپيل آهن، ۽ هن وقت بايو ميڊيسن جي شعبي ۾ گرم هنڌن مان هڪ آهي.

01  LncRNA جا قسم ۽ خاصيتون

lncRNA ان جي ٺهڻ جي مختلف ذريعن مطابق ڪيترن ئي قسمن ۾ ورهايل آهي، جيئن مٿي ڏنل شڪل ۾ ڏيکاريل آهي.ھيٺيون خاصيتون آھن:

1. lncRNAs عام طور تي ڊگھا ھوندا آھن، متحرڪ اظهار سان ۽ تفاوت دوران مختلف ڌار ڌار طريقن سان
2. ڪوڊنگ جينز جي مقابلي ۾، lncRNA ۾ عام طور تي گهٽ اظهار جي سطح هوندي آهي
3. اڪثر lncRNAs ۾ ٽشو جي فرق ۽ ترقي جي عمل ۾ واضح وقتي ۽ فضائي اظهار جي خصوصيت هوندي آهي.
4. طومار ۽ ٻين بيمارين ۾ خصوصيت جو اظهار آهي
5. lncRNA جا ذيلي سيل جڳهون مختلف آهن
6. تسلسل تحفظ ۾ گهٽ آهي، پر فنڪشن کي ڪنزرويشن جو هڪ خاص درجو آهي، وغيره.

02 LncRNA ريورس ٽرانسپشن بابت اڪثر پڇيا ويا سوال

سيلز ۾ lncRNA جي گھٽ مواد، ڊگھي ڊگھائي ۽ اعليٰ سطحي ڍانچي جي ڪري، اھڙي RNA ۾ اڪثر پيچيده ڍانچيون آھن جھڙوڪ اسٽيم لوپس يا وار پن، ۽ RT-qPCR ناڪامي ريورس ٽرانسڪرپشن يا گھٽ ڪارڪردگيءَ جي مسئلن جو شڪار آھي.

03 LncRNA ريورس ٽرانسپشن حل

مرڪزي قاعدي ۾، آر اين اي وائرس جي عمل کي ڊي اين اي سان ٺهڪندڙ ڪرڻ لاءِ پنهنجو ريورس ٽرانسڪرپٽ استعمال ڪندي آر اين اي کي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪيو ويندو آهي ريورس ٽرانسڪرپشن.ويٽرو ۾ سي ڊي اين اي ٽيمپليٽ کي گڏ ڪرڻ لاءِ آر اين اي وائرس ريورس ٽرانسڪرپٽ استعمال ڪرڻ جي عمل کي ريورس ٽرانسڪرپشن چئبو آهي.ريورس ٽرانسپشن سسٽم ۾ شامل مکيه عناصر: آر اين اي ٽيمپليٽ، ريورس ٽرانسڪرپٽ، پرائمر ۽ ٻيا اجزاء.

1. آر اين اي ٽيمپليٽ

ريورس ٽرانسپشن تي آر اين اي ٽيمپليٽ جو اثر ان جي ساخت، پاڪائي ۽ سالميت ۾ ظاهر ٿئي ٿو.ڪڍيل آر اين اي جي پاڪائي ۽ سالميت جيتري وڌيڪ هوندي، اوتري وڌيڪ ريورس ٽرانسپشن جي ڪارڪردگي ۽ وڌيڪ صحيح بعد ۾ مقداري نتيجا.عام طور تي استعمال ٿيندڙ آر اين اي ايڪسٽريشن ريجينٽس ذريعي صاف ڪيل آر اين اي اڪثر ڪري شراب ۽ گيانيڊائن سالٽ جي باقيات تي مشتمل هوندو آهي، جن جو تمام گهڻو ريورس ٽرانسڪرپٽ تي مضبوط روڪيندڙ اثر هوندو آهي.

