روايتي ريورس ٽرانسپيسس تيز گرمي پد کي برداشت نه ڪري سگھندا آهن (ايم ايم ايل وي سرگرمي لاء بهترين درجه حرارت 37-50 ° C آهي، ۽ AMV 42-60 ° C آهي).وڌيڪ پيچيده وائرل آر اين اي کي گھٽ درجه حرارت تي سي ڊي اين اي ۾ مؤثر طريقي سان نقل نه ٿو ڪري سگھجي، نتيجي ۾ تشخيص جي ڪارڪردگي ۾ گهٽتائي.روايتي RT-qPCR کي عام طور تي ٻن اهم انزايمز جي شموليت جي ضرورت هوندي آهي (ريورس ٽرانسڪرپٽ ۽ ڊي اين اي پوليمريس)، جنهن کي رد عمل سسٽم جي آپريشن کي آسان ڪرڻ ۽ قيمت گھٽائڻ ناممڪن بڻائيندو آهي.هتي اسان متعارف ڪنداسين ٻه تيز-درجه حرارت-مزاحمتي ريورس ٽرانسپيسس، TtH ۽ RevTaq.انهن ٻن انزايمن ۾ ڊي اين اي پوليميرس جو ڪم به هوندو آهي، ان ڪري انهن کي بائيفڪشنل اينزائمز چئبو آهي.

ٽي ٽي ايڇ ڊي اين اي پوليمريز

توهان TtH بابت ٻڌو هوندو، جيڪو Thermophilic بيڪٽيريا Thermus Thermophilus HB8 مان نڪتل آهي.divalent cations جي موجودگي ۾ جيئن ته Mg2+، ان ۾ ڊي اين اي پوليمريز سرگرمي آهي.اهو وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويندو آهي PCR رد عمل جهڙوڪ Taq enzyme، پر ان ۾ Taq enzyme کان وڌيڪ گرمي مزاحمت آهي، تنهنڪري اهو پڻ PCR تي اعلي GC مواد ٽيمپليٽس سان بهتر اثر رکي ٿو.

· هن اينزيم ۾ بنيادي طور تي 3′→5′ exonuclease سرگرمي ۽ 5′→3′ exonuclease سرگرمي ناهي، تنهنڪري ان کي ڊيڊي آڪسي جي ترتيب لاءِ پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو.

· هن اينزيم ۾ RTase سرگرمي آهي.Mn2+ جي موجودگي ۾، RTase سرگرمي کي وڌايو ويندو.هن خصوصيت کي استعمال ڪندي، اهو ساڳيو ٽيوب ۾ ريورس ٽرانسپشن ردعمل ۽ PCR ردعمل انجام ڏيڻ لاء استعمال ڪري سگهجي ٿو، اهو آهي، هڪ قدم RT-PCR.بهرحال، Mn2+ جي موجودگي ۾، RT-PCR جي درستگي وڌيڪ نه آهي.RT سرگرمي جو rnaase H سرگرمي سان ڪو به تعلق ناهي.

· Tth-DNA پوليمريز جي وڌندڙ سرگرمي (pH9، optimum +55℃～+70℃، وڌ ۾ وڌ +95℃) RNA جي ثانوي ڍانچي جي ڪري پيدا ٿيندڙ مسئلن کي ختم ڪري ٿي.نتيجي ۾ پيدا ٿيندڙ سي ڊي اين اي کي پي سي آر پاران Mg2+ آئنز جي موجودگيءَ ۾ ساڳي اينزائم سان وڌائي سگھجي ٿو.

· Tth-DNA پوليمريز جي صلاحيت تيز گرمي پد تي ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ ڊي اين اي ايمپليفڪيشن کي انجام ڏيڻ جي صلاحيت هن اينزائم کي مقداري RT-PCR، ڪلوننگ، ۽ سيلولر ۽ وائرل RNA جي جين اظهار جي تجزيي لاءِ مفيد بڻائي ٿي.
· Tth-DNA پوليمريز RT-PCR لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي RNA کي 1kb تائين وڌائڻ لاءِ.

خاصيتون ۽ فائدا

Tth ڊي اين اي پوليميرس:

• RT-PCR جي رد عمل ۾ گهٽ ۾ گهٽ 1000 بي پي، بهتر ڪيل پوليميرس چين ريڪشن (PCR) جي پيداوار جي سائيز کي يقيني بڻايو وڃي.

تبديل ٿيل deoxyribonucleoside triphosphate کي ذيلي ذخيري طور قبول ڪريو

• RNase H سرگرمي سان لاڳاپيل ناهي

• مسئلن کي ختم ڪرڻ لاء اعلي حرارتي استحڪام آهي، عام طور تي آر اين اي ۾ موجود اعلي ثانوي ساخت سان لاڳاپيل

RevTaq RT-PCR ڊي اين اي پوليمريز

هڪ گرمي-مزاحمتي ڊي اين اي پوليمريز ريورس ٽرانسڪرپٽ سرگرمي سان

RevTaq-RT-PCR-DNA پوليمريز هڪ انجنيئر، انتهائي گرميءَ جي مزاحمتي، ڊبل فنڪشنل اينزائم آهي جنهن سان ريورس ٽرانسڪرپٽيز ۽ ڊي اين اي پوليمريز سرگرميون حاصل ڪيون ويون آهن جيڪي هدايت ۽ مصنوعي ارتقا ذريعي حاصل ڪيون ويون آهن.

