سڌو پي سي آر ھڪڙو ردعمل آھي جيڪو سڌو سنئون جانور يا ٻوٽن جي نسب کي استعمال ڪري ٿو بغير وڌائڻ لاء نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي.ڪيترن ئي طريقن سان، سڌو پي سي آر باقاعده پي سي آر وانگر ڪم ڪري ٿو

بنيادي فرق سڌو PCR ۾ استعمال ٿيل ڪسٽم بفر آهي، نموني سڌو سنئون پي سي آر رد عمل جي تابع ٿي سگهي ٿو بغير نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ کان سواء، پر انزايمز جي رواداري ۽ سڌو PCR ردعمل ۾ شامل بفر جي مطابقت لاء لاڳاپيل گهرجون آهن.

جيتوڻيڪ عام نموني ۾ گهٽ يا گهٽ PCR inhibitors موجود آهن، سڌو PCR اڃا تائين اينزيميمس ۽ بفرز جي عمل جي تحت قابل اعتماد واڌارو حاصل ڪري سگهي ٿو.روايتي پي سي آر رد عمل کي اعلي معيار جي نيوڪلڪ ايسڊ جي ضرورت هوندي آهي ٽيمپليٽ جي طور تي، جيڪو پي سي آر جي رد عمل جي هموار ترقي کي روڪي سگهي ٿو جيڪڏهن ٽيمپليٽ ۾ پروٽين ۽ ٻيون نجاست شامل آهن.سڌو PCR هن وقت ماليڪيولر تشخيص جي ميدان ۾ وڌيڪ مشهور ٽيڪنالاجيز مان هڪ آهي.

01 سڌو PCR اصل ۾ جانورن ۽ ٻوٽن لاءِ استعمال ڪيو ويو

سڌو PCR جي ابتدائي ايپليڪيشن جانورن ۽ ٻوٽن جي ميدان ۾ آهي، جهڙوڪ رت، ٽشو ۽ وار، ٻلي، ڪڪڙ، خرگوش، رڍ، ڍور وغيره، ٻوٽن جا پن ۽ ٻج وغيره، جينوٽائپنگ، ٽرانسجنڪ، پلاسمڊ جي سڃاڻپ، جين ناڪ آئوٽ سورسز، ڊي اين اي شناختي تجزيا، جين ناڪ آئوٽ سورسز، ڊي اين اي شناختي تجزيا، ڊي اين اي سڃاڻپ جي ٻين علمن جي مطالعي لاءِ استعمال ڪيا ويا. ايس.

انهن شعبن ۾ ڪجهه عام خاصيتون آهن، يعني ٽارگيٽ جين جو مواد نسبتاً وڌيڪ آهي ۽ نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ مشڪل آهي، تنهن ڪري سڌو پي سي آر نه رڳو وقت بچائي سگهي ٿو ۽ نتيجن تي ٿورو اثر رکي ٿو، پر خرچ به بچائي ٿو.

سڌو پي سي آر استعمال ڪيو ويو پيٿوجنز جي ڳولا لاءِ تازو سالن جو معاملو آهي، ڪجهه پي سي آر ريجنٽ ٺاهيندڙن هن هدايت ۾ تمام گهڻيون ڪوششون ڪيون آهن جڏهن جدت ٺاهيندي.خاص طور تي هن COVID-19 جي وبا ۾، ڪيتريون ئي اهڙيون سڃاڻپ جون شيون مارڪيٽ تي ظاهر ٿيون آهن، جهڙوڪ SARS-CoV-2 نيوڪليڪ ايسڊ ڊيٽيڪشن ڪٽ (ملٽيپلڪس پي سي آر فلورسنٽ پروب ميٿڊ) فارگين پاران تحقيق ۽ ترقي ڪئي وئي آهي، جيڪا ريئل ٽائيم RT PCR ٽيڪنالاجي (rRT-PCR) استعمال ڪري ٿي. oropharyngeal swab جا نمونا.

Foregene انهن ڪمپنين مان هڪ آهي جيڪا سڌي PCR ٽيڪنالاجي استعمال ڪندي، عام ORF1ab، N، E، ۽variant انساني ناسوفرينجيل يا oropharyngeal swab نموني ۾ نسب نيوڪليڪ ايسڊس جهڙوڪ SARS-CoV-2 B.1.1.7 نسب (UK)، B.1.351 نسب (ZA)، B.1.617 نسب (IND) ۽ P.1 نسب (BR).

