تازو، مون کي ڪجهه عجيب دريافت ڪيو!هن جي چوڌاري ڪيترائي ترقي يافته تجربا پروفيسر به نه ڄاڻندا آهن ڪجهه بنيادي تجرباتي علم پوائنٽس.

مثال طور، ڇا توھان ھيٺ ڏنل سوالن جا جواب ڏئي سگھو ٿا؟

ڇا OD260 ۽ A260 جي وچ ۾ ڪو فرق آهي؟هر هڪ جو مطلب ڇا آهي؟
OD نظريي جي کثافت (نظري کثافت) جو مخفف آهي، A آهي absorbance (جذب) جو مخفف، ٻه مفهوم اصل ۾ ساڳيا آهن، ”نظري کثافت“ ”جذب“ آهي، پر ”نظري کثافت“ اڪثر قومي معيارن جي مطابق آهي ۽ وڌيڪ معياري آهي.

عام طور تي اسان نيوڪليڪ ايسڊ ڪنسنٽريشن کي ڳڻڻ لاءِ OD جي قيمت 260nm تي ماپون ٿا، پوءِ 1OD ڇا جي نمائندگي ڪري ٿو؟
نيوڪليڪ ايسڊ 260nm جي موج جي ڊيگهه تي وڌ ۾ وڌ جذب جي چوٽي آهي، جنهن ۾ ڊي اين اي ۽ آر اين اي ٻنهي تي مشتمل آهي، گڏوگڏ نيوڪليڪ ايسڊ جا ٽڪرا ٽڪرا (هي اهم نقطو آهي).
OD قدر 260 nm جي موج جي ڊيگهه تي ماپي وئي OD260 طور تي رڪارڊ ڪيو ويو.جيڪڏهن نمونو خالص آهي، OD260 قدر nucleic acid نموني جي ڪنسنٽريشن جو حساب ڪري سگھي ٿو.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (ڊبل اسٽرينڊ ڊي اين اي)
= 37 μg/ml ssDNA (سنگل اسٽرينڊ ڊي اين اي)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
ڇا RT-PCR، Realtime-PCR ۽ QPCR جي وچ ۾ ڪو تعلق ۽ فرق آهي؟
RT-PCR Reverse Transscription PCR لاءِ مختصر آهي
حقيقي وقت پي سي آر = qPCR، مختصر مقدار لاءِ حقيقي وقت پي سي آر
جيتوڻيڪ ريئل ٽائيم پي سي آر (ريئل ٽائيم فلورسنٽ مقداري پي سي آر) ۽ ريورس ٽرانسڪرپشن پي سي آر (ريورس ٽرانسڪرپشن پي سي آر) ٻنهي کي RT-PCR طور مختصر ڪيو وڃي ٿو.پر بين الاقوامي ڪنوينشن آهي: RT-PCR خاص طور تي ريورس ٽرانسڪرپشن PCR ڏانهن اشارو ڪري ٿو.

حياتيات ۾ DNA/RNA جي ڊيگهه کي بيان ڪرڻ لاءِ عام طور تي استعمال ٿيندڙ nt، bp ۽ kb ڪهڙا آهن؟
nt = nucleotide
bp = بنيادي جوڙو بنيادي جوڙو
kb = ڪلو بيس

يقينا، توهان چوندا سين ته ڪيترائي ماڻهو انهن ننڍڙن تفصيلن جي پرواهه نٿا ڪن!هرڪو اهو ڪندو آهي، ۽ ڪو به توهان کان نه پڇندو ته اهو ڇا آهي.توهان کي خبر آهي ته اهو غير ضروري آهي، صحيح؟

نه، نه، نه، اهو ڄاڻڻ تمام ضروري آهي!جنهن جي ڪري؟
ڇو ته توهان هڪ مضمون پوسٽ ڪرڻ چاهيو ٿا!ڀاءُ!ڇا توهان گريجوئيشن جو مقصد ڪري رهيا آهيو يا سائنسي تحقيقي ڪاميابين جي تعاقب ڪري رهيا آهيو، توهان کي ڳالهائڻ لاءِ مضمونن تي ڀروسو ڪرڻ گهرجي!

