مان سمجهان ٿو ته هر ڪنهن کي هميشه اهڙي يا اهڙين مسئلن کي منهن ڏيڻو پوندو جڏهن PCR رد عمل ڪندي، پر انهن مان اڪثر ٻن مکيه مسئلن ۾ درجه بندي ڪري سگهجي ٿو:

جين ٽيمپليٽ جو تمام ٿورڙو واڌارو (Amplification)؛
تمام گھڻو غير ھدف جين وڌائڻ.
additives استعمال ڪندي انهن مسئلن کي حل ڪرڻ لاء عام حڪمت عملي مان هڪ آهي.عام طور تي additives جو ڪردار ٻه پاسا آهن:
ثانوي جوڙجڪجين جو (ثانوي جوڙجڪ)؛
غير مخصوص پرائمنگ کي گھٽايو.
اڄ، ايڊيٽر مختصر طور تي توهان کي PCR رد عمل ۽ انهن جي ڪمن ۾ عام اضافو متعارف ڪرايو ويندو.
Additives جيڪي ثانوي ساخت کي گھٽائي ٿو
سلفوڪسائيڊ(DMSO)
جين جا نمونااعلي GC مواد سان.جڏهن ته، DMSO پڻ تمام گهڻو گھٽائي ٿو Taq پوليمريز سرگرمي.تنهن ڪري، هر ڪنهن کي ٽيمپليٽ جي رسائي ۽ پوليميرس جي سرگرمي کي توازن ڪرڻو پوندو.ايڊيٽر مشورو ڏئي ٿو ته توھان ڪوشش ڪري سگھو ٿا DSMO جي مختلف ڪنسنٽريشن، جھڙوڪ 2٪ کان 10٪ تائين، اھو ڪنسنٽريشن ڳولڻ لاءِ جيڪو توھان جي تجربي لاءِ مناسب آھي.
غير ionic صابن
غير آئنڪ ڊٽرجنٽ، جهڙوڪ 0.1-1٪ Triton X-100، Tween 20 يا NP-40، عام طور تي ڊي اين اي جي ثانوي ساخت کي گھٽائي ٿو.جيتوڻيڪ اهو ٽيمپليٽ جين جي واڌ کي وڌائي سگھي ٿو، اهو پڻ غير مخصوص ايمپليفڪيشن جي مصيبت جو سبب بڻائيندو.تنهن ڪري، اهي additives گهٽ پيداوار پي سي آر جي رد عمل لاء سٺو ڪم ڪن ٿا، پر ايترو سٺو ناهي نسبتا ناپاڪ پي آر سي ردعمل لاء.غير آئنڪ ڊٽرجنٽ جو ٻيو فائدو SDS آلودگي جي گھٽتائي آهي.عام طور تي ڊي اين اي ڪڍڻ واري عمل دوران، ايس ڊي ايس کي پي سي آر جي مرحلي ۾ آندو ويندو، جيڪو پوليميرس جي سرگرمي کي تمام گهڻو روڪي ٿو.تنهن ڪري، ردعمل ۾ 0.5٪ Tween-20 يا Tween-40 شامل ڪري سگھن ٿا SDS جي منفي اثرات کي غير جانبدار ڪري سگھن ٿا.
بيٽن_
Betaine ثانوي ڍانچي جي ٺهڻ کي گهٽائڻ سان ڊي اين اي ايمپليفڪيشن کي بهتر بڻائي سگهي ٿو ۽ عام طور تي تجارتي پي سي آر ڪٽس لاءِ ”اسرار“ اضافو آهي.جيڪڏهن توهان betaine استعمال ڪرڻ چاهيو ٿا، توهان کي betaine يا betaine mono-hydrate (Betaine يا Betaine mono-hydrate) رکڻ گهرجي، پر betaine هائيڊروڪلورائڊ (Betaine HCl) نه، 1-1.7M جي آخري ڪنسنٽريشن کي ترتيب ڏيو.Betaine پڻ خاصيت کي بهتر ڪرڻ ۾ مدد ڪري سگھي ٿي ڇو ته اھو ڊي اين اي پگھلڻ / ڊي اين اي ڊينيچريشن جي بنيادي جوڙي جي جوڙجڪ انحصار کي ختم ڪري ٿو.