2. ريورس ٽرانسڪرپٽ

Reverse transcriptase سڄي ريورس ٽرانسپشن سسٽم ۾ هڪ اهم اثر آهي.اڪثر ليبارٽريز ۾ استعمال ٿيندڙ ريورس ٽرانسڪرپٽ لاءِ مناسب گرمي پد عام طور تي 42 ° C آهي.حقيقت ۾، اعلي سطحي آر اين اي جي جوڙجڪ کي کولڻ لاء اعلي درجه حرارت جي ضرورت آهي، ۽ ريورس ٽرانسڪرپٽ جي گهرج وڌيڪ آهي.

3.پرائمر

ريورس ٽرانسپشن پرائمر ۾ جين مخصوص پرائمر، بي ترتيب پرائمر ۽ اوليگو ڊي ٽي پرائمر شامل آهن.اڪثر lncRNAs ۾ polyA دم نه هوندو آهي، ۽ اهو ضروري آهي ته اوليگو ڊي ٽي سان بي ترتيب پرائمر کي صحيح طرح سان ملائڻ.

4. ٻيا اجزاء

انهي حقيقت کي نظر ۾ رکندي ته آر اين اي خاص طور تي خراب ڪرڻ آسان آهي، ريورس ٽرانسپشن سسٽم ۾ اجزاء جو تعارف گهٽ ۾ گهٽ ٿي سگهي ٿو، جيڪو مؤثر طريقي سان RNase جي داخلا کي روڪي سگهي ٿو ۽ ريورس ٽرانسپشن جي هموار ترقي کي يقيني بڻائي ٿو.

Fاوريجنآر اين اي ٽيمپليٽ مان حاصل ڪري، ريورس ٽرانسڪرپشن کي qPCR ڏانهن

مڪمل طور تي پنھنجي lncRNA جي چڪاس کي محفوظ ڪريو

جانورن جي ڪل RNA Iحلکٽ (gDNA هٽائڻ واري ڪالم سان)

سيل ڪل RNA Iحلکٽ (gDNA هٽائڻ واري ڪالم سان)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase سان) (سپر پريمڪس لاءِ فرسٽ اسٽرينڊ سي ڊي اين اي سنٿيسس lncRNA کان)

حقيقي وقت PCR EasyTM-SYBR گرين I

Aفائدا ofآر اين اي ڪڍڻ:

کٽ ٽين نسل جي آر اين اي ڪڍڻ واري ٽيڪنالاجي استعمال ڪري ٿي، DNase استعمال ڪرڻ جي ڪا ضرورت ناهي.

11 منٽ کان 96، 24، 12، ۽ 6-سٺي پليٽ ڪلچرڊ سيلز، اعلي ڪارڪردگي جي اضافي جي ڊي اين اي آزاد، اعلي پاڪائي، اعلي معيار جي ڪل سيل آر اين اي.

lncRNA ريورس ٽرانسپشن جا فائدا:

هڪ ريورس ٽرانسپشن سسٽم خاص طور تي LncRNA لاءِ تيار ڪيو ويو آهي جلدي جينومڪ ڊي اين اي آلودگي کي ختم ڪرڻ لاءِ.

ريورس ٽرانسپشن سسٽم ۾ اعليٰ حرارتي استحڪام آهي ۽ اڃا تائين 50 ° سي تي سٺي ريورس ٽرانسپشن ڪارڪردگي آهي.

اعليٰ GC مواد ۽ پيچيده ثانوي ڍانچي سان گڏ ٽيمپليٽ اعليٰ ڪارڪردگيءَ سان مٽائي سگھجن ٿا.

فائداof qپي سي آر:

گرم شروع ٿيندڙ Foregene Taq Polymerase ۾ اعلي ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي، اعلي ايمپليفڪيشن حساسيت، ۽ اعلي ايمپليفڪيشن جي خصوصيت آهي

بهتر ڪيل ريئل PCR Easy Mix SYBR Green I کي وڌيڪ سڃاڻڻ واري حساسيت آهي، ۽ ان جي فلوروسينس جي شدت هڪجهڙائي واري شين جي ڀيٽ ۾ 3-5 ڀيرا آهي، جيڪا مختلف قسم جي فلوروسينس مقداري تجربن جي ضرورتن کي پورو ڪري سگهي ٿي.