منهنجي ذهن ۾ ڳولڻ واري ٽيڪنالاجي جي تاريخ ۾ ڪيترائي انقلابي ايجادون آهن اميونوليبلنگ ٽيڪنالاجي جي بنياد تي اينٽيجن اينٽي باڊي مخصوص بائنڊنگ، پي سي آر ٽيڪنالاجي ۽ تسلسل ٽيڪنالاجي.اڄ اسان PCR ٽيڪنالاجي بابت ڳالهائينداسين.PCR ٽيڪنالاجي جي ارتقاء جي مطابق، ماڻهو عادت طور تي PCR ٽيڪنالاجي کي ٽن نسلن ۾ ورهائيندا آهن: عام پي سي آر ٽيڪنالاجي، حقيقي وقت فلوروسنٽ مقداري پي سي آر ٽيڪنالاجي ۽ ڊجيٽل پي سي آر ٽيڪنالاجي.
Common PCR ٽيڪنڪ
ڪيري موليس (1944.12.28-2019.8.7)
ڪيري موليس 1983ع ۾ پوليميرس چين ري ايڪشن (پوليميرس چين ريڪشن، پي سي آر) ايجاد ڪيو. چيو وڃي ٿو ته جڏهن هو پنهنجي گرل فرينڊ کي ڊرائيو ڪري رهيو هو ته اوچتو هن کي پي سي آر جي اصول (ڊرائيونگ جي فائدن تي) جي باري ۾ حوصلا افزائي ۽ خيال آيو.ڪيري موليس کي 1993 ۾ ڪيمسٽري ۾ نوبل انعام ڏنو ويو. نيو يارڪ ٽائمز تبصرو ڪيو: "بلڪل اصل ۽ اهم، تقريبن بايولوجي کي پري پي سي آر ۽ پوسٽ پي سي آر جي دور ۾ ورهائي ٿو.
پي سي آر جو اصول: ڊي اين اي پوليمريز جي ڪيٽيليسس جي تحت، مدر اسٽرينڊ ڊي اين اي کي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪيو ويندو آهي، ۽ مخصوص پرائمر کي ايڪسٽينشن جي شروعاتي نقطي طور استعمال ڪيو ويندو آهي، ۽ ڌيئر اسٽرينڊ ڊي اين اي مڪمل طور تي ماء اسٽرينڊ ٽيمپليٽ جي ڊي اين اي کي ڊينيچريشن، اينيلنگ، ايڪسٽينشن ۽ ٻين مرحلن ذريعي ويٽرو ۾ نقل ڪيو ويندو آهي.اهو ويٽرو ۾ هڪ ڊي اين اي سنٿيسس ايمپليفڪيشن ٽيڪنالاجي آهي، جيڪا تيزيءَ سان ۽ خاص طور تي ڪنهن به ٽارگيٽ ڊي اين اي کي ويٽرو ۾ وڌائي سگھي ٿي.
عام PCR جا فائدا
1.شاندار طريقو، مڪمل بين الاقوامي ۽ ملڪي معيار
2.اوزار reagents جي گھٽ قيمت
3.PCR پروڊڪٽس وصول ڪري سگھجن ٿيون ٻين ماليڪيولر حياتيات جي تجربن لاءِ
تجويز ڪيل فاريني پي سي آر مشين: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
لاڳاپيل مصنوعات: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
عام PCR جا نقصان
1.آلودگي ڪرڻ آسان
2.مشڪل آپريشن
3.صرف معيار جو تجزيو
4.وچولي حساسيت
5.اتي غير مخصوص واڌارو آهي، ۽ جڏهن غير مخصوص بينڊ ساڳئي سائيز جي حدف بينڊ وانگر آهي، ان کي فرق نه ٿو ڪري سگهجي.
Capillary electrophoresis جي بنياد تي PCR
عام پي سي آر جي گهٽتائي جي جواب ۾، ڪجهه ٺاهيندڙن کي ڪيپيلري الیکٹروفورسس جي اصول جي بنياد تي اوزار متعارف ڪرايو آهي.اليڪٽرروفورسس قدم PCR امپليفڪيشن کان پوءِ ڪيپيلري ۾ مڪمل ٿي ويو آهي.حساسيت وڌيڪ آهي، ۽ ڪيترن ئي بنيادن جي فرق کي فرق ڪري سگهجي ٿو ۽ ايمپليفڪيشن MAERKER جي حساب سان ڪري سگهجي ٿو.پيداوار جو مواد.نقصان اهو آهي ته PCR پراڊڪٽ کي اڃا تائين کولڻ ۽ اوزار ۾ رکڻ جي ضرورت آهي، ۽ اڃا تائين آلودگي جو وڏو خطرو آهي.
CاپلريElectrophoresis
2. حقيقي وقت فلورسنٽ مقداري پي سي آر (مقدار واري حقيقي وقت پي سي آر، qPCR) ٽيڪنالاجيفلورسنٽ مقداري پي سي آر، جنهن کي ريئل ٽائيم پي سي آر پڻ سڏيو ويندو آهي، هڪ نئين نيوڪلڪ ايسڊ مقداري ٽيڪنالاجي آهي جيڪا PE (Perkin Elmer) پاران 1995 ۾ تيار ڪئي وئي آهي. فلورسنٽ مقداري پي سي آر جي ترقي جي تاريخ جنات جهڙوڪ ABI، Roche، ۽ Bio-R جي روح کي متحرڪ ڪرڻ واري جدوجهد جي تاريخ آهي.جيڪڏھن توھان چاھيو ٿا، توھان ان کي چيڪ ڪري سگھو ٿا.هي ٽيڪنڪ هن وقت سڀ کان وڌيڪ بالغ ۽ وڏي پيماني تي استعمال ٿيندڙ نيم مقداري پي سي آر ٽيڪنڪ آهي.
تجويز ڪيل qPCR مشين: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
فلورسنٽ رنگ جو طريقو (SYBR گرين I):SYBR گرين I مقداري پي سي آر لاءِ سڀ کان وڌيڪ استعمال ٿيل ڊي اين اي بائنڊنگ رنگ آهي، جيڪو غير خاص طور تي ڊبل اسٽرينڊ ڊي اين اي سان جڙيل آهي.آزاد رياست ۾، SYBR گرين ڪمزور فلورسنس کي خارج ڪري ٿو، پر هڪ ڀيرو ٻيڻو لڳل ڊي اين اي سان جڙيل آهي، ان جي فلوروسينس 1000-گنا وڌي ٿي.تنهن ڪري، رد عمل جي ذريعي خارج ٿيل ڪل فلورسنٽ سگنل موجود ڊبل اسٽينڊ ڊي اين اي جي مقدار سان متناسب آهي ۽ وڌندي وڌندي پيداوار جي واڌ سان.ڇاڪاڻ ته رنگ غير خاص طور تي ڊبل-اسٽرينڊ ڊي اين اي سان ڳنڍيل آهي، غلط مثبت نتيجا پيدا ٿي سگهي ٿي.
لاڳاپيل مصنوعات: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
فلورسنٽ تحقيق جو طريقو (تقمان ٽيڪنالاجي): دورانPCR amplification، هڪ مخصوص فلورسنٽ پروب شامل ڪيو ويو آهي ساڳئي وقت پرائمر جي هڪ جوڙي جي طور تي.تحقيق هڪ لڪير oligonucleotide آهي، جنهن ۾ هڪ فلورسنٽ رپورٽر گروپ ۽ هڪ فلورسنٽ quencher گروپ ترتيب سان ٻنهي سرن تي ليبل ٿيل آهي.جڏهن جاچ برقرار آهي، رپورٽر گروپ پاران خارج ٿيل فلورسنٽ سگنل جذب ڪيو ويندو آهي quencher گروپ، ۽ معلوم ڪرڻ ۾ ڪو به فلورسنٽ سگنل ناهي؛پي سي آر ايمپليفڪيشن دوران (اسٽٽينشن اسٽيج ۾)، ٽاڪ اينزائم جي 5'-3' ڊيسر سرگرمي جاچ کي هضم ۽ خراب ڪندي، ته جيئن رپورٽر فلورسنٽ گروپ ۽ ڪوئنچر فلورسنٽ گروپ کي الڳ ڪيو وڃي، ته جيئن فلورسنٽ مانيٽرنگ سسٽم فلورسنٽ سگنل وصول ڪري سگهي، يعني، هر وقت هڪ حقيقي ايم اين اي فلو آهي. فلورسنٽ سگنلن جي جمع ۽ PCR مصنوعات جي ٺهڻ جي مڪمل هم وقت سازي کي izes.تاقمان تحقيق جو طريقو سڀ کان عام طور تي استعمال ٿيل تشخيص جو طريقو آهي جيڪو ڪلينڪ جي چڪاس ۾.
لاڳاپيل مصنوعات: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
qPCR جا فائدا
1.طريقو پختو آهي ۽ سپورٽ سامان ۽ ريجنٽ مڪمل آهن
2.reagents جي وچولي قيمت
3.استعمال ڪرڻ آسان
4.اعلي تشخيص حساسيت ۽ خاصيت
qPCR جا نقصان
ٽارگيٽ جين جي ميوٽيشن کي گم ٿيل ڳولڻ جي ڪري ٿي.
گھٽ ڪنسنٽريشن ٽيمپليٽ جو نتيجو معلوم نه ٿي سگھي.
مقدار جي چڪاس لاءِ معياري وکر استعمال ڪرڻ وقت وڏي غلطي آھي.
3. ڊجيٽل پي سي آر (ڊجيٽل پي سي آر، ڊي پي سي آر) ٽيڪنالاجي
ڊجيٽل پي سي آر نيوڪليڪ ايسڊ ماليڪيولز جي مطلق مقدار جي لاءِ هڪ ٽيڪنڪ آهي.qPCR جي مقابلي ۾، ڊجيٽل پي سي آر سڌو سنئون ڊي اين اي / آر اين اي ماليڪيولن جو تعداد پڙهي سگهي ٿو، جيڪو شروعاتي نموني ۾ نيوڪليڪ ايسڊ ماليڪيولز جو پورو مقدار آهي.1999 ۾، Bert Vogelstein ۽ Kenneth W. Kin-zler رسمي طور تي dPCR جو تصور پيش ڪيو.
2006 ۾، Fluidigm هڪ تجارتي چپ تي ٻڌل ڊي پي سي آر اوزار پيدا ڪرڻ وارو پهريون هو.2009 ۾، لائف ٽيڪنالاجيز شروع ڪيو OpenArray ۽ QuantStudio 12K Flex dPCR سسٽم.2013 ۾، لائف ٽيڪنالاجيز QuantStudio 3DdPCR سسٽم شروع ڪيو، جيڪو 20,000 انفرادي سيلن ۾ نمونن کي ورهائڻ لاءِ اعلي کثافت نانوسڪيل مائڪرو فلائيڊڪ چپ ٽيڪنالاجي استعمال ڪري ٿو.ردعمل ۾ چڱي طرح.
2011 ۾، Bio-Rad شروع ڪيو بوندن تي ٻڌل QX100 dPCR اوزار، جيڪو پاڻي-ان-آئل ٽيڪنالاجي استعمال ڪري ٿو ته جيئن نموني کي 20,000 قطرن-واٽر-ان-آئل تائين ورهايو وڃي، ۽ بوندن جو تجزيو ڪرڻ لاءِ هڪ قطرو تجزيه ڪندڙ استعمال ڪيو وڃي.2012 ۾، RainDance لانچ ڪيو RainDrop dPCR اوزار، جيڪو ھاء پريشر گيس ذريعي ھلايو ويو، ھر معياري رد عمل واري نظام کي 1 ملين کان 10 ملين پکوليٽر-سطح مائڪرو بوندن تي مشتمل ردعمل ايمولشن ۾ ورهائڻ لاءِ.
هينئر تائين، ڊجيٽل پي سي آر ٻه وڏا گروهه ٺاهيا آهن، چپ جو قسم ۽ قطرو قسم.ڪابه ڳالهه نه آهي ڪهڙي قسم جي ڊجيٽل پي سي آر، ان جا بنيادي اصول محدود آهن گھٽائڻ، آخري پوائنٽ پي سي آر ۽ پوسن جي تقسيم.معياري پي سي آر رد عمل وارو نظام جنهن ۾ نيوڪليڪ ايسڊ ٽيمپليٽس شامل آهن هڪجهڙائي سان هزارين پي سي آر رد عملن ۾ ورهايل آهن، جيڪي چپس يا مائڪروڊروپليٽس ۾ ورهايل آهن، انهي ڪري هر ردعمل ۾ ممڪن حد تائين هڪ ٽيمپليٽ ماليڪيول شامل آهي، ۽ هڪ واحد ماليڪيول ٽيمپليٽ پي سي آر رد عمل ڪيو ويندو آهي.fluorescence پڙهڻ سان، سگنل جي موجودگي يا غير موجودگي کي ڳڻيو ويندو آهي، ۽ مطلق مقدار کي شمارياتي Poisson تقسيم جي حساب سان ڪيو ويندو آهي.
هيٺ ڏنل خاصيتون آهن ڪيترن ئي ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارمن جون جيڪي مون استعمال ڪيون آهن:
1. Bio-Rad QX200 droplet ڊجيٽل PCR بايو-ريڊQX200 هڪ تمام بهترين ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم آهي، بنيادي پتو لڳائڻ وارو عمل: 20,000 نمونا ڊراپليٽ جنريٽر ذريعي ٺاهيا ويندا آهن واٽر-ان-آئل مائڪرو بوندن کي هڪ عام پي سي آر مشين تي وڌايو ويندو آهي، ۽ آخرڪار هر مائڪرو بوند جي فلورسنس سگنل کي مائڪرو ڊراپليٽ ريڊر ذريعي پڙهيو ويندو آهي.آپريشن وڌيڪ پيچيده آهي، ۽ آلودگي جو خطرو وچولي آهي.
Xinyi TD1 مائڪرو بوند ڊجيٽل پي سي آرXinyi TD1 هڪ گھريلو ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم آهي، بنيادي سڃاڻپ جو عمل: 30,000-50,000 واٽر-ان-آيل بوندن کي هڪ قطرو جنريٽر ذريعي ٺاهيو، هڪ عام PCR اوزار تي وڌايو، ۽ آخر ۾ پاس ڪيو ويو قطرو پڙهندڙ هر بوند جي فلورسنٽ سگنل کي پڙهي ٿو.ٻئي بوندن جي پيداوار ۽ پڙهڻ هن پليٽ فارم ۾ وقف ٿيل چپ ۾ ڪيا ويا آهن آلودگي جي گهٽ خطري سان.
اسٽيلا نائڪا مائڪرو بوند چپ ڊجيٽل پي سي آرSTILLA Naica ھڪڙو نسبتا نئون ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم آھي.بنيادي ڳولڻ وارو عمل آهي: چپ ۾ رد عمل جو حل شامل ڪريو، چپ کي مائڪرو بوندن جي نسل ۽ ايمپليفڪيشن سسٽم ۾ وجھو، ۽ 30,000 مائڪرو بوند پيدا ڪريو.چپ تي پکڙيل آهي، ۽ پي سي آر امپليڪشن چپ تي مڪمل ٿي وئي آهي.پوءِ امپيل ٿيل چپ کي مائڪرو بوندن جي پڙهڻ واري تجزياتي نظام ڏانهن منتقل ڪيو ويندو آهي، ۽ فلورسنٽ سگنل تصويرون وٺڻ سان پڙهيو ويندو آهي.جيئن ته سڄو عمل بند چپ ۾ ٿئي ٿو، آلودگي جو خطرو گهٽ آهي.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D چپ ڊجيٽل پي سي آر
ThermoFisher QuantStudio 3D هڪ ٻيو کلاسک چپ تي ٻڌل ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم آهي.ان جو بنيادي پتو لڳائڻ وارو عمل آھي: رد عمل جي حل کي اسپريڊر ۾ شامل ڪريو، ۽ 20,000 مائيڪرو ويلز سان اسپريڊر جي ذريعي ردعمل جي حل کي چپ تي برابر پھچايو.، چپ کي پي سي آر مشين تي وڌو ۽ آخر ۾ چپ کي ريڊر ۾ وجھو ۽ فلورسنٽ سگنل پڙهڻ لاءِ فوٽو ڪڍو.آپريشن نسبتا پيچيده آهي، ۽ سڄو عمل هڪ بند چپ ۾ ڪيو ويندو آهي، ۽ آلودگي جو خطرو گهٽ آهي.
