تجرباتي اهلڪارن جي رويي کي معياري بڻائڻ لاءِ PCR تجربو SOP قائم ڪريو.
تجربو ڪندڙ سختي سان آپريٽنگ طريقيڪار تي عمل ڪري ٿو، ۽ PCR آلودگي کي گھٽ ڪري ٿو جيڪو انساني عنصر جي ڪري ٿي سگھي ٿو يا آلودگي جي واقعن کي روڪي ٿو.ان کان علاوه، تجربو ڪندڙ کي لاڳاپيل پيشه ورانه علم ۽ صلاحيتون هجڻ گهرجن، بشمول آپريٽنگ لاڳاپيل سامان ۾ مهارت، سڄي ڪم جي عمل کي واضح ڪرڻ، آلودگي جي علاج جي طريقن ۽ ليبارٽري جي معيار تي ڪنٽرول طريقن کي ماهر ڪرڻ، ۽ امتحان جي نتيجن کي صحيح طور تي تفسير ڪرڻ جي قابل.
معياري پي سي آر ليبارٽري قائم ڪئي وڃي.
PCR ليبارٽري اصولن ۾ چار علائقن ۾ ورهايل آهي، يعني ريگينٽ تيار ڪرڻ وارو علائقو، نموني پروسيسنگ ايريا، ايمپليفڪيشن ايريا، ۽ ايمپليفڪيشن پراڊڪٽ اينالائسز ايريا.پهرين ٻه علائقا اڳ-امپليفڪيشن وارا علائقا آهن، ۽ آخري ٻه علائقا پوسٽ-ايمپليفڪيشن وارا علائقا آهن.پري-Amplification زون ۽ پوسٽ-Amplification زون کي سختي سان الڳ ڪيو وڃي.تجرباتي مواد، ريجينٽ، رڪارڊنگ پيپر، قلم، صفائي جو مواد، وغيره، صرف پري-ايمپليفڪيشن واري علائقي کان پوسٽ-ايمپليفڪيشن ايريا تائين، يعني ريجنٽ تيار ڪرڻ واري علائقي مان → نموني پروسيسنگ ايريا → ايمپليفڪيشن ايريا → امپليفڪيشن پراڊڪٽ تجزيو ايريا، ۽ پوئتي نه وهڻ گهرجن.ليبارٽري ۾ هوا جي وهڪري کي پڻ پري-ايمپليفڪيشن واري علائقي کان پوسٽ-ايمپليفڪيشن واري علائقي ڏانهن وهڻ گهرجي، ۽ پوئتي نه وهڻ گهرجي.مثالي PCR ليبارٽري ڊيزائن هيٺ ڏيکاريل آهي:
شڪل A: مثالي PCR ليبارٽري سيٽ اپ موڊ بفر روم ۾ منفي دٻاء سان
شڪل B: مثالي PCR ليبارٽري سيٽ اپ موڊ بفر روم ۾ مثبت دٻاء سان
PCR ليبارٽري سيٽ اپ ڊياگرامس شڪل A ۽ Figure B ۾ ڏنل آهن هڪ وڌيڪ مثالي سيٽ اپ موڊ هجڻ گهرجي، ۽ حالتن سان ليبارٽري هن موڊ کي ڊزائن لاء حوالو ڪري سگهي ٿي.عام ليبارٽريز لاء، اها سفارش ڪئي وئي آهي ته پي سي آر ايمپليفڪيشن ايريا ۽ پراڊڪٽ جي تجزيي واري علائقي کي الڳ ڪري سگهجي ٿو، ۽ ڍڪ جي افتتاح کي نموني جي تياري واري علائقي ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن واري علائقي ۾ ممڪن حد تائين گھٽايو وڃي.ياد رکو: پراڊڪٽس ۽ تجرباتي سپلاءِ پراڊڪٽ جي تجزيي واري علائقي ۾ سختي سان منع ڪئي وئي آهي ته نموني جي تياري واري علائقي ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن ايريا ڏانهن وٺي وڃي.
جيڪڏهن ليبارٽري صرف پي سي آر جي سڃاڻپ ۽ سڃاڻپ کي انجام ڏئي ٿي، اهو روايتي پي سي آر جي بدران فلورسنٽ مقداري پي سي آر استعمال ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.
فلورسنس مقداري PCR ڳولڻ جا نتيجا گڏ ڪري سگهجن ٿا ۽ فلوروسينس سگنلن جي ذريعي تجزيو ڪيو وڃي ٿو، تنهن ڪري رد عمل کان پوء اليڪٽرروفورسس لاء لڪير کولڻ جي ڪا ضرورت ناهي، جيڪا PCR پراڊڪٽ جي آلودگي کان بچي ٿي جيڪا ايروسول ٺاهڻ لاء رد عمل جي شين جي ليڪ سبب پيدا ٿئي ٿي.جيڪڏهن توهان جيل اليڪٽرروفورسس جي لوڊ ٿيڻ واري مرحلي دوران ڪيپ کولڻ جو تعداد وڌايو، ايروسول آلودگي ٿيڻ جو امڪان آهي.اها سفارش ڪئي وئي آهي ته مقداري پي سي آر جي درخواست کي وڌايو وڃي ۽ تدريجي طور تي معيار جي پي سي آر کي تبديل ڪيو وڃي.
UNG مخالف PCR پيداوار آلودگي نظام PCR رد عمل لاء استعمال ڪيو ويندو آهي.
سسٽم dTTP جي بدران dUTP استعمال ڪري ٿو.PCR ردعمل کان پوء، سڀ PCR پروڊڪٽس (DNA ٽڪرا) dUTP سان شامل ڪيا ويا آهن؛PCR رد عمل جي ايندڙ دور ۾، سسٽم ۾ شامل ڪيل UNG اينزيم PCR کان 5 منٽ اڳ 37 ° C تي پکڙيل آهي، جيڪو خاص طور تي ڊي اين اي جي سڀني حصن کي ڊاهي سگهي ٿو جنهن ۾ dUTP شامل آهي، ۽ پوء PCR ردعمل انجام ڏئي ٿو.اهو مڪمل طور تي پي سي آر جي شين جي ڪري ايروسول آلودگي کي ختم ڪري سگهي ٿو.اثر هيٺ ڏنل شڪل ۾ ڏيکاريل آهي:
نوٽ: سڌو پي سي آر سيريز لاءِ، توهان چونڊ ڪري سگهو ٿا سيريز جون پروڊڪٽس مخالف پي سي آر پراڊڪٽ جي آلودگي واري نظام جي Foregeneصلاح ڏيو
ليبارٽرين لاءِ جيڪي وڏي پيماني تي جينو ٽائيپنگ ٽيسٽ ڪن ٿيون، ان کي سختي سان صلاح ڏني وئي آهي ته UNG اينٽي پي سي آر پراڊڪٽ آلودگي واري نظام کي استعمال ڪن ريجنٽس جي جاچ لاءِ مناسب ليبارٽرين جي تعمير کان علاوه.
ياد ڏياريندڙ: هن سسٽم جو استعمال PCR پيداوار جي آلودگي کي ختم نٿو ڪري سگهي جيڪا اڳ ۾ ئي سبب ٿي چڪي آهي.تنهن ڪري، UNG سسٽم کي لاڳاپيل ٽيسٽ جي شروعات ۾ استعمال ڪيو وڃي، ۽ UNG سسٽم کي پي سي آر ايمپليفڪيشن لاء استعمال ڪيو وڃي، جيئن ته پي سي آر جي شين جي آلودگي کي روڪڻ لاء غلط مثبت.
وڏي پيماني تي ٽيسٽنگ ڪرڻ دوران، فورين جي سڌي PCR-UNG سسٽم کي استعمال ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي، جهڙوڪ:
ٻوٽي جي پتي سڌو PCR کٽ- UNG؛
ٻوٽي جي ٻج سڌو PCR کٽ- UNG؛
جانورن جي ٽشو سڌو PCR کٽ- UNG؛
ماؤس ٽيل سڌو PCR کٽ- UNG؛
زيبرا مڇي سڌو PCR Kit-UNG.
Foregene کان ڪتن جو هي سلسلونه رڳو پي سي آر جي چڪاس کي جلدي ۽ وڏي پيماني تي انجام ڏئي سگھي ٿو، پر پي سي آر جي پيداوار جي آلودگي کي روڪڻ ۽ ڪنٽرول پڻ ڪري سگھي ٿو.
پوسٽ ٽائيم: مارچ-19-2021