· RevTaq RT-PCR DNA پوليمريز جي اڌ زندگي 95°C تي 40 منٽ کان وڌيڪ آهي.

· RevTaq RT-PCR DNA پوليمريز تيز گرمي پد جي ريورس ٽرانسڪرپشن کي سڌو RNA ٽيمپليٽ مان اجازت ڏئي ٿو، ۽ وڌيڪ سي ڊي اين اي ٽيمپليٽ ٺاهڻ لاءِ ريورس ٽرانسڪرپشن واري مرحلي کي ڪيترائي ڀيرا ورجائي سگھجي ٿو.

· RevTaq RT-PCR DNA پوليمريز ”صفر-اسٽيپ“ RT-PCR (ڪو به isothermal ريورس ٽرانسپشن وارو قدم ناهي) جي اجازت ڏئي ٿو، ڇاڪاڻ ته سائيڪلڪ PCR ايڪسٽينشن واري مرحلي ۾، ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ ڊي اين اي ايمپليفڪيشن هڪ ئي وقت ٿئي ٿو.اهو پڻ تيز گرمي پد تي ريورس ٽرانسپشن رد عمل کي فروغ ڏئي ٿو، ان ڪري اعلي درجه حرارت تي آر اين اي ۾ مضبوط ثانوي ڍانچي کي پگھلڻ ۾ پيش ايندڙ مسئلن کي گھٽائي ٿو.

· aptamer-based hot-start formula جي ڪري، RevTaq RT-PCR DNA پوليميرس بهتر نتيجا ڏيندو جڏهن انيلنگ ۽ ايڪسٽينشن جو گرمي پد 57°C کان وڌيڪ هوندو.

· جيئن ته اينزيم گرميءَ جي مزاحمتي آهي، ان ڪري سفارش ڪئي وئي آهي ته پرائمر ۽ پروب کي تمام گهڻي پگھلڻ واري نقطي (>60°C) سان ڊزائين ڪيو وڃي.

· اها سفارش ڪئي وئي آهي ته اينيلنگ / ايڪسٽينشن قدم جي گرمي پد کي بهتر ڪرڻ لاءِ گرمي پد جي گريڊئينٽ ذريعي رد عمل جي سيٽ اپ جي عمل دوران.

· جيترو وڌيڪ گرمي پد، اوتري وڌيڪ PCR جي خاصيت.ريورس ٽرانسڪرپشن چڪر عام طور تي پي سي آر چڪر کان وڌيڪ گرمي پد تي ڪيو ويندو آهي، ڇاڪاڻ ته ڊي اين اي پرائمر: آر اين اي ٽيمپليٽ هائبرڊائيزيشن عام طور تي ڊي اين اي پرائمر: سي ڊي اين اي ٽيمپليٽ ڊپلڪس کان وڌيڪ پگھلڻ واري نقطي آهي.

· RevTaq RT-PCR DNA پوليميرس جينياتي طور تي انجنيئر ۽ بهتر ڪيو ويو آهي، ۽ ايمپليڪون سائيز 60-300 bp جي وچ ۾ آهي.

RevTaq RT-PCR ڊي اين اي پوليمريز جي سڃاڻپ جي حد تائين پهچي ٿي 4 ڪاپيون/

اصلاحي رد عمل جو نظام (اعلي پگھلڻ واري پوائنٽ پرائمر جو قيام) شڪل ۾ ڏيکاريو ويو آهي.RevTaq RT-PCR DNA پوليمريز تي هلندڙ RT-PCR TaqPath 1-Step RT-qPCR ماسٽر ميڪس کان بهتر حساسيت ڏيکاري ٿو، ۽ لوئر ڊڪشنري نموني ڊيليشن گريڊينٽ.

وڌيڪ فائدا:

تڪڙي شروعات فنڪشن → شروعاتي حرارتي رد عمل واري مرحلي کي ڇڏي سگھجي ٿو.

Hot-Start aptamer Formula → 100% enzyme جي سرگرمي کي فوري طور تي مهيا ڪريو ۽ گھٽ درجه حرارت (<57°C) تي غير مخصوص وڌائڻ کي روڪيو.

Cleavage function → RNA extracting step کي ختم ڪيو ويو آهي، ڇاڪاڻ ته RevTaq RT-PCR DNA پوليمريز به خام رد عمل جي نمونن کي پروسيس ڪري سگهي ٿو.اهو فوري طور تي گرم RT-PCR چڪر ۾ eukaryotes، بيڪٽيريا ۽ وائرس جي سيل جھلي کي تباهه ڪري سگهي ٿو.

IVD خام مال جي سطح → اعلي معيار جي معيار ۽ انتهائي مقابلي واري قيمتون