غير مخصوص پرائمنگ کي گهٽائڻ لاءِ اضافو
فارمامائيڊ
Formamide هڪ عام طور تي استعمال ٿيل نامياتي PCR additive آهي.اهو ڊي اين اي ۾ وڏي گروو ۽ نابالغ نالن سان گڏ ٿي سگهي ٿو، ان ڪري ماسٽر ڊي اين اي ڊبل هيلڪس جي استحڪام کي گهٽائي ٿو ۽ ڊي اين اي جي پگھلڻ واري درجه حرارت کي گهٽائي ٿو.PCR تجربن ۾ استعمال ٿيل فارمامائيڊ جو تسلسل عام طور تي 1٪ -5٪ آهي.
ٽيٽراميٿيلامونيم کلورائڊ( TMAC)
Tetramethylammonium chloride hybridization (hybridization specificity) جي خاصيت کي وڌائي سگھي ٿو ۽ ڊي اين اي جي پگھلڻ واري درجه حرارت کي وڌائي سگھي ٿو.ان ڪري، TMAC غير مخصوص پرائمنگ کي ختم ڪري سگھي ٿو ۽ ڊي اين اي ۽ آر اين اي جي غلط بائيڊنگ کي گھٽائي سگھي ٿو.جيڪڏھن توھان استعمال ڪريوپرائمر خراب ڪرڻPCR ردعمل ۾، TMAC کي شامل ڪرڻ لاء ياد رکو، جيڪو عام طور تي 15-100 ايم ايم جي ڪنسنٽريشن تي استعمال ٿيندو آهي.
ٻيا عام اضافو
مٿي ذڪر ڪيل additives جي ٻن قسمن کان علاوه، PCR رد عمل ۾ ڪيترائي عام additives آهن، جيتوڻيڪ انهن جا مختلف ڪم آهن، اهي پڻ اهم آهن.
ميگنيشيم آئن
ميگنيشيم آئن پوليميرس جو هڪ ناگزير ڪوفيڪٽر (ڪوفيڪٽر) آهي، اهو چوڻ آهي ته، ميگنيشيم آئن کان سواء، پوليمريز غير فعال آهي.جڏهن ته، تمام گهڻو مگنيشيم آئن پڻ پوليميرس جي ڪارڪردگي کي متاثر ڪري سگهي ٿو.هر PCR رد عمل ۾ ميگنيشيم آئن جو تسلسل مختلف ٿيندو.چيليٽنگ ايجنٽ (جهڙوڪ EDTA يا citrate)، dNTPs ۽ پروٽين جي ڪنسنٽريشن سڀ مگنيشيم آئنز جي ڪنسنٽريشن کي متاثر ڪن ٿا.تنهن ڪري، جيڪڏهن توهان کي پنهنجي پي سي آر جي تجربي سان مسئلو آهي، ته توهان مختلف ميگنيشيم آئن ڪنسنٽريشن کي تبديل ڪرڻ جي ڪوشش ڪري سگهو ٿا، مثال طور، 1.0 کان 4.0 ايم ايم تائين، وچ ۾ 0.5-1 ايم ايم جي وقفي سان.
اها ڳالهه نوٽ ڪرڻ جي قابل آهي ته ڪيترن ئي منجهيل-پھل چڪر کي ميگنيشيم کلورائڊ حل جي ڪنسنٽريشن اسٽريٽائيشن جي ڪري سگھي ٿو.تنهن ڪري، توهان کي هر استعمال کان پهريان ان کي مڪمل طور تي ڦهلائڻ گهرجي، ۽ ان کي استعمال ڪرڻ کان اڳ چڱي طرح ملائي.
بوائن سيرم البومين(بوائن البومين، BSA)
ماليڪيولر ڪيمسٽري تجربن ۾، بوائن سيرم البومين هڪ تمام عام اضافو آهي، خاص طور تي پابندي اينزيم هضم ۽ پي سي آر تجربن ۾.PCR جي رد عمل ۾، BSA آلودگي کي گهٽائڻ ۾ مددگار آهي جهڙوڪ فينولڪ مرکبات.۽ اهو پڻ چيو ويندو آهي ته اهو ٽيسٽ ٽيوب جي ڀت ڏانهن ريڪٽرن جي آسن کي گهٽائي سگهي ٿو.پي سي آر جي رد عمل ۾، عام طور تي شامل ڪيل BSA جو تسلسل 0.8 mg/ml تائين پهچي سگھي ٿو.
 
لاڳاپيل مصنوعات:
پي سي آر هيرو(رنگ سان)
پي سي آر هيرو