02  سڌو پي سي آر لاءِ ريجنٽس جي ضرورت آهي

ليسيٽ جو نمونو

نموني lysate پنهنجي طرفان ترتيب يا خريد ڪري سگهجي ٿو.lysate جي مختلف برانڈن جي ٺاھ جوڙ ۾ فرق، lysing جي صلاحيت مختلف ڪندو، ۽ پوء lysing وقت ٿورو مختلف ٿيندو.مثال طور، جانورن جي بافتن جا نمونا تيار ڪرڻ لاءِ، عام طور تي 30 منٽ يا رات جو ليسس جي سفارش ڪئي ويندي آهي، ۽ وائرس لاءِ ليسس جو حل 3-10 منٽن تائين هوندو آهي.

پي سي آر ماسٽر ميڪس

اهو سفارش ڪئي وئي آهي ته گرم-شروع ڊي اين اي پوليمريس استعمال ڪرڻ لاء مخصوص ايمپليفڪيشن کي وڌائڻ ۽ وڌائڻ جي صلاحيت کي وڌائڻ لاء.سڌو PCR جو بنيادي هڪ انتهائي برداشت پوليمريز آهي.

نموني ۾ اجزاء کي ختم يا روڪيو جيڪي ڊي اين اي ايمپليڪشن کي متاثر ڪن ٿا

ليسيٽ سان نموني کي پروسيس ڪرڻ کان پوء، پروٽين، لپڊس ۽ ٻيا سيل ملبي ڇڏيا ويندا، اهي شيون پي سي آر جي رد عمل کي روڪيندا.تنهن ڪري، سڌو PCR انهن عنصرن جي اثر کي گهٽائڻ لاء لاڳاپيل هٽائڻ يا روڪڻ جي اضافي جي ضرورت آهي.

03  سڌو PCR جي پنجن ڄاڻ واري پوائنٽن جو مجموعو

پهريون، سڌو PCR ٽيڪنالاجي مختلف حياتياتي نموني لاء سڌو PCR ٽيڪنالاجي آهي.هن ٽيڪنيڪل حالت ۾، نيوڪلڪ ايسڊ کي الڳ ڪرڻ ۽ ڪڍڻ جي ڪا ضرورت ناهي، سڌو سنئون ٽشو نموني کي اعتراض جي طور تي استعمال ڪريو، ۽ ٽارگيٽ جين پرائمر شامل ڪريو پي سي آر ردعمل کي انجام ڏيڻ لاء.

ٻيو، سڌو PCR ٽيڪنالاجي نه رڳو هڪ روايتي ڊي اين اي ٽيمپليٽ ايمپليفڪيشن ٽيڪنالاجي آهي، پر آر اين اي ٽيمپليٽ ريورس ٽرانسپشن پي سي آر پڻ شامل آهي.

ٽيون، سڌو پي سي آر ٽيڪنالاجي نه رڳو سڌو سنئون معيار جي پي سي آر رد عمل کي انجام ڏئي ٿو ٽشو نموني تي، پر ان ۾ شامل آهي ريئل ٽائم qPCR رد عمل، جنهن کي رد عمل سسٽم جي ضرورت آهي مضبوط مخالف پس منظر فلورسنس مداخلت جي صلاحيت ۽ endogenous fluorescence دشمني جي صلاحيت کي ختم ڪري ٿو.

چوٿون، سڌو PCR ٽيڪنالاجي پاران ٽارگيٽ ڪيل نمونن کي صرف نيوڪلڪ ايسڊ ٽيمپليٽس جي ڇڏڻ جي ضرورت آهي، ۽ پروٽين، پولي سيڪرائڊس، لوڻ آئنز وغيره کي نه هٽايو جيڪي PCR جي رد عمل سان مداخلت ڪن ٿا.جنهن جي ضرورت آهي نيوڪليڪ ايسڊ پوليميرس ۽ پي سي آر ميڪس کي رد عمل واري نظام ۾ بهترين مزاحمت ۽ موافقت حاصل ڪرڻ لاءِ انزائيم سرگرمي ۽ نقل جي درستگي کي يقيني بڻائڻ لاءِ پيچيده حالتن ۾.

پنجون، ٽشو جو نمونو سڌو PCR ٽيڪنالاجي جي ذريعي ٽارگيٽ ڪيو ويو آهي بغير ڪنهن نيوڪليڪ ايسڊ جي افزودگي علاج ۽ ٽيمپليٽ جي مقدار تمام گهٽ آهي، جنهن کي رد عمل سسٽم جي ضرورت آهي انتهائي حساسيت ۽ ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي.