تعارف:

RNA، سائنسي نالو ribonucleic acid، ان جو مخفف RiboNucleic Acid مان نڪتل آھي، ھڪ قسم جو نيوڪليڪ ايسڊ آھي جيڪو گھٽ ۾ گھٽ درجنين رائبونيڪلوٽائڊس کي فاسفوڊيسٽر بانڊز ذريعي ڳنڍڻ سان ٺھي ٿو.

آر اين اي جي ڳولا جو بنيادي مقصد آلودگي کان پاڪ ڪل آر اين اي ڪڍڻ آهي، ۽ آر اين اي ڪڍڻ جي بنيادي اصول کي مختصر طور تي هن ريت بيان ڪري سگهجي ٿو:

1. پهرين سيلن کي خراب ڪريو

2. پوءِ macromolecular impurities (پروٽين، لپڊس، ڊي اين اي، وغيره) کي هٽايو.

3. آخر ۾، آر اين اي کي تيز ڪيو ويندو آهي جڏهن لوڻ ۽ نامياتي محلولن کي ختم ڪري، ۽ آر اين اي کي وڌيڪ صاف ڪندي.

استخراجي طريقي جو ماضي ۽ حال

آر اين اي ڪڍڻ واري طريقي جي پهرين نسل TRIzol ورن جو طريقو آهي (استعمال ٿيل ريجينٽ شامل آهن guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, etc.) هڪ ڏاڏي Piotr Chomczynski ۽ ڏاڏي Nicoletta Sacchi جي ايجاد ڪيل آهي، ڇاڪاڻ ته هي ايجاد آر اين اي کي ڪڍڻ جي اجازت ڏئي ٿي، ان کان پوء آر اين اي جي تحقيق کي تيز ۽ آسان بڻائي ٿو.

بعد ۾، دادا هن پيٽنٽ کي Invitrogen کي وڪرو ڪيو، ۽ Invitrogen هن طريقي کي دنيا ۾ وڌايو ۽ وڏي پيماني تي استعمال ٿيل طريقو بڻجي ويو.

بعد ۾، Invitrogen Thermo پاران حاصل ڪيو ويو!

نمائندي پيداوار: Invitrogen جي TRIzol reagent

جڏهن ته، TRIzol ورن جو طريقو ڪيترن ئي ورن ۽ آر اين اي کي ڪڍڻ جي ضرورت آهي، ۽ استعمال ٿيل ريجنٽ زهر آهن ۽ هلائڻ لاء هڪ ڊگهو وقت وٺندو آهي.

تنهن ڪري، ٻئي نسل جي ڪالمن-اينزائم صاف ڪرڻ جو طريقو وجود ۾ آيو، سليڪا جيل جھلي کي مخصوص نيوڪلڪ ايسڊ جذب ڪرڻ واري مواد جي طور تي استعمال ڪندي نموني ۾ آر اين اي جي وصولي کي وڌائڻ لاء جڏهن ته ٻين نجاست کي هٽائي ڇڏيو.

ٻئين نسل جو طريقو مستحڪم ڪارڪردگي جي بنياد تي آپريشن کي آسان بڻائي ٿو، خطري جي عنصر کي گھٽائي ٿو، ۽ آر اين اي ڪڍڻ جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي ٿو.

نمائندي مصنوعات: QIAGEN RNeasy ۽ گھڻا گھربل مصنوعات

بهرحال، ٻئي ۽ ٻئي نسل جي طريقن جي ضرورت آهي ڊي اين اي آلودگي کي ختم ڪرڻ لاءِ DNase جي استعمال جي، جيڪا ايندڙ هيٺئين دڙي جي تجربن ۾ ڪجهه تڪليف آڻي ٿي.Residual DNase ريورس ٽرانسپشن جي ڪارڪردگي کي گھٽائي ڇڏيندو ۽ پھرين-اسٽرينڊ سي ڊي اين اي جي ٺاھ جوڙ کي گھٽائي ڇڏيندو، اھڙي طرح نتيجن جي درستگي کي متاثر ڪندي.

تنهن ڪري، ٽئين نسل ڪڍڻ جو طريقو ٻئي نسل جي بنياد تي بهتر ڪيو ويو آهي.تجربا ڪنهن به اينزائمز کي شامل ڪرڻ جي ضرورت ناهي، ۽ آر اين اي صرف ٻن ڪالمن سان آساني سان حاصل ڪري سگهجي ٿو.

ڪالم 1: ڊي اين اي صاف ڪرڻ لاءِ ڊي اين اي صاف ڪرڻ وارو ڪالم

ڪالم 2: آر اين اي صرف ڪالم خاص طور تي آر اين اي کي جذب ڪري ٿو ۽ بحال ڪري ٿو

اهڙو سادو آپريشن نه رڳو وقت بچائيندو آهي، پر هيٺئين پاسي جي تجربن جي آپريشن کي به آسان بڻائي ٿو!

نمائندي مصنوعات: QIAGEN RNeasy پلس ۽اڳوڻوآر اين اي صاف ڪرڻ واري سيريز جي مصنوعات

(RNeasy Plus)

(فارين جيپلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ)

خاموشيءَ سان ٻڌاءِ!Foregene جي RNA ڪٽ هڪ سپر آسان استعمال ڪرڻ وارو RNase Eraser پڻ پيش ڪري ٿو، جيڪو مڪمل طور تي 400μg RNase کي مضبوط سطح تي 1 منٽ ۾ ختم ڪري سگهي ٿو، انساني جسم ۾ ڪو به زهريلو مواد شامل ڪرڻ کان سواءِ!

تصوير1: آپريشنل عمل جي مقابلي جو چارٽ

Foregene جون شيون صرف ٻن گيتن ۾ آر اين اي ڪڍڻ کي مڪمل ڪري سگھن ٿيون، ٻين کي پنھنجي تجربي جي ترقي تي حسد نه ڪريو!

تصوير2:Eتجرباتي نتيجا موازنہ چارٽ

پهريون نسل (1: TRIzol)

ٻيو نسل (2: QIAGEN جو RNeasy)

ٽيون نسل (3: QIAGEN's RNeasy plus، 4: Foregene)

تصوير3: qPCR گراف (Amplification وکر گراف)

پھريون نسل (سائي جو مطلب آھي TRIzol -، ڳاڙھو مطلب TRIzol +)

ٻيو نسل (آسمان نيرو مطلب QIAGEN RNeasy-، ڳاڙھو مطلب QIAGEN RNeasy +)

ٽيون نسل (نيرو جو مطلب آهي QIAGEN RNeasy پلس، سائو مطلب Foregene)

(نوٽ: qPCR گراف “-” ظاهر ڪري ٿو ته DNase شامل نه ڪيو ويو آهي ۽ ڊي اين اي آلودگي ختم نه ڪئي وئي آهي. تنهن ڪري، CT وڌيڪ آهي ۽ نتيجو صحيح ناهي؛ "+" ظاهر ڪري ٿو ته DNase شامل ڪيو ويو آهي ۽ ڊي اين اي آلودگي کي هٽايو ويو آهي، نتيجو صحيح آهي)

هر ٽيڪنيڪل اپ گريڊ جو مطلب آهي ته تجربي جو آپريشن آسان ۽ وڌيڪ صارف دوست هدايت ۾ ترقي ڪري رهيو آهي.

Foregene جو مقصد وڌيڪ سائنسي محققن جي مدد ڪرڻ آهي تجرباتي وقت ۽ قيمت کي بچائڻ، اعليٰ معيار جا تجرباتي نتيجا حاصل ڪرڻ، ۽ گڏيل طور تي وڌيڪ قيمتي سائنسي تحقيقي ڪاميابيون پيدا ڪرڻ.