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ تمام سادو ۽ بنيادي تجربو هجڻ گهرجي.نيوڪليڪ اسيد ڪڍڻ جو معيار سڌو سنئون بعد ۾ تجربن جي نتيجن کي طئي ڪري ٿو.

جيتوڻيڪ مون ان کي ڪيترائي ڀيرا چيو آهي، اڃا تائين ڪيترائي دوست آهن جن کي پرواه ناهي.هن ڀيري مون آرٽيڪل مان ٻاهر وڃڻ جو فيصلو ڪيو!

مقداري ريئل ٽائيم پي سي آر تجربن جي اشاعت لاءِ گھٽ ۾ گھٽ معلومات، MIQE طور حوالو ڏنو ويو آھيfluorescence quantitative تجرباتي ھدايتن جو ھڪڙو سيٽ آھي جيڪو بين الاقوامي طور تي شروع ڪيو ويو آھي، جيڪو گھٽ ۾ گھٽ معيار پيش ڪري ٿو تجرباتي معلومات لاءِ ضروري آھي فلوروسينس مقداري PCR تجربن جي تشخيص ۽ آرٽيڪل شايع ڪرڻ لاءِ.تجرباتي حالتن ۽ تجزياتي طريقن جي ذريعي مهيا ڪيل تجربا ڪندڙ طرفان، نظرثاني ڪندڙ محقق جي تجرباتي اسڪيم جي صحيحيت جو بهتر اندازو لڳائي سگهن ٿا.

اهو ڏسي سگھجي ٿو ته نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي سيڪشن ۾، هيٺيان ڳولڻ واريون شيون تجويز ڪيون ويون آهن،

"E" اشارو ڪري ٿو معلومات جيڪا مهيا ڪئي وڃي ۽ "D" اشارو ڏئي ٿي معلومات جيڪا مهيا ڪئي وڃي جيڪڏهن ضروري هجي.

فارم تمام پيچيده آهي، حقيقت ۾، مان اهو چوڻ چاهيان ٿو ته هر ڪنهن کان شروع ڪرڻ جي ضرورت آهي

پاڪائي (ڊي)، پيداوار (ڊي)، سالميت (اي) ۽ استحڪام (اي) انهن چئن حصن ۾ نيوڪليڪ اسيد جو جائزو وٺڻ لاء.

تجرباتي عادتن جي مطابق، پهرين صفائي ۽ توجه جي تشخيص جي طريقن بابت ڳالهايو.

OD ماپ تجربا ڪندڙن لاءِ پسنديده ۽ آسان ڳولڻ جو طريقو آهي.اصول جي طور تي، مان هتي تفصيل ۾ نه ويندس.ڪيتريون ئي ليبارٽريون ھاڻي الٽرا مائيڪرو اسپيڪٽرفوٽوميٽر استعمال ڪن ٿيون سڌو سنئون مقداري طور تي نيوڪليڪ ايسڊ جي نمونن جو تجزيو ڪرڻ لاءِ.جذبي جي قيمت ڏيکاريندي، پروگرام سڌو سنئون ڪنسنٽريشن ويليو (نيوڪلڪ ايسڊ، پروٽين ۽ فلورسنٽ رنگ) ۽ لاڳاپيل تناسب ڏئي ٿو.جيئن ته OD قدر جي تجزيي لاءِ، هن تصوير کي محفوظ ڪريو ۽ توهان ٺيڪ ٿي ويندا.

يونيورسل OD قدر حل لسٽ

تنهن هوندي به، اتي چند caveats جيڪي اوھان لاء الڳ الڳ آڻڻ جي ضرورت آهي.

(آخرڪار، مون کي خبر آهي ته توهان کي ضرور هجڻ گهرجي جيڪي بچائيندا ۽ انتظار ڪندا جيستائين توهان کي انهن جي ضرورت هجي!)

نوٽ 1 سامان

OD قدر متاثر ٿيندو مختلف سامان کان.جيستائين OD260 هڪ خاص حد اندر آهي، تيستائين OD230 ۽ OD280 جا قدر معنيٰ وارا آهن.مثال طور، عام Eppendorf D30 جي جذبي جي حد 260nm تي 0~ 3A آهي، ۽ Thermo جو NanoDrop One 260nm تي آهي.جذب جي حد 0.5 ~ 62.5A.

نوٽ 2Dilution reagent

OD قدر متاثر ٿي سگھي ٿو مختلف ريگينٽس جي گھٽتائي سان.مثال طور، OD260/280 پي ايڇ ۾ صاف ٿيل آر اين اي جي پڙهائي7.5 10 ايم ايم ٽريسبفر 1.9-2.1 جي وچ ۾ آهي، جڏهن تهغير جانبدار آبي حلتناسب گهٽ ٿيندو، شايد صرف 1.8-2.0، پر ان جو مطلب اهو ناهي ته آر اين اي جي معيار ۾ فرق اچي ٿو.

نوٽ 3بقايا مادو

بقايا مادن جو وجود نيوڪليڪ ايسڊ جي ڪنسنٽريشن جي ماپ جي درستگي کي متاثر ڪندو، ان ڪري ضروري آهي ته جيترو ممڪن ٿي سگهي نيوڪليڪ ايسڊ جي نمونن ۾ پروٽين، فينول، پولي سيڪريڊ ۽ پوليفينول جي باقيات کان پاسو ڪيو وڃي.

بهرحال، حقيقت ۾، نامياتي ريجنٽ سان گڏ ڪڍڻ هڪ پراڻو طريقو آهي.تجارتي ڪتن ۾، اضافي اثر حاصل ڪري سگهجي ٿو سليڪا جي بنياد تي جذب ڪرڻ واري ڪالمن ذريعي، سينٽرفيوگريشن سان گڏ، زهر ۽ نقصانڪار نامياتي ريجنٽ کان بچڻ، جن کي هٽائڻ ڏکيو آهي، وغيره. مسئلو، جهڙوڪ.Foregene جي nucleic acid extraction kit، DNase/RNase ۽ زهريلي نامياتي ريجينٽ استعمال نه ڪندي سڄي آپريشن ۾، تيز ۽ محفوظ, ۽ جياثر آهيسٺو(حادثي طور چيو ته اهو گنجي هو، پر مون کي خبر آهي ته توهان ڄاڻڻ چاهيو ٿا).

مثال 1: جينوميڪ ڊي اين اي ڪڍڻ جي پيداوار ۽ پاڪائي

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) مٽيءَ جا نمونا مختلف ذريعن مان حاصل ڪري ٿو، ۽ حاصل ڪيل جينومڪ ڊي اين اي جي مقدار ۽ پاڪائي هيٺين جدول ۾ ڏيکاريل آهي:
مثال 2: ٽشو آر اين اي ڪڍڻ جي پيداوار ۽ پاڪائي

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) مختلف ٽشوز جي نمونن تي عمل ڪيو، ۽ حاصل ڪيل RNA جي مقدار ۽ پاڪائي ھيٺ ڏنل جدول ۾ ڏيکاريل آھي (مائوس ٽشو لاءِ):
بهرحال، اهو نه سوچيو ته توهان OD قدر سان ڪيو آهي.ڇا توھان وٽ اھم نقطن جو خيال آھي جيڪي مون توھان لاءِ اڳي ۾ ٺاھيا آھن؟

نوٽيس

ٽڪرا ٿيل nucleic امل molecules به absorbance ۾ حساب ڪيو ويندو.فرض ڪيو ته توهان وٽ آر اين اي ۾ جينومڪ ڊي اين اي جي باقيات آهن، توهان جي او ڊي جي قيمت تمام گهڻي نظر ايندي، پر آر اين اي جي اصل ڪنسنٽريشن جو اندازو نه ٿو لڳائي سگهجي.ڇا توهان جي آر اين اي آهي اهو واضح ناهي ته ڇا اتي تباهي آهي، تنهنڪري اسان کي اڃا به وڌيڪ صحيح فيصلو ڏيڻ لاء هڪ جامع تشخيصي طريقي جي ضرورت آهي، اهو آهي، MIQE ۾ ذڪر ڪيل نيوڪليڪ ايسڊ سالميت جي تشخيص.