• فيسبوڪ
  • ڳنڍيل
  • يوٽيوب

پي سي آر ريجنٽس جي شروعاتي مرحلي ۾ پرائمر ۽ پروبز جي ڪارڪردگي جي تصديق ڪرڻ ۽ سڀ کان وڌيڪ مناسب رد عمل جي حالتن جو تعين ڪرڻ اهي شرط آهن ته جيئن باضابطه تجربن جي هموار ترقي کي يقيني بڻايو وڃي.

تنهن ڪري اسان کي شروعاتي اسٽيج ۾ پرائمر پروب جي تصديق ڪرڻ جي ڪهڙي ضرورت آهي؟

مکيه اشارا آهن بيس لائين، ايمپليفڪيشن وکر، سي ٽي ويليو، ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي، گھٽ ڪنسنٽريشن نموني جي چڪاس، سي وي وغيره.

بيس لائين

بيس لائين PCR امپليڪشن وکر ۾ افقي لڪير آهي.PCR امپليفڪيشن جي رد عمل جي پهرين چند چڪرن ۾، فلورسنس سگنل گهڻو تبديل نٿو ڪري ۽ هڪ سڌي لڪير ٺاهي ٿو.هي سڌي لڪير بنيادي لائن آهي.

جڏهن اسڪريننگ پي سي آر پرائمر جي تحقيقات، ڌيان ڏيو ته ڇا بيس لائين سطح آهي.پرائمر پروب ڪنسنٽريشن جي پاڪائي بيس لائين تي اثر انداز ٿيندي، جيئن بيس لائين کي اڀرڻ يا زوال جو سبب بڻجندو.بيس لائين پڻ هڪ تمام وجداني اشارو آهي.
تجزيو

وڌائڻ وارو وکر

ٻيو وجداني اشارو amplification وکر جي شڪل آهي.اھو بھترين آھي ھڪڙو S-شڪل وارو وکر ثانوي ايمپليفڪيشن يا ٻين غير معمولي ايمپليفڪيشن وکر کان بچڻ لاءِ.
null

سي ٽي ويليو

انفليڪشن پوائنٽ سان ملندڙ چڪرن جو تعداد بيس لائين کان ايڪسپونيشنل ترقي تائين Ct قدر آھي.

ساڳئي نموني لاء، مختلف پرائمر جاچ جا نتيجا مختلف امپليفڪيشن وکر جي نتيجي ۾، ۽ لاڳاپيل Ct قدر امپليفڪيشن ڪارڪردگي ۽ مداخلت جي درجي کان متاثر ٿيندي.نظريي ۾، اسان جي چونڊيل پرائمر پروب جي Ct قدر جيتري ننڍي هوندي، اوترو بهتر.

تجزيو-3

وڌائڻ جي ڪارڪردگي

پي سي آر ايمپليفڪيشن جي ڪارڪردگي جو جائزو وٺڻ لاء سڀ کان وڌيڪ قابل اعتماد ۽ مستحڪم طريقن مان هڪ معياري وکر آهي، جيڪو پڻ وڏي پيماني تي محقق پاران تسليم ڪيو ويو آهي.ھن طريقي ۾ ھدف ٽيمپليٽس جي لاڳاپي تعداد کي ڪنٽرول ڪرڻ لاءِ نمونن جو ھڪڙو سلسلو ٺاھڻ شامل آھي.اهي نمونا عام طور تي مرڪوز اسٽاڪ حلن جي سيريل ڊيليوشن ذريعي ٺاهيا ويندا آهن، سڀ کان عام طور تي استعمال ٿيل 10-گنا ڊيليوشن آهي.گھٽيل نمونن جي هڪ سيريز کي استعمال ڪندي، معياري qPCR پروگرام استعمال ڪندي Cq قدر حاصل ڪرڻ لاءِ وڌايو، ۽ آخر ۾ ھر نموني جي ڪنسنٽريشن جي مطابق ھڪ معياري وکر ٺاھيو ۽ لڪير مساوات حاصل ڪرڻ لاءِ لاڳاپيل Cq قدر Cq= -klgX0+b، ۽ ايمپليفڪيشن ڪارڪردگي E=10(-1 /k1)-.جڏهن مقدار جي تجزيي لاءِ qPCR استعمال ڪيو وڃي ٿو، وڌائڻ جي ڪارڪردگي کي 90٪ -110٪ (3.6>k>3.1) جي حد ۾ هجڻ گهرجي.

تجزيو-4

گھٽ ڪنسنٽريشن نمونن جي چڪاس

جڏهن نموني جي ڪنسنٽريشن گهٽ آهي، مختلف پرائمر پروبس جي ڳولا جي شرح مختلف آهن.اسان نقل ڪرڻ لاءِ 20 گھٽ ڪنسنٽريشن جا نمونا چونڊون ٿا، ۽ پرائمر-پروب سسٽم سڀ کان وڌيڪ ڳولڻ جي شرح سان بھترين آھي.

تجزيو-5

تفاوت جي کوٽائي (CV)

10 نقل جا نمونا مختلف پرائمر پروبس سان ڳولي سگھجن ٿا نيوڪليڪ ايسڊ امپليفڪيشن جي چڪاس لاءِ ريگينٽ جي لائين معيار مطابق.

تجزيو-6

مقداري ريجنٽس:
درستگي
ھڪڙي بيچ جي اندر جي درستگي کي پورو ڪرڻ گھرجي: ٽيسٽ ڪنسنٽريشن جي لاگارٿمڪ قدر جي مختلف قسم جي گنجائش (CV،٪) آھي ≤5٪.جڏهن نموني جي ڪنسنٽريشن گهٽ هوندي آهي، تغير جي کوٽائي (CV،٪) آهي معلوم ڪرڻ جي ڪنسنٽريشن جي لوگارٿم جي ≤10%


ڪيفيت واري ريجنٽس:
درستگي
ھڪڙي بيچ جي اندر جي درستگي کي ملڻ گھرجي:

(1) Ct قدر (CV،٪) ≤5٪

ساڳيو نمونو 10 ڀيرا متوازي ۾ آزمايو ويندو آهي، ۽ امتحان جا نتيجا برابر هجڻ گهرجن


پوسٽ جو وقت: سيپٽمبر-18-2021