PCR ردعمل جي شاندار خصوصيت ان جي وڏي پيماني تي گنجائش ۽ انتهائي اعلي حساسيت آهي.پي سي آر جي ڪارڪردگي ۽ پتو لڳائڻ جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائڻ لاءِ، اسان پي سي آر امپليفڪيشن جي صلاحيت ۽ سڃاڻپ جي حساسيت کي بهتر بڻائڻ لاءِ پرعزم آهيون، پر سر درد تجربو جي عمل ۾ آهي.غلط مثبت اڪثر ڪري ٿي، ۽ نموني پار آلودگي يا پي سي آر جي پيداوار جي آلودگي جي تمام گهٽ مقدار شايد تجربن ۾ غلط مثبت سبب ٿي سگهي ٿي.
PCR پيداوار جي آلودگي جا پنج قسم
PCR آلودگي جا ڪيترائي سبب آهن، جن کي تقريبن هيٺين ڀاڱن ۾ ورهائي سگهجي ٿو:
نموني جي آلودگي بنيادي طور تي نمونن کي گڏ ڪرڻ لاءِ ڪنٽينر جي آلودگي سبب ٿيندي آهي، يا جڏهن نمونو رکيل هوندو آهي، اهو لوز سيلنگ جي ڪري ڪنٽينر مان ٻاهر نڪري ويندو آهي، يا نمونو ڪنٽينر جي ٻاهرئين پاسي سان لڳل هوندو آهي، جيڪو ڪراس آلودگي جو سبب بڻجندو آهي؛آلودگي نموني جي وچ ۾ آلودگي جي ڪري ٿي؛ڪجهه مائڪروبيل نموني، خاص طور تي وائرس، ايروسول سان پکڙجي سگهن ٿا يا ايروسول ٺاهي سگهن ٿا، نتيجي ۾ باهمي آلودگي.
ان جو بنيادي سبب اهو آهي ته پي سي آر ريجنٽس جي تياري دوران نموني گن، ڪنٽينر، ڊبل ڊسٽل واٽر ۽ ٻيا محلول پي سي آر نيوڪليڪ ايسڊ ٽيمپليٽ سان آلوده ٿين ٿا.
ماليڪيولر بائيولاجي ليبارٽريز ۽ ڪجھ ليبارٽريز ۾ جيڪي ڪلون ٿيل پلازميڊ کي مثبت ڪنٽرول طور استعمال ڪن ٿيون، ڪلون ٿيل پلازميڊ آلودگي جو مسئلو پڻ عام آهي.ڇاڪاڻ ته يونٽ جي مقدار ۾ ڪلوننگ پلازميڊ جو مواد تمام گهڻو آهي، ۽ صاف ڪرڻ جي عمل ۾ وڌيڪ اوزار ۽ ريجنٽ جي ضرورت هوندي آهي، ۽ جاندار سيلز ۾ پلازميڊ جي آلودگي جو تمام گهڻو امڪان آهي ڇاڪاڻ ته جاندار سيلز جي مضبوط واڌ ۽ ٻيهر پيدا ڪرڻ جي صلاحيت جي ڪري.
پي سي آر جي رد عمل ۾ سڀ کان وڌيڪ عام آلودگي جو مسئلو امپلائيڊ ٿيل شين جي آلودگي آهي.ڇاڪاڻ ته پي سي آر پراڊڪٽ جي ڪاپي جي مقدار وڏي آهي (عام طور تي 1013 ڪاپيون/ايم ايل)، جيڪا پي سي آر جي سڃاڻپ ڪاپي نمبر جي حد کان تمام گهڻي آهي، پي سي آر پراڊڪٽ جي آلودگي جي تمام گهٽ مقدار غلط مثبت سبب ٿي سگهي ٿي.
ايروسول آلودگي PCR مصنوعات جي آلودگي جو سڀ کان وڌيڪ امڪاني روپ آهي، ۽ اهو پڻ نظر انداز ڪرڻ آسان آهي.اهو مائع جي مٿاڇري ۽ هوا جي وچ ۾ رگڙ سان ٺهيل آهي.عام طور تي، ايروسول آلودگي پيدا ٿي سگهي ٿي جڏهن لڪي کي کوليو ويندو آهي، جڏهن نموني کي وڌايو ويندو آهي، يا ان وقت به جڏهن رد عمل واري ٽيوب کي زور سان ڌڪيو ويندو آهي.حساب جي مطابق، هڪ ايروسول ذرو 48,000 نقلن تي مشتمل ٿي سگهي ٿو، تنهنڪري ان جي سبب آلودگي هڪ مسئلو آهي جيڪو خاص ڌيان جي لائق آهي.
خاص طور تي، ٽيسٽنگ ليبارٽريون اڪثر ڪري ساڳيون پرائمر استعمال ڪن ٿيون هڪ خاص جين کي جانچڻ لاءِ.وقت سان گڏ، پي سي آر جي پيداوار جي آلودگي جي وڏي مقدار ۾ ليبارٽري جي جاء تي ٿيندي.هڪ ڀيرو اهڙي آلودگي ٿئي ٿي، ان کي ٿوري وقت ۾ ختم ڪرڻ ڏکيو آهي.
آلودگي جي پهرين ٽن قسمن کان بچڻ لاءِ اسان موثر طريقا استعمال ڪري سگهون ٿا، پر PCR مصنوعات جي ڪري پيدا ٿيندڙ آلودگي کي روڪڻ مشڪل آهي، خاص ڪري غير معياري PCR ليبارٽرين جي تعمير ۾.پي سي آر جي عمل ۾، جڏهن پائپٽ ٽپ چوسي ٿو ۽ مائع کي ڦوڪيندو آهي، ۽ پي سي آر ٽيوب ڍڪ کوليو ويندو آهي، هڪ ايروسول ٺاهي ويندي.ايروسول (هڪ ايروسول هزارين ڊي اين اي کڻي سگهي ٿو) جي ڊي اين اي ماليڪيولز کي ختم ڪرڻ ڏکيو آهي ڇاڪاڻ ته اهي هوا ۾ ترندا آهن.هڪ دفعو PCR تجربن جو ايندڙ دور متعارف ڪرايو ويندو، غلط مثبت ناگزير طور تي واقع ٿيندي.
جيئن هيٺ ڏنل شڪل ۾ ڏيکاريل آهي، منفي ڪنٽرول پڻ دلچسپي جي لاڳاپيل بينڊ کي وڌايو:
PCR آلودگي ۽ روڪٿام جي هن مسئلي جو پهريون حصو هتي متعارف ڪرايو ويو آهي.ايندڙ شمارو توهان لاءِ ٻيو حصو آڻيندو ”PCR پراڊڪٽ جي آلودگي جي روڪٿام“، تنهن ڪري ڏسندا رهو!
پوسٽ جو وقت: جولاء-25-2017