5. JN MEDSYS ڪلارٽي چپ ڊجيٽل پي سي آر
JN MEDSYS وضاحت هڪ نسبتا نئين چپ قسم جي ڊجيٽل PCR پليٽ فارم آهي.ان جو بنيادي پتو لڳائڻ وارو عمل آھي: رد عمل جي حل کي ايپليڪٽر ۾ شامل ڪريو، ۽ 10,000 پي سي آر ٽيوب تي لاڳو ڪندڙ جي ذريعي پي سي آر ٽيوب ۾ لڳل 10,000 پي سي آر ٽيوب تي رد عمل جي حل کي پکڙيو.مائڪروپورس چپ تي، رد عمل جو حل ڪيپيلري ايڪشن ذريعي چپ ۾ داخل ٿئي ٿو، ۽ چپ سان گڏ پي سي آر ٽيوب کي پي سي آر مشين تي ايمپليفڪيشن لاءِ رکيو وڃي ٿو، ۽ آخر ۾ چپ کي ريڊر ۾ لڳايو وڃي ٿو ته جيئن فوٽو ڪڍي فلورسنٽ سگنل پڙهي سگهجي.آپريشن وڌيڪ پيچيده آهي.آلودگي جو خطرو گهٽ آهي.
هر ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم جا پيرا ميٽر هن ريت اختصار ڪيا ويا آهن:
ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارم جي تشخيص جا اشارا آهن: ورهايل يونٽن جو تعداد، فلورسنٽ چينلز جو تعداد، آپريشن جي پيچيدگي ۽ آلودگي جو خطرو.پر سڀ کان وڌيڪ اهم شيء جي چڪاس جي درستگي آهي.ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارمن جو جائزو وٺڻ جو هڪ طريقو هڪ ٻئي جي تصديق ڪرڻ لاءِ ڪيترن ئي ڊجيٽل پي سي آر پليٽ فارمن کي استعمال ڪرڻ آهي، ۽ ٻيو طريقو صحيح قدرن سان معياري مواد استعمال ڪرڻ آهي.
dPCR جا فائدا
1.مڪمل مقدار حاصل ڪرڻ
2.اعلي حساسيت ۽ خاصيت
3.گھٽ ڪاپي نموني کي ڳولي سگھي ٿو
ڊي پي سي آر جا نقصان1. قيمتي سامان ۽ ريجنٽ 2. پيچيده آپريشن ۽ ڊگھو ڳولڻ جو وقت 3. تنگ ڳولڻ جي حد
هن وقت، پي سي آر ٽيڪنالاجي جي ٽن نسلن جا پنهنجا پنهنجا فائدا ۽ نقصان آهن، ۽ هر هڪ کي پنهنجي اپليڪشن جا شعبا آهن، ۽ اهو هڪ تعلق ناهي ته هڪ نسل ٻئي کي تبديل ڪري.ٽيڪنالاجي جي مسلسل ترقيءَ PCR ٽيڪنالاجيءَ ۾ نئين جانداريءَ جو انجڻ ڪيو آهي، ان کي ان لاڪ ڪرڻ جي قابل بنائيندي هڪ کان پوءِ هڪ ايپليڪيشن جي هدايت کي ان لاڪ ڪري، نيوڪليڪ ايسڊ جي سڃاڻپ کي وڌيڪ آسان ۽ درست بڻائي ڇڏيو آهي.
ذريعو: ڊاڪٽر يوان توهان کي جانچ لاءِ وٺي ٿو
تجويز ڪيل مصنوعات:
پوسٽ جو وقت: نومبر-18-